刘少山
- 作品数：9 被引量：48H指数：5
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 透明质酸刺激活性物对人视网膜色素上皮细胞的抑制被引量：5
- 1999年
- 目的观察透明质酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ，ＨＡ）刺激活性物（ＨＡ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ，ＨＡＳＡ）对培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ，ＲＰＥ）细胞的作用。方法将不同质量浓度的ＨＡＳＡ加入ＲＰＥ细胞培养液，采用活细胞计数、四甲基偶氮唑盐（ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）比色法及氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法检测细胞活力，用流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）分析ＲＰＥ细胞周期。结果ＨＡＳＡ在１２．５～２００．０μｇ／ｍｌ范围及４８小时内对人ＲＰＥ细胞的抑制存在剂量－效应及时间－效应关系。最大细胞抑制率约４８．０％。ＦＣＭ显示ＨＡＳＡ作用后Ｇ１期细胞数较对照组增加７．２％，Ｓ期减少９．７％。结论ＨＡＳＡ在一定时间和剂量范围内对人ＲＰＥ细胞有抑制作用。
- 刘少山惠延年王雨生王强
- 关键词：细胞培养透明质酸玻璃体视网膜病变色素上皮
- PKC信号传导通路对缺氧人视网膜色素上皮细胞表达VEGF的作用被引量：18
- 2003年
- 目的 :探讨蛋白激酶C(PKC)信号传导通路对缺氧状态下培养的视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞表达VEGF的作用 .方法 :在缺氧状态下分别培养人RPE细胞 6 ,1 2和 2 4h ;将不同浓度的PKC激动剂佛波醇 1 2 豆蔻酰 1 3乙酸 (phorbol 1 2 myristate 1 3 acetate,PMA)及PKC抑制剂Chelerythrine分别加入人RPE细胞培养液 ,在缺氧状态下培养 2 4h .用免疫组化方法检测各组RPE细胞中VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析 .结果 :在缺氧状态下 ,RPE细胞对VEGF的表达较非缺氧组RPE细胞显著增加 (P <0 .0 1 ) ;较对照组 ,PMA可增强缺氧状态下RPE细胞VEGF的表达 (P <0 .0 1 ) ,Chelerythrine则减弱VEGF的表达 (P <0 .0 1 ) .结论 :缺氧诱导VEGF在RPE细胞中的表达 。
- 张鹏惠延年王雨生张星刘少山王海燕
- 关键词：视网膜色素上皮细胞缺氧PKCVEGF
- 人玻璃体膜及视网膜前膜免疫组化研究被引量：7
- 1999年
- 目的 鉴定人玻璃体膜及视网膜前膜的细胞成分。 方法 对增生性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）１２ 例和外伤性ＰＶＲ ８ 例患者经玻璃体手术取出的增生膜标本，用鼠抗人角蛋白、波形蛋白、神经胶质纤维酸性蛋白（ ＧＦＡＰ） 和ＣＤ１４等４ 种单抗做免疫组织化学ＡＢＣ 法染色并观察。 结果 １２ 例ＰＶＲ 膜抗角蛋白染色均为阳性，６ 例抗ＧＦＡＰ 阳性，１０ 例抗ＣＤ１４ 阳性；８ 例外伤性ＰＶＲ 膜２ 例抗角蛋白染色阳性，７ 例抗ＧＦＡＰ 阳性，３ 例抗ＣＤ１４ 阳性。未见抗波形蛋白阳性染色。 结论 视网膜色素上皮细胞和胶质细胞是ＰＶＲ 增生膜的主要细胞成分，但外伤性ＰＶＲ 膜中胶质细胞更多见。巨噬细胞参与ＰＶＲ
- 刘少山惠延年马吉献王剑波王雨生
- 关键词：玻璃体视网膜病变视网膜前膜PVR
- 人视网膜色素上皮细胞增生中表皮生长因子-表皮生长因子受体-有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导途径的激活及其作用被引量：6
- 2004年
- 目的 观察人视网膜色素上皮 (RPE)细胞增生中表皮生长因子 (EGF) -表皮生长因子受体(EGFR) -有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号传导途径的激活及其作用。 方法 人 RPE细胞分别在0 .1%、10 %小牛血清 (FCS) ,EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 ng/ ml)及上述各浓度 EGF与 10 %FCS联合作用下培养 3d。采用原位杂交及免疫细胞化学方法 ,检测 RPE细胞 EGFR m RNA及蛋白质表达。使用抗磷酸化细胞外信号调节激酶 (ERK) 1/ 2抗体进行免疫细胞化学染色 ,以观察 MAPK激活情况。 结果 EGF在10 %FCS改良 Eagle培养液 (DMEM)中作用时 ,其最佳刺激浓度为 1ng/ ml,EGF在 0 .1%FCS DMEM中作用时最佳作用浓度为 10 ng/ ml;EGF作用后 ,磷酸化 ERK 1/ 2抗体由在细胞浆中表达转移至在细胞核中表达。 结论 EGF呈浓度依赖性地促进 RPE细胞 EGFR m RNA及蛋白质的表达 ,且对 MAPK也具有浓度依赖性的核转位作用。推测 EGF- EGFR- MAPK信号传导途径可能在 RPE细胞增生中起重要作用 ,血清在此过程中有明显的促进作用。
- 闫峰惠延年刘少山王雨生马吉献郭长梅
- 关键词：表皮生长因子有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导途径增生性玻璃体视网膜病变
- 密度梯度离心法分离和纯化视网膜色素上皮细胞
- 2003年
- 目的 观察密度梯度离心法分离、纯化原代及传代视网膜色素上皮 (retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞的效果。 方法 将原代及传代后仍有成纤维细胞污染的人 RPE细胞分别各分为实验组和对照组 ,实验组用聚蔗糖 (ficoll) -泛影葡胺 (ficoll hypaque,F/ H ) (d=1.0 77g/ ml)进行等密度梯度离心分离 ,对照组用常规离心分离纯化 ,0 .4 %台盼蓝拒染活细胞计数 ;抗人细胞角蛋白 (cytokeratin,CK)间接免疫荧光染色 ,流式细胞术分析 ;荧光显微镜观察细胞形态 ;观察细胞的生长状态和初步克隆形成率 ;共聚焦显微镜观察细胞纯化结果及其生长状态。 结果 实验组细胞存活率均高于对照组 (P<0 .0 0 1) ,但是细胞数量减少 ;流式细胞术分析结果显示实验组 CK阳性细胞率高于对照组 (P<0 .0 0 1) ;ficoll离心组涂片细胞呈圆形 ,边界清晰 ,荧光染色均匀 ,活力好 ;实验组 RPE细胞形态较均一 ,贴壁时间短 ,进入分裂期快 ,初步细胞克隆形成率高于对照组 (P<0 .0 0 1) ;爬片生长的 RPE细胞 CK阳性细胞率两组组间比较差异有显著性的意义 (P均 <0 .0 0 1)。 结论 ficoll密度梯度离心法分离的 RPE细胞形态均一 ,生长一致性好 ,进入细胞倍增期时间短 ,细胞活力保持好 ;细胞纯化效果较好。
- 刘少山惠延年马吉献
- 关键词：密度梯度离心法视网膜色素上皮细胞RPE细胞培养
- 外源bax基因表达对人视网膜色素上皮细胞bcl-2表达的影响被引量：8
- 1999年
- ０引言视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞是视网膜重要的功能细胞之一，其异常增生或退行性变，都会引起感光细胞结构或功能障碍而致盲，详细机制尚不清楚［１，２］．我们的前期实验证实，ｂａｘ表达增强、或ｂｃｌ－２／...
- 刘少山惠延年王雨生金明
- 关键词：视网膜色素上皮基因表达BAX
- 原代人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养被引量：3
- 2003年
- 目的 :观察对原代人视网膜色素上皮 (retinalpig mentepithelium ,RPE )细胞进行冻存和复苏培养的效果 .方法 :将 6只尸供眼 ,常规酶消化法分离、纯化的人原代RPE细胞 ,分为两组 ,实验组为即刻进行常规梯度降温液氮冷冻保存 ,1wk后行常规复苏培养 ;对照组为细胞直接进行后续实验 .台盼蓝拒染观察细胞存活率及生长状态 ;计算细胞贴壁率 ;初步计算克隆形成率 .结果 :RPE细胞存活率分别为试验组 (90± 7) % ,对照组 (87± 1 5 ) % ,两组相比无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;两组接种细胞贴壁率从 2 4h开始分别为 (5 .0±3.1 ) %～ (6 1 .0± 7.3) %和 (1 5 .0± 6 .3) %～ (6 0 .0± 3.3) % ;培养 4 8h之前 ,两组之间存在统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,4 8h之后组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;培养 5 ,7和 1 0d初步克隆形成率两组分别为 (1± 0 ) % ,(1± 1 ) % ,(3± 1 ) %和 (1±0 ) % ,(3± 1 ) % ,(2± 1 ) % ,组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ,n=3) .冻存后复苏培养的RPE细胞生长状态良好 ,增生活跃 ,与对照组类似 .结论 :对原代人RPE细胞进行冻存 ,复苏培养的RPE细胞活性、存活能力、单细胞分裂增生能力不受影响 .
- 刘少山惠延年张鹏马吉献苏静波
- 关键词：细胞冻存细胞培养
- 胰蛋白酶对视网膜色素上皮细胞膜MHC Ⅱ分子表达的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨不同浓度胰蛋白酶联合EDTA和机械刮擦等措施,分离培养的视网膜色素上皮(RPE)细胞并保持细胞膜HLA-DR分子活性的最佳条件。方法 常规培养人第3～6代RPE细胞,终浓度为500U/ml的IFN-γ刺激诱导培养4d,采取0.125％胰蛋白酶联合0.01％EDTA或机械刮擦等方法分离细胞;台盼蓝拒染活细胞计数;活细胞HLA-DR间接免疫荧光染色,流式细胞术分析;荧光显微镜观察。结果 0.125％胰蛋白酶+0.01％EDTA+机械刮擦组分离活细胞率最高;FCM检测HLA-DR免疫荧光染色细胞阳性率,0.125％胰蛋白酶+0.01％EDTA+机械刮擦组、机械刮擦组与对照组存在显著性差异;相对单细胞平均荧光强度,机械刮擦组与0.125％胰蛋白酶+0.01％EDTA+机械刮擦组最高;荧光显微镜下可见机械刮擦组、0.125％胰蛋白酶+0.01％EDTA+机械刮擦组RPE细胞形态保持较好。结论 较低浓度胰蛋白酶结合EDTA联合机械刮擦方法能较好地保持RPE细胞膜结构及其糖蛋白的功能状态。
- 刘少山惠延年黄蔚张鹏王雨生马吉献
- 关键词：胰蛋白酶细胞免疫功能
- Bax过表达诱导培养的人视网膜色素上皮细胞凋亡观察被引量：6
- 2001年
- 目的 研究外源性促凋亡基因 bax过表达对培养人的视网膜色素上皮 (retinal pigment ep-ithelium,RPE)细胞凋亡的影响。 方法 通过脂质体 L ipofectin介导法用含人全长 bax基因片段的真核表达载体 PMDNA3- hbax质粒转化体外培养的 RPE细胞 ,用流式细胞仪检测细胞周期的变化 ,提取实验组细胞DNA进行 DNA梯度电泳。 结果 Zn2 + 可诱导 PMDNA3- hbax转化组 RPE细胞出现明显的凋亡峰 ,凋亡峰位于单倍体和二倍体之间 ,凋亡率为 36 % ,DNA电泳可见 DNA梯状条带 ,PMDNA3空载体组及未转染组 RPE细胞未见亚二倍峰和 DNA梯状条带出现。 结论 外源性促凋亡基因 bax过表达可诱导 RPE细胞凋亡。
- 刘少山惠延年王雨生
- 关键词：视网膜色素上皮BAX基因流式细胞术
