刘利
- 作品数：16 被引量：57H指数：4
- 供职机构：贺州学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”广西高等教育教改工程项目更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程文化科学农业科学更多>>
- 一个新的内切葡聚糖酶基因umcel5K的克隆、表达及其表达产物的酶学特性被引量：6
- 2008年
- 从水牛瘤胃内容物的添加滤纸为碳源的富集培养物中提取未培养微生物的总DNA,以柯斯质粒为载体构建了1个含约8000个克隆的宏基因组文库,对文库进行活性筛选获得1个既表达CMCase活性又表达4-MUCase酶活性的克隆。亚克隆及测序分析发现1个潜在的可编码333个氨基酸的ORF(Open Reading Frame),其蛋白质产物与1个来源于未培养细菌的糖苷水解酶家族5的纤维素酶Cel A的同源性最高,两者的一致性为53%,相似性为68%。将PCR扩增的该基因完整的ORF克隆入表达载体pET30a(+),在大肠杆菌中得到其过量表达产物。经过Ni-NTA纯化后,该表达产物(Umcel5K)具有CMCase活性和4-MUCase酶活性,其最适pH是4.5~5.0,最适温度是50°C。pH耐受性检测表明,该酶在pH4~4.5比较稳定。温度耐受性实验表明该酶不耐高温,在55°C以下比较稳定。经过镍柱纯化的酶液比活为26.15 U/mg。部分金属离子如Fe3+、Cr2+或Cu2+会抑制该酶的酶活,而另外一些金属离子如K+、Li+等对Umcel5K的活性影响不大。
- 谭婉新刘利胡亚林段承杰唐纪良冯家勋
- 关键词：未培养微生物宏基因组文库内切葡聚糖酶克隆
- 采油废水ABR厌氧处理系统中微生物的群落特征被引量：1
- 2016年
- 为了了解采油废水ABR厌氧处理系统中起主要作用的微生物种群,利用高通量测序手段分析了北海涠洲岛采油废水处理终端ABR厌氧反应池内的微生物群落特征。结果表明,ABR反应池内活性污泥中的细菌主要是产甲烷菌,主要来源于变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门和热袍菌门。目前已经形成了以产甲烷菌介导的稳定的功能降解菌群。真菌主要来源于三个门类:Ascomycota、Basidiomycota和Zygomycota,对于采油废水中的组分均有一定的降解作用。
- 刘宇辉刘利王帅章春芳谭自航解庆林
- 关键词：采油废水折流式厌氧反应器微生物群落
- 采油废水处理系统活性污泥中可培养菌群多样性研究被引量：3
- 2014年
- 采用6种不同培养基从采油废水处理系统活污泥中分离纯化得到200株菌,经16S rRNA基因序列系统发育分析表明,所分离菌株分属于5个大的系统发育类群的23个属的39个种。其中,α-变形菌纲占2.5%,β-变形菌纲占2.5%,γ-变形菌纲占49.5%,厚壁门占27.5%,放线菌门占18%。其中不动杆菌属是系统中可培养的最优势菌属。经物种多样性分析表明,所分离菌群Shannon多样性指数为3.13,均匀度指数为0.85。结果显示本系统具有较丰富的系统发育、遗传和物种多样性。代表菌株石油降解效果分析表明,不动杆菌属、红球菌属、芽孢杆菌属、肠杆菌属、草分支杆菌属、克雷伯菌属、假单胞菌属、产气单胞菌和硝酸盐还原菌属均对采油废水中石油类污染物具有不同程度的降解作用,其石油降解率均在30%以上,最高可达84.8%。
- 史利荣解庆林刘利王帅李艳红
- 关键词：采油废水系统发育分析多样性
- 浅谈ARCS动机激励模型对微生物学教学的启示被引量：2
- 2009年
- 微生物学是生命科学中必修的基础学科,是集理论、实践、创新于一体的学科,因此其课程教学过程也必须集观念、师资、教学内容、教学方法为一体来把握其课程建设。本文结合微生物学探讨了ARCS动机模型的应用问题,提高微生物学教学效果。
- 刘利
- 关键词：ARCS模型微生物学教学效果
- IPTG诱导浓度、时间及温度对重组促性腺激素释放激素基因表达的影响被引量：14
- 2006年
- 以人工合成的促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasinghormone,GnRH)/转运肽(TRS)基因与表达载体pGEX-6p-1相连的重组子(pGE-G)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(ED3)plyS。利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导条件对于表达产物的影响,以确定最佳IPTG诱导条件。结果表明:融合蛋白大部分以包涵体的形式存在,诱导温度为30℃;IPTG浓度为0.2mmol/L时,可溶性融合蛋白GST-GnRH/TRS表达量最大。光密度扫描对表达产物进行初步定量,表明表达产物约占菌体总蛋白的33.3%。
- 金元昌刘利苏晓艳李景鹏李会东周建红
- 关键词：促性腺激素释放激素外源蛋白
- 纤维糊精酶DM1与CBD的融合及融合酶性质分析被引量：1
- 2008年
- 纤维糊精酶(cellodextrinase)属纤维素酶类中的一类,可以从短链纤维素分子上水解糖苷键生成葡萄糖或纤维二糖。曾克隆了纤维糊精酶DM1的编码基因,该酶与生黄瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)的Cellodextrinase A的一致性为52%。通过人工合成基因的方法合成了细菌来源的3个分别为家族_4_9(GenBank索引号为AAA73869)、家族Ⅲc(GenBank索引号为BABB33148)和家族10(GenBank索引号为CAA60493)的纤维素结合功能域(CBD)和连接桥(linker)的DNA序列。通过把编码纤维糊精酶DM1(GenBank索引号为ACA61162)的催化功能域(CD)的DNA序列与合成的CBD和连接桥的DNA序列进行融合,构建了3个融合酶,并分别在大肠杆菌BL21中得到过量表达。纤维素结合实验表明,3个纯化的融合酶对结晶纤维素(Avicel)和滤纸粉末均有结合能力,融合酶CBD_4_9-DM1、DM1-CBD10和DM1-CBDⅢc与结晶纤维素(Avicel)结合的蛋白质占总蛋白的比例分别为58.60%、51.16%和21.13%,与滤纸粉末结合的蛋白质占总蛋白的比例分别为65.59%、60.47%和22.54%,证实与原始酶相比3个融合酶的CBD均有纤维素结合的功能。酶学特性研究表明,融合酶的最适pH、最适温度、pH稳定性和温度稳定性等没有显著改变,均未检测到3个融合酶有新的活性,但它们对p-nitrophenylβ-D-cellobioside(pNPC)、p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside(pNPG)和lichenan等底物的比活力显著降低。3个融合酶CBD_4_9-DM1、DM1-CBD10和DM1-CBDⅢc对pNPC的比活力分别为原始酶DM1的26%、2%和2%,对lichenan的比活力分别为原始酶DM1的12%、8%和2%,几乎检测不到后两个融合酶对pNPG的酶活。
- 庄永红刘利段承杰唐纪良冯家勋
- 关键词：基因融合DNA合成
- 融合基因umcel5N-CBM的构建、表达及融合酶性质分析被引量：1
- 2009年
- 碳水化合物结合组件(carbohydrate-binding module,CBM)是一些糖基水解酶分子上的结构域,它在纤维素酶降解不可溶纤维素中起着重要的作用。本研究的目的是检测一个新的内切葡聚糖酶Umcel5N(GenBank登录号为ACH67609)加上一个碳水化合物结合组件后得到的融合酶是否获得降解结晶纤维素的能力。本文将编码内切葡聚糖酶Umcel5N的催化结构域(catalytic domain,CD)的序列与编码Umcel6A的CBM序列通过接头序列进行基因融合,得到融合基因umcel5N-CBM,并实现了融合基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中的表达。研究结果表明,融合酶Umcel5N-CBM与结晶纤维素(avicel)以及滤纸粉末的结合能力比原始酶Umcel5N提高了约一倍,但未显示出降解结晶纤维素的新活性,说明在结晶纤维素的降解过程中,纤维素酶的催化功能域起到关键作用。
- 刘利段承杰封毅唐纪良冯家勋
- 关键词：内切葡聚糖酶融合基因酶学特性
- “三全育人”视域下高校学生体育锻炼问题及对策研究——以贺州学院为例被引量：2
- 2022年
- “三全育人,五育并举”是培养德智体美劳全面发展的社会主义建设者和接班人的必由之路,是立德树人人才培养体系的重要组成部分。为全面了解目前大学生的体育锻炼情况,课题组采用问卷调查法对在校大学生的体育锻炼情况进行调查与分析,研究发现影响大学生体育锻炼的关键因素主要有大学生体育锻炼意识薄弱、缺乏体育锻炼的兴趣、体育锻炼引导不全面、场地设施受限、锻炼时间不够、未养成良好的锻炼习惯等。鉴于此,为引导学生天天锻炼、健康成长,应通过加强体育教育引导、营造体育文化氛围、完善体育资源配置、合理设置教学课程、建立嘉奖促进机制等方式,帮助学生在体育锻炼中享受乐趣、增强体质、健全人格、锤炼意志。
- 梁小金谢金珍刘利
- 关键词：高校学生体育锻炼
- 未培养微生物的研究方法被引量：1
- 2007年
- 现代分子生物学技术绕过纯培养障碍对未培养的微生物进行广泛研究,其中,全程rRNA分析法和指纹分析法是目前应用于未培养微生物多样性研究的主要分子生物学方法与技术。另外,PCR扩增法、构建宏基因组文库法等方法的建立,给人类认识未培养的微生物提供了一种探知微生物多样性结构和功能基因组的方法。
- 刘利
- 关键词：多样性基因克隆
- 喀斯特植被恢复过程中土壤线虫的指示作用和生态功能
- 唐政李忠芳刘利陈春岚陈小香余炳锋苏辉兰
- ①课题来源与背景：该课题来源于2016年国家自然科学基金-地区基金项目《喀斯特植被恢复过程中土壤线虫的指示作用和生态功能》(编号41661073)。项目起止时间为2016年9月-2020年12月。已通过国家自然科学基金委...
- 关键词：
- 关键词：生态系统植被恢复技术
