周洁
- 作品数：3 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国农业大学动物医学院国家兽药残留基准实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学理学轻工技术与工程更多>>
- 一种基于荧光微球标记的卡那霉素免疫层析定量方法的建立被引量：4
- 2015年
- [目的]卡那霉素是一种在奶牛兽医临床常用药物,其在牛奶中的残留不容忽视。荧光微球作为一种新型的荧光示踪物,近年来在小分子快速检测方面呈现出独特的优势,试验开展了卡那霉素荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在为牛奶中卡那霉素药物的快速筛选提供新型有效的检测手段。[方法]采用戊二醛法和过碘酸钠法制备了两种卡那霉素的包被抗原(KANA-GA-OVA1、KANA-I2-OVA2),抗卡那霉素的单克隆抗体通过蛋白G免疫亲和柱进行纯化后,采用碳二亚胺法与荧光微球进行了共价偶联,成功制备了抗体-荧光微球标记物。免疫层析试纸条方法采用微孔测定法。包被卡那霉素包被抗原的NC膜作为固相载体,荧光微球标记的单克隆抗体与样品混合,在微孔膜的毛细管作用下,包被抗原和待测样本中的药物来共同竞争有限的单克隆抗体,通过荧光测定包被抗原结合的抗体量来评价待测样本中卡那霉素药物的含量。[结果]灵敏度试验表明,微孔中加入0、6.25、12.5、25、50、100、200μg·L-17个浓度梯度的标准品溶液,卡那霉素药物浓度的增加,试纸条T线的荧光强度逐渐减弱,呈现抑制状态,以无标准品抑制的荧光峰高值为F0值,相应浓度标准品抑制时的荧光峰高值为F值,以F/F0为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。利用Originpro 8.0软件拟合,曲线符合四参数方程,R2为0.9998,IC50值为24.8μg·L-1,线性范围(以20%—80%抑制率对应的浓度计算)为9.5—100μg·L-1,最低检出限(以10%抑制率对应的浓度计算)为5μg·L-1。准确度和精密度试验表明,以25、50和100μg·L-13个浓度添加水平,平均添加回收率为78.4%—92.7%,批内变异系数为10.8%—12.4%,符合残留检测的需求。特异性试验表明,试验建立的卡那霉素荧光微球免疫层析方法对其他常见的氨基糖苷类药物的交叉反应率均<1%,说明方法特异性良好。[结论]�
- 徐飞周洁吴超王建芬丁双阳李秀波
- 关键词：免疫层析卡那霉素牛奶
- 2种不同检测模式下的林可霉素胶体金试纸条的比较研究被引量：3
- 2014年
- 本试验旨在研究检测牛奶中林可霉素(lincomycin,LIN)胶体金免疫层析试纸条。根据直接竞争抑制和间接竞争抑制2种模式,通过对金标包被原(抗体)量、pH、包被抗体(抗原)浓度、牛奶前处理等试验的优化,制备出2种满足实际检测需要的胶体金试纸条;二者的检测限分别为30和10ppb。在实际检测中,间接法在灵敏度、稳定性和检测时间等方面都优于直接法。
- 周洁徐飞吴超刘文丽丁双阳
- 关键词：林可霉素胶体金免疫层析牛奶
- 可视化凝胶酶联免疫吸附分析法检测牛奶中庆大霉素和卡那霉素被引量：8
- 2015年
- 建立了牛奶中同步测定庆大霉素和卡那霉素的可视化凝胶ELISA方法。在凝胶检测柱的两个检测层中填充CN-Br活化的Sephrose 4B凝胶-羊抗鼠Ig G作为固相载体,加入药物的单克隆抗体与载体结合,酶标抗原和待测样本中的药物共同竞争有限的单克隆抗体,通过3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物显色定性判断药物的存在。本方法采用一步法,检测时间仅为15 min,对庆大霉素和卡那霉素的灵敏度为2.0μg/L,对牛奶中的两种药物检出限(Cut-off值)均为5μg/L。牛奶盲样比对实验表明,本方法与超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定结果相符。
- 徐飞栗静雅周洁刘茂林刘义明王建芬丁双阳李秀波
- 关键词：庆大霉素卡那霉素牛奶
