匡文斌
- 作品数：14 被引量：40H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- shRNA靶向干扰COX-2促进人肝癌裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨重组干扰质粒pshRNA-COX-2对人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡的促进作用。方法:重组干扰质粒pshRNA-COX-2转染Hep3B细胞并筛选后,将被成功转染的Hep3B细胞种植于裸鼠皮下,测量肿瘤大小,成瘤4周后处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线,RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织中COX-2 mRNA和蛋白表达,电镜观察和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果:与空白组相比,干扰组肿瘤组织中COX-2 mRNA和蛋白表达抑制率分别为48.5%和61.4%。干扰组最终瘤体大小明显小于阴性组和空白组
- 陈光辉涂植光孔飞飞邱欣欣成凤匡文斌李朴刘预
- 关键词：肝癌皮下移植瘤凋亡
- TFPI-2对人肝癌细胞生长增殖、凋亡及AFP合成的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨TFPI-2基因对人肝癌细胞Hep3B生长增殖、凋亡及甲胎蛋白AFP表达的影响。方法:将重组质粒PCDNA3.1-TFPI-2转染Hep3B细胞并经G418稳定筛选后,RT-PCR和Westernblot检测转染前后TFPI-2 mRNA和蛋白表达水平,采用CCK-8法、生长曲线观察TFPI-2对人肝癌细胞Hep3B生长增殖的影响,通过平板克隆形成实验观察单个细胞的增殖能力,RT-PCR检测AFP mRNA的表达,并用电化学发光法测定培养上清液中甲胎蛋白AFP含量,流式细胞仪检测细胞早晚期凋亡情况。结果:转染成功的Hep3B细胞检测到TFPI-2 mRNA和蛋白的表达;与转染空载体及未转染的细胞相比,转染TFPI-2的细胞生长增殖能力明显减弱;AFP mRNA表达抑制率为16.51%,AFP蛋白分泌明显低于对照组(P<0.01);流式细胞术检测转染TFPI-2的Hep3B细胞早期凋亡率明显增加(24.03%±7.28%vs 8.77%±3.66%)。结论:TFPI-2表达可显著抑制肝癌细胞生长和AFP的表达,同时还能诱导细胞早期凋亡。为进一步探讨靶向TFPI-2的肝癌基因治疗提供了实验依据。
- 秦晓林徐勇范晓卿李武县匡文斌成凤涂植光
- 关键词：肝癌组织因子途径抑制物-2甲胎蛋白
- 携人IL-12基因腺病毒的构建及其对Hep3B细胞增殖及TGF-β表达的影响被引量：7
- 2012年
- 目的:构建携带人IL-12的重组腺病毒,观察其对Hep3B增殖及TGF-β表达的影响。方法:PCR扩增IL-12基因,构建穿梭质粒pAdTrack-IL-12;穿梭质粒经Pme I线性化后转化AdEasier Cell,E.coli BJ5183内同源重组;PacⅠ酶切重组腺病毒质粒,转染AD293,包装病毒;病毒pAd-IL-12感染肝癌细胞Hep3B,以RT-PCR、Western blot检测白介素12的表达;MTT法检测肝癌细胞的增殖情况;RT-PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)的表达。结果:成功构建携IL-12基因的重组质粒,并成功包装可高效感染Hep3B的腺病毒pAd-IL-12;RT-PCR以及Western blot结果表明,病毒pAd-IL-12感染Hep3B后可高表达白介素12,并且与对照组相比Hep3B增殖能力显著降低(P<0.05),TGF-β表达量也降低(P<0.05)。结论:可高表达IL-12的腺病毒包装成功,感染肝癌细胞Hep3B后抑制其增殖,同时也下调TGF-β的表达,为进一步研究IL-12的肿瘤治疗作用奠定了基础。
- 成凤匡文斌王秦秦晓林范晓卿董晋豫梁勤东李朴涂植光
- 关键词：白介素12细胞增殖
- 重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签和hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,并检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法以pcDNA3/hNK4质粒为模板,采用高保真DNA聚合酶扩增hNK4基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-hNK4,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP,经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,经4轮扩增后,测定病毒滴度;将重组腺病毒感染AD-293细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测感染细胞中NK4基因的转录及蛋白的表达;MTT法检测Ad5-hNK4-EGFP对肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)诱导的MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;经包装及4轮扩增后,重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的滴度可达1.5×1011PFU/ml;经RT-PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的NK4基因能够在AD-293细胞中表达;HGF可促进MDA-MB-231细胞增殖,而Ad5-hNK4-EGFP可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建了表达hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,其可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞的增殖,为进一步深入研究HGF和NK4的功能、相互作用及作用机制奠定了基础,也为乳腺癌的靶向基因治疗提供了一个新的靶点。
- 匡文斌成凤秦晓林范晓卿王秦董晋豫梁勤东涂植光
- 关键词：腺病毒肝细胞生长因子NK4
- Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及Lipofectamine^(TM) 2000对4种细胞转染效率的比较被引量：2
- 2012年
- 目的将腺病毒Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000对4种细胞的转染效率进行比较,以获得Ad5F35-GFP适用的细胞种类及各类细胞适用的转染方法。方法采用携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000,分别转染人慢性粒细胞白血病细胞K562、人外周血单个核细胞(PBMC)、小鼠脂肪细胞3T3-L1和肝癌细胞Hep A1-6,于转染48 h后,倒置荧光显微镜下观察转染效率,RT-PCR法检测GFP基因mRNA的转录水平。结果 Ad5F35-GFP转染K562细胞、PBMC效率均较高,分别为61%和56%,但不能有效地转染3T3-L1(5%)、HepA1-6(15%)细胞;Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000均不能有效地转染3T3-L1细胞,转染效率分别为5%、5%和6%;Ad5-GFP、LipofectamineTM2000转染Hep A1-6细胞效率均较高,分别为73%和71%。结论 Ad5F35-GFP可有效转染人造血细胞和单核细胞,为相关基因的研究及治疗领域的应用奠定了基础。
- 成凤王秦匡文斌李朴董晋豫梁勤东涂植光
- 关键词：腺病毒转染效率
- HGF通过PI3K/Akt和p38 MAPK信号通路上调COX2诱导乳腺癌细胞的侵袭
- 目的：探讨HGF通过上调COX2对人乳腺癌细胞侵袭的促进作用及相关分子机制。 方法：将HGF分别处理MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞，Transwell实验检测细胞侵袭能力，荧光定量PCR和Western b...
- 匡文斌
- 关键词：PI3K/AKT信号通路环氧化酶-2
- 文献传递
- Y盒结合蛋白1单克隆抗体的研制、表位测定及其免疫学应用被引量：5
- 2012年
- 建立稳定分泌抗人Y盒结合蛋白1单克隆抗体(anti-YB-1 mAb)的杂交瘤细胞株,鉴定其表位与免疫学应用。将重组YB-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经ELISA法筛选鉴定、定株后采用腹水诱生法制备anti-YB-1 mAb;Protein G亲和层析法纯化mAb,ELISA法测定mAb效价、亚型及相对亲和力。采用抗原表位预测法鉴定anti-YB-1 mAb识别表位所在区域。Western blot和免疫组化鉴定mAb识别内源性YB-1的特异性。经筛选鉴定获得2株稳定分泌anti-YB-1 mAb的杂交瘤细胞(1-D9,3-E8);腹水抗体效价均≥1×10-6,亚型均为IgGl;1-D9和3-E8单抗识别表位分别位于(134-160aa)与(266-303aa)肽段。Western blot、免疫组化结果证实anti-YB-1 mAb能特异性识别内源性YB-1。该研究为YB-1免疫学定性、定量检测方法的建立、肿瘤靶向抗体治疗及进一步探讨YB-1的生物学功能奠定了基础。
- 李朴史静成凤梁勤东匡文斌王秦董晋豫涂植光
- 关键词：YB-1单克隆抗体抗原表位免疫学检测
- 肝细胞生长因子通过上调环氧合酶2表达增强乳腺癌细胞的侵袭能力被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响,以及该作用机制是否与调控环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)基因表达有关。方法:用30μg/m L的重组人HGF(recombinant human HGF,rh HGF)处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞6 h,采用蛋白质印迹法检测HGF受体c-Met及磷酸化c-Met的表达。用不同质量浓度的rh HGF分别处理2种乳腺癌细胞16 h,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。用不同质量浓度的rh HGF分别处理2种乳腺癌细胞不同时间,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测COX2 m RNA和蛋白表达水平的变化。将携带针对COX2基因的特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)的重组质粒psh RNA-COX2分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,同时用COX2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)处理作为阳性对照,然后采用Transwell实验检测沉默COX2基因表达后rh HGF对2种乳腺癌细胞侵袭能力的影响,采用蛋白质印迹法检测COX2和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达的改变。结果:MDA-MB-231和MCF-7细胞都能表达HGF受体c-Met,而rh HGF能诱导c-Met磷酸化,提示2种乳腺癌细胞均存在HGF作用靶点。与未处理组相比,rh HGF处理后乳腺癌MDA-MB-231及MCF-7细胞的侵袭能力明显增强(P值均<0.05),COX2 m RNA及蛋白的表达水平明显升高(P值均<0.05),且呈时间和剂量依赖性。而psh RNA-COX2沉默COX 2基因表达或者celecoxib处理后,rh HGF诱导的乳腺癌细胞的侵袭能力明显减弱(P<0.05),COX2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P值均<0.05)。结论 :HGF可通过上调乳腺癌细胞中COX2和MMP-9的表达,增强乳腺癌细胞的侵袭能力。
- 林艳匡文斌吴碧涛谢昌利刘翠颖涂植光
- 关键词：细胞因子类环氧合酶2肿瘤浸润肝细胞生长因子
- Y-盒结合蛋白-1基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察Y-盒结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组质粒pGSi2和阴性对照质粒HK转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中YB-1、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖活力、细胞周期及凋亡的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果 pGSi2组MDA-MB-231细胞较HK组细胞YB-1 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01);沉默YB-1表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,且细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达也较HK组明显下降(P均<0.05)。结论YB-1 shRNA可以沉默MDA-MB-231细胞中YB-1的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并抑制细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达。
- 邱欣欣涂植光孔飞飞陈光辉成凤匡文斌钟梁
- 关键词：RNA干扰乳腺癌基质金属蛋白酶类
- 重组腺病毒Ad5F35-IL-12感染不同单核-巨噬细胞的研究被引量：2
- 2013年
- 目的确定人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12在不同人单核-巨噬细胞中的表达。方法将人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12分别感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞,以及THP-1和U937单核细胞株及其经佛波酯(PMA)诱导后生成的巨噬细胞;感染48 h后荧光显微镜观察对相应细胞的感染效率,RT-PCR检测IL-12双亚基p35和p40的mRNA表达情况,ELISA检测细胞培养上清中IL-12p70的分泌水平。结果人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12可成功感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞以及THP-1和U937单核细胞株及其PMA诱导后生成的巨噬细胞,并分泌IL-12 p70蛋白,蛋白表达量从高至低依次是胸水巨噬细胞、PMA诱导后U937细胞、PMA诱导后THP-1细胞、U937细胞、外周血单个核细胞、THP-1细胞。结论人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12可以感染不同的单核-巨噬细胞,并成功表达分泌IL-12 p70蛋白。
- 王秦成凤张维理匡文斌李朴董晋豫梁勤东涂植光
- 关键词：IL-12单核巨噬细胞基因治疗
