刘瑞
- 作品数：11 被引量：27H指数：3
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
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- 鱼类哈维氏弧菌PCR快速检测试剂盒及使用方法
- 本发明公开一种鱼类哈维氏弧菌PCR快速检测试剂盒及使用方法。该试剂盒包括7种试剂：裂解液、PCR反应液、dNTP混合物、Taq酶液、引物对、阳性对照及阴性对照等。哈维氏弧菌DNA的特异引物对：5’-GAAAACCAATA...
- 陈吉祥刘瑞徐广峰
- 文献传递
- 副溶血弧菌丝氨酸蛋白酶及溶血素的表达、纯化、定点突变及弧菌多联DNA疫苗的研制
- 弧菌病是海水养殖动物最严重的细菌性病害之一,其中副溶血弧菌是鱼虾贝类的主要弧菌病原,也是人类食物中毒的主要病原菌。
从致病性副溶血弧菌FYZ8621.4基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶基因(vps)。其由1779 bp组...
- 刘瑞
- 关键词：副溶血弧菌丝氨酸蛋白酶外膜蛋白DNA疫苗
- 哈维氏弧菌铁超氧化物歧化酶基因表达及免疫作用研究被引量：4
- 2012年
- 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是鱼虾等海水动物的重要病原菌。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)通过催化超氧阴离子自由基(O2)形成O2和H2O2,以保持细胞自由基产生和清除之间的平衡,在病原菌适应环境及细菌致病性方面发挥重要作用。用PCR从哈维氏弧菌基因组扩增得到600 bp的目的片段,序列分析表明与弧菌Fe-SOD的序列相似性为91%—99%。将目的基因片段克隆到原核表达载体进行表达。SDS-PAGE电泳分析显示纯化的蛋白为单一条带,分子量为27 kD。具有典型的Fe-SOD吸收光谱,对氯仿-乙醇和H2O2敏感,表明纯化的蛋白属于Fe-SOD。用邻苯三酚自氧化法测得酶的最适pH 7,最适温度20℃。该酶在pH6—8的范围内稳定,当温度超过40℃时酶的活力迅速丧失。纯化的重组蛋白免疫大菱鲆,4周后用致病性哈维氏弧菌进行人工感染试验,对大菱鲆的免疫保护率为80.00%。Western blot可以检测到免疫大菱鲆的血清中的特异抗体。
- 辛瑞晓易飞张蕊徐涛玄璞刘瑞贾俊涛陈吉祥
- 关键词：哈维氏弧菌超氧化物歧化酶基因免疫原性
- 哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大菱鲆的免疫保护作用被引量：10
- 2012年
- 从致病性哈维氏弧菌Vibrio harveyi SF1基因组中扩增获得含硫氧还蛋白还原酶(trxR)基因的1 133bp目的片段,连接至载体pMD19-T Simple。测序结果表明,目的片段含有960 bp trxR基因阅读框,编码为319个氨基酸残基的蛋白质。Blast分析结果显示,硫氧还蛋白还原酶蛋白氨基酸序列与哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧菌、灿烂弧菌、弗氏弧菌的硫氧还蛋白还原酶蛋白序列的相似性分别为99%、98%、96%、94%、92%。构建表达质粒pET-28a(+)/TrxR后转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示,重组蛋白的相对分子质量为34 000。用Ni琼脂糖亲和层析柱分离得到纯化的重组蛋白,将该蛋白以50μg/尾的剂量肌肉注射免疫大菱鲆Scophthalmus maximus,用ELISA法检测免疫1～4周内鱼血清中特异性抗体的效价。结果表明,特异性抗体效价持续升高,第2周则达到1∶128。免疫4周后用哈维氏弧菌SF1对大菱鲆进行人工感染,对照组鱼的死亡率为100%,免疫组鱼的死亡率为25%,相对免疫保护力为75%。试验表明,哈维氏弧菌TrxR蛋白具有较好的免疫原性,可作为潜在的亚单位疫苗用于哈维氏弧菌病的免疫预防。
- 陶然刘瑞王晴陈吉祥
- 关键词：哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶大菱鲆免疫原性
- 鳗弧菌rpoS基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2009年
- 鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。RpoS因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析表明含有完整的rpoS基因阅读框,编码333个氨基酸残基的蛋白质。与其他鳗弧菌菌株的rpoS基因序列相似性为100%,与霍乱弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌rpoS基因的序列相似性分别为78%,77%,77%,76%,75%,与大肠杆菌的序列相似性为71%。将该基因克隆于表达质粒pET-24d(+),在大肠杆菌中表达,用镍亲和层析柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的蛋白为单一条带,蛋白分子量约42 kDa,与理论分析值相近。研究结果为探索鳗弧菌对自然环境的适应及疾病发生机制提供了依据。
- 马莉陈吉祥刘瑞魏鉴腾姜荧安
- 关键词：鳗弧菌克隆纯化
- 哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗
- 本发明涉及哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗的制备方法和应用，其特征是将哈维氏弧菌oppA基因和副溶血弧菌tdh2基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-oppA融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括...
- 陈吉祥刘瑞何庆芳徐广峰
- 文献传递
- 鱼类哈维氏弧菌PCR快速检测试剂盒及使用方法
- 本发明公开一种鱼类哈维氏弧菌PCR快速检测试剂盒及使用方法。该试剂盒包括7种试剂：裂解液、PCR反应液、dNTP混合物、Taq酶液、引物对、阳性对照及阴性对照等。哈维氏弧菌DNA的特异引物对：5’-GAAAACCAATA...
- 陈吉祥刘瑞徐广峰
- 副溶血弧菌二价DNA疫苗及其制备方法和应用
- 本发明涉及副溶血弧菌二价DNA疫苗及其制备方法和应用，其特征是将副溶血弧菌tdh2基因和vps基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-vps融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括：利用双酶切技术使基因t...
- 陈吉祥刘瑞何庆芳徐广峰
- 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)tdh2基因和鳗弧菌(V.anguillarum)ompU基因二联DNA疫苗制备及其对大菱鲆(Scophthalmus maximus)免疫保护作用被引量：14
- 2011年
- 采用基因工程的方法,将副溶血弧菌的热稳定直接溶血素基因tdh2和鳗弧菌外膜蛋白基因ompU进行融合,在大肠杆菌中得到表达,并利用该融合基因构建二联DNA疫苗pEGFP-N1/tdh2-ompU。用DNA疫苗按10和50μg/尾的剂量通过肌肉注射免疫大菱鲆,对大菱鲆抵抗致病性副溶血弧菌和鳗弧菌的免疫效果进行研究。结果表明,DNA疫苗免疫的大菱鲆对副溶血弧菌感染的最高保护率为100%,对鳗弧菌感染的保护率为35%。被免疫的大菱鲆肌肉组织中能检测到融合蛋白表达,在血清中能检测到较高水平特异性抗体,DNA疫苗引起的体液免疫反应水平和保护效果与注射剂量有关。
- 刘瑞赵明君杨慧陈吉祥
- 关键词：副溶血弧菌鳗弧菌大菱鲆
- 哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗的制备方法和应用
- 本发明涉及哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗的制备方法和应用，其特征是将哈维氏弧菌oppA基因和副溶血弧菌tdh2基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-oppA融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括...
- 陈吉祥刘瑞何庆芳徐广峰
