刘群英
- 作品数：38 被引量：215H指数：11
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 从半合成抗体库克隆抗TNF-α人单链抗体被引量：14
- 1999年
- 通过噬菌体抗体库技术，不经免疫克隆抗ＴＮＦ－α人单链抗体，用固相化的人重组ＴＮＦ－α抗原对半合成噬菌体抗体库进行了４轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，可见到明显富集，从第３轮和第４轮洗脱下来的克隆中获得两株可特异结合ＴＮＦ－α的克隆，其可变区分别属于ＶＨ１、ＶＨ３和Ｖλ１亚群。
- 王琰刘群英化冰陈宇萍朱迎春陈晓穗
- 关键词：噬菌体抗体库TNFΑ
- 应用VIDAS免疫分析系统检测血清抗伯氏包柔螺旋体抗体
- 1994年
- 莱姆病(Lyme disease)是最近十年来才被认识的一种蜱媒传染性流行病.莱姆病的血清学诊断方法主要有间接荧光免疫法(IFA)酶免疫试验(EIA),免疫印迹法(WB).梅迪埃(Biomerieux)公司推出免疫诊断系统(vidas).能够自动定性和半定量地检查Lyme病的抗伯氏包柔螺旋体抗体(抗BB抗体).本法结合了酶和荧光免疫二种方法.碱性磷酸酶标记二抗的底物是4-methylumbelliferylphosphate.底物在碱性磷酸酶的催化下转变成4—methylumbelliferon,该产物在365nm光激发下可发出455nm的荧光,光强度被Vidas中的光扫描器测定出来.我们用Vidas检测了体检标本83份.阳性8份(9.6%);检测临床为结核病的标本20份,无一例阳性;临床诊断结节病或可疑结节病标本46份,阳性4份(8.7%);各种眼科疾病57份,阳性13份82.8%);口腔科疾病15份.阳性4份(26.7%);其他如皮肌炎、肝脾肿大发热待查、肺癌、肺部 阴影待查等标本17份,阳性2份(11.8%);检测了军科院微生物流行病研究所采自新疆、黑龙江可疑Lyme病的标本16份,阳性12份(75.0%).作者用vidas法和IFA法比较了165份标本,vidas检出阳性24份(14.5%),IFA法检出131份(79.4%),两法的一致性(符合率)为32.7%.
- 关淑珍尹国才韩善桥邵理成陈菡化冰刘群英戴炜
- 关键词：莱姆病
- 抗胃癌单抗3H11可变区氨基端序列对抗体活性的影响被引量：5
- 1999年
- 采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 方法， 利用第一骨架区通用引物扩增重链 Ｆｄ 段和κ链的基因， 克隆到 Ｆａｂ 表达载体中， 在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性． 根据已克隆的３ Ｈ１１ Ｖ Ｌ、 Ｖ Ｈ 的真实序列， 重新设计κ链及 Ｆｄ 段５′端引物， 分别将骨架区引物在κ链及 Ｆｄ 段５′端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列， 构建分别含有矫正后κ链或矫正后 Ｆｄ 以及二个链均得到矫正的 Ｆａｂ 表达载体， 这些载体在大肠杆菌中均获得类似水平的表达， 对任何一个链的矫正均可部分恢复 Ｆａｂ 段胃癌细胞的结合活性． 结果说明在构建小分子抗体时， Ｐ Ｃ Ｒ 引物引入的轻。
- 李竞王琰王卓智刘群英化冰陈宇萍朱迎春董志伟
- 关键词：免疫球蛋白可变区基因单克隆抗体
- 人抗-HBs Fab段基因的序列分析及表达被引量：35
- 1995年
- 对已建的噬菌体抗体库中分离的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现１９个克隆都具有相同的重链可变区基因，轻链可变区基因有４个相同，其余１５个未进行序列测定。ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ、ＪＨ分属ＶＨＶＨⅢ和ＪＨ６，Ｄ段为二个Ｄ基因的融合，ＶＫ，ＪＫ属于ＶＫＩ和ＪＫ４。
- 王琰刘群英徐建军王雅明陈竞华
- 关键词：HBSAG噬菌体抗体
- 金属螯合亲和层析法对抗HBsAg Fab段的纯化被引量：1
- 1996年
- 为了对大肠杆菌表达的Fab段进行简便有效的纯化,我们在Fab段表达载体上插入了一段编码六个组氨酸的DNA片段,使所表达的Fab段在Fd段的羧基端带有六个连续的组氨酸,通过金属螯合亲和层析法对大肠杆菌表达的Fab段进行纯化,利用不同pH梯度缓冲液洗脱,一步即可达到95%以上纯度的纯化.
- 王琰刘群英化冰朱迎春王雅明徐建军
- 从人源性噬菌体抗体库分离出1株含有异常序列的抗HBsAg Fab克隆被引量：11
- 1998年
- 曾从人源性噬菌体抗体库中筛选出１株抗人乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的Ｆａｂ克隆，为了筛选出新的抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段，采用抗原屏蔽法，用已得到的Ｆａｂ段封闭相应的抗原决定基，对该抗体库进行了再次筛选，得到了１株新的人抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段克隆，经序列分析发现其轻链可变区基因来源于Ｖκ１亚群和Ｊκ４基因，重链可变区基因来源于ＶＨ１亚群和ＪＨ４基因，但在ＶＨ第７７位和第７８位氨基酸残基之间出现了７个多余的氨基酸残基，经对基因数据库检索未能查到该序列的来源，但显然这段序列未影响抗体的抗原结合活性。
- 王琰刘群英化冰高荣凯陈宇萍朱迎春
- 关键词：噬菌体抗体库克隆
- RT—PCR多药耐药基因(mdrl)检测方法及应用
- 1996年
- 检测白血病或肿瘤细胞mdrl有多种方法,其中以RT-PCR法相对更灵敏、简单和特异。目前国内多用β_2微球蛋白(β_2MG)为内参照,以mdrl/β_2MG比值进行相对定量。现已发现β_2MG可受肿瘤影响。我们以细胞高表达的组织蛋白(H3.3)为内参照,建立了RT—PCR mdrl基因表达方法,并对临床10例标本进行检测。探讨了内参照应用的价值、存在的问题以及临床应用的意义。
- 马骢王玉芝武子涛向丹刘群英
- 关键词：多药耐药基因聚合酶链反应白血病
- 半合成抗体库的构建及鉴定被引量：24
- 1999年
- 目的构建半合成抗体库，不经免疫制备抗体。方法通过ＰＣＲ法，从人胎肝ＤＮＡ扩增基因组ＶＨ段基因，从Ｆｄ基因制备含有不同长度随机化ＣＤＲ３的ＦＲ３－ＣＤＲ３－Ｊ－ＣＨ１片段，然后用重叠ＰＣＲ法构建Ｆｄ库，与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库。结果通过各种组合多次建库，获得总容量为４×１０８的半合成抗体库，其Ｆｄ段和轻链基因的重组率均大于９０％，Ｆａｂ表达率为５０％。挑选２０个克隆测定ＣＤＲ３序列符合所设计的随机序列，用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体。
- 王琰化冰刘群英陈宇萍朱迎春
- 关键词：基因文库抗体生成
- 抗原表位定向选择的人源抗TNF-α Fab的鉴定被引量：4
- 1999年
- 目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列，用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ，用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性，并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同，属人ＶＨⅠ亚群；Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群；竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位；体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性；该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。
- 王卓智王琰李竞刘群英化冰陈宇萍朱迎春李振甫董志伟
- 关键词：肿瘤坏死因子EGS
- 重组人Fab金属螯合层析法纯化条件的研究被引量：8
- 1997年
- 在重组人Fab (rhFab)表达载体的羧基端插入六个组氨酸 ,使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附 ,可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化 .采用自制金属 (铜、锌金属离子 )螯合层析介质 ,以 pH和咪唑两种洗脱方法 ,对rhFab段的纯化效果进行了探讨 .结果显示 :铜离子螯合层析介质比锌离子螯合层析介质对rhFab的亲和能力更强 ;pH洗脱方法的重复性优于咪唑法 ;金属铜离子螯合层析法对rhFab进行一步纯化可得到纯度大于
- 朱迎春王琰刘群英化冰高荣凯
- 关键词：组氨酸金属螯合层析
