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AiiA蛋白对铜绿假单胞菌毒力因子生成的影响: 2008年; 目的构建苏云金杆菌AiiA基因的真核表达载体并转染A549细胞，观测真核细胞表达的AiiA蛋白对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,pa）密度感应（quorum sensing）系统酰基高丝氨酸内酯（N-acylhomoserine lactone，AHL）信号分子及毒力因子合成的影响。方法质粒pET-AiiA经Nhe Ⅰ与Xho Ⅰ酶切后，将AiiA基因片段连接入真核表达质粒pEGFP-N2，脂质体转染A549细胞，提取细胞蛋白，Western blot检测AiiA蛋白表达。将蛋白提取物加入凡培养物中，观察Pa AHL信号分子及毒力因子绿脓素、弹性蛋白酶的生成情况。结果AiiA基因片段成功克隆入真核表达质粒pEGFP-N2，转染该质粒后的A549细胞能够表达AiiA蛋白，且该蛋白能够降低凡培养物中AHL信号分子水平，且绿脓素和弹性蛋白酶的生成减少。结论本研究成功构建了真核表达质粒pEGFP-N2-AiiA，转染细胞后表达的AiiA蛋白能够水解AHL信号分子，减少凡毒力因子的生成，故具有抗Pa感染的潜在价值。; 杨硕熊盛道熊维宁许淑云兰芬史雪梅徐国鹏陆小霞胡琼洁; 关键词：铜绿假单胞菌密度感应毒力因子

成体干细胞Niche与肺脏修复被引量：2: 2007年; 肺脏是个开放的复杂器官,覆盖其表面的上皮细胞持续暴露在病原微生物和大气污染物中,最易受到损伤,因而关于它的结构和功能修复问题一直是研究的热点。成体干细胞具有多向分化潜能,在不同niche的作用下可以分化成不同的细胞。肺脏的不同区域含有不同的干细胞,而且这些上皮干细胞在某些特定的条件下可以产生增殖和转分化,因而这些不同水平的干细胞可以通过不同的修复方式来实施肺脏结构和功能的维持和修复,但这些干细胞的来源及其在肺脏修复中的作用和机制并不十分清楚。因此对肺脏成体干细胞的研究进展进行综述以期对肺脏的修复有一个新的认识。; 史雪梅张惠兰熊盛道; 关键词：成体干细胞 NICHE

非小细胞肺癌中HMGA2的表达与细胞增殖的关系被引量：4: 2008年; 目的探讨High mobility group A2protein(HMGA2)的表达对非小细胞肺癌生长、转移的影响,与临床病理参数和细胞增殖的关系。方法应用免疫组化法检测38例非小细胞肺癌组织(23例鳞癌,15例腺癌)及癌旁的正常肺组织标本中HMGA2和Ki-67的表达。结果HMGA2和Ki-67在癌旁的正常肺组织中均不表达,而在肺癌组织中的表达阳性率分别为39.47%、44.74%,二者在肺癌组和癌旁的正常肺组织组之间差异有显著性(P<0.05)。HMGA2的表达在伴淋巴结转移的肺癌组织明显高于不伴有淋巴结转移的肺癌组织(P<0.05),而与其他临床病理参数包括肿瘤的分化程度、肿瘤大小和TNM分期以及细胞增殖指标Ki-67之间没有相关性。结论本研究显示HMGA2在非小细胞肺癌组织中异常表达,可能与肺癌的发生和进展有关。; 兰芬熊盛道熊维宁杨硕史雪梅徐国鹏陆晓霞胡琼洁; 关键词：非小细胞肺癌细胞增殖免疫组织化学

SPA基因启动子的克隆及转录靶向活性分析被引量：2: 2008年; 目的:克隆大鼠肺表面活性蛋白A(SPA)基因启动子并构建该启动子的荧光报告系统,探讨该启动子的活性及转录靶向性,为进一步研究SPA基因的表达调控机制和探讨靶向性基因治疗奠定基础。方法:①从GenBank中获取大鼠SPA基因序列,对其上游基因组序列进行计算机生物信息学分析,推断其上游序列约163bp的区域具有启动子功能。②利用PCR技术扩增SPA基因上游启动子序列,将其亚克隆入pGL3-basic中,构建pGL3-SPA质粒,将其亚克隆于pGL3-control中,构建pGL3-SPA-enhancer质粒。③将构建pGL3-SPA质粒、pGL3-SPA-enhancer质粒、pGL3-control质粒和pGL3-basic质粒分别与内参质粒pRL-TK共转染入A549细胞和H441细胞,用双荧光素酶报告系统检测该质粒在两种细胞中的荧光素酶活性表达。结果:酶切及测序结果均证实成功克隆了SPA基因启动子序列,并已将该序列正确插入到荧光素酶报告基因系列载体中。重组的pGL3-SPA-enhancer质粒、pGL3-SPA质粒转染H441细胞后可以检测到荧光素酶的高表达。结论:成功构建了含有SPA基因启动子序列的荧光素酶基因报告系统,证实了它在高表达SPA蛋白的细胞中有较高的转录活性,为下一步研究SPA基因功能及其转录调控以及探讨基因治疗的靶向性奠定了基础。; 史雪梅张惠兰熊盛道甄国华熊维宁张珍祥徐永健胡琼洁赵建平倪望; 关键词：启动子肺表面活性蛋白

大鼠对氧磷酶1真核表达载体的构建及在体外的表达被引量：2: 2008年; 目的构建大鼠对氧磷酶1(paraoxonase1,PON1)真核表达载体,并检测其在体外培养细胞中的表达及功能,为进一步探索运用其进行基因防治肺部感染奠定基础。方法利用RT-PCR扩增大鼠PON1编码区全长序列,克隆入pcDNA3.1(+),鉴定无误后,脂质体转染A549细胞及293细胞,Western印迹检测蛋白表达,并检测其芳香酯酶活性及对铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能。结果分别从大鼠肝组织中扩增出1153bp片段,克隆入表达载体后进行酶切鉴定和测序结果正确。转染细胞后能够表达目的蛋白,该蛋白具有芳香酯酶和AHLs内酯酶活性。结论成功构建了含有大鼠PON1真核表达载体,质粒能够在真核细胞中表达,能够有效地水解铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子。; 杨硕熊盛道熊维宁许淑云史雪梅徐国鹏兰芬陆小霞胡琼洁; 关键词：铜绿假单胞菌对氧磷酶

肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代培养及生物学特性比较研究被引量：5: 2008年; 目的:建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的改良体外原代培养法,并对其生物学特性进行比较研究。方法:AECⅡ用胰蛋白酶和胶原酶消化法分离后,接种于大鼠免疫球蛋白G(IgG)包被的培养瓶黏附纯化。将获得的AECⅡ用碱性磷酸酶(AKP)、电镜和肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)免疫细胞化学方法进行鉴定,并对它的SPA表达和转染特性与AECⅡ来源A549细胞进行比较研究。结果:胰蛋白酶和胶原酶消化加IgG黏附纯化后所得的AECⅡ,产量为2×107-3×107,纯度为75%-84%,细胞活力93%以上,AKP染色快捷简便。AECⅡ同A549细胞相比具有某些不同的特性。结论:采用IgG黏附纯化能提高AECⅡ纯度,AKP染色简便实用。对于AECⅡ细胞的某些特性研究发现其并不能完全用A549细胞系来代替。; 史雪梅张惠兰熊盛道甄国华熊维宁张珍祥徐永健胡琼洁赵建平倪望; 关键词：原代培养生物学特性

对氧磷酶1对铜绿假单胞菌绿脓素生成及其细胞氧化损伤的影响被引量：2: 2009年; 目的研究对氧磷酶1(PON1)在铜绿假单胞菌绿脓素生成及绿脓素所致细胞损伤中的作用,探讨其在防治肺部铜绿假单胞菌感染方面的可能作用。方法①以293细胞为表达细胞,分为pcDNA 3.1(+)-PON1转染组、pcD-NA3.1(+)-EGFP转染组及生理盐水组,转染细胞后,将细胞蛋白提取物或生理盐水混入铜绿假单胞菌培养物中,过夜培养后检测培养物中密度感知系统信号分子——酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactone,AHL)及绿脓素水平。②以A549细胞为效应细胞,分为转染组、未转染组及生理盐水组。转染组采用pcDNA3.1(+)-PON1转染A549细胞后并经G418筛选的阳性克隆细胞,未转染组采用普通A549细胞,培养液中加入绿脓素(30μg/ml),生理盐水组为培养液中加入生理盐水的普通A549细胞,观察细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果①pcDNA3.1(+)-PON1转染组铜绿假单胞菌培养物中AHL信号分子水平和绿脓素水平较生理盐水组和pcDNA3.1(+)-EGFP转染组均明显降低;②绿脓素作用后,未转染组细胞内氧化应激水平较生理盐水组明显升高,而转染组较未转染组有所下降。结论PON1不仅能够减少铜绿假单胞菌绿脓素的生成,而且可以减轻绿脓素所致的细胞氧化损伤,可能具有防治铜绿假单胞菌感染的潜在价值。; 杨硕熊盛道熊维宁许淑云兰芬史雪梅徐国鹏陆小霞胡琼洁; 关键词：铜绿假单胞菌对氧磷酶

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史雪梅

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