孙亚宁
- 作品数：114 被引量：230H指数：8
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 一种猪瘟病毒强毒株和弱毒株鉴别检测试纸
- 本发明涉及一种家畜疫病感染与免疫的鉴别检测器具，特别是涉及一种猪瘟病毒强毒和弱毒鉴别检测试纸，由支撑板，样品垫，金标垫，检测膜和吸水垫构成，检测膜上含有强毒检测线T1“│”，弱毒检测线T2“│”和质控线C“│”印迹。鉴别...
- 郭军庆邢广旭王丽孙亚宁杨继飞杨艳艳郅玉宝柴书军李青梅王瑞宁邓瑞广张改平
- 麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法
- 本发明涉及一种麻保沙星快速检测试纸卡及制备方法，试纸卡包括外壳和试纸芯，试纸芯包括底板和底板上的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，胶体金标记垫吸附有麻保沙星的特异性抗体，检测反应区设有麻保沙星偶联载体蛋白溶液印制...
- 张改平孙亚宁王方雨滕蔓李青梅杨继飞柴书军
- 文献传递
- 一种口蹄疫病毒免疫抗体评价及感染与免疫鉴别诊断二联试纸条
- 本发明公开了一种口蹄疫病毒免疫抗体评价及感染与免疫鉴别诊断二联试纸条，该试纸条包括利用口蹄疫病毒VP1表位多肽人工抗原印制的检测线1，和利用口蹄疫病毒非结构蛋白表位多肽人工抗原印制的检测线2。本发明制备的人工抗原具有容易...
- 张改平杨苏珍孙亚宁邢广旭刘运超王方雨柴书军邓瑞广
- 文献传递
- 赭曲霉毒素A人工抗原的合成与鉴定被引量：13
- 2011年
- 采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法将赭曲霉毒素A(OTA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原OTA-BSA,采用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将赭曲霉毒素A(OTA)与卵清白蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原OTA-OVA。紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果初步表明偶联成功。用OTA-BSA分10μg/只和50μg/只两个剂量分别免疫BALB/C小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗血清,效价可达1∶104,抑制效价达14.7ng,证明偶联成功,并显示低剂量免疫可以提高小鼠pAb的敏感性。本研究为OTA单抗的制备及其免疫学分析方法的建立奠定了基础。
- 孙亚宁胡骁飞邓瑞广职爱民刘庆堂柴书军王磊宋幸辉侯玉泽张改平
- 关键词：赭曲霉毒素AELISA
- 基于二聚体核衣壳蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体iELISA检测方法建立
- 2024年
- 为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),设计表达二聚体N蛋白(N-dimer),并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体间接酶联免疫吸附试验(Indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)检测方法。首先选取当前PRRSV国内优势毒株NADC30-like N蛋白基因序列,通过(GGGGS)3linker将N蛋白基因序列串联,经密码子优化合成后构建N-dimer重组表达载体。利用原核表达系统进行诱导表达,并通过镍离子螯合亲和层析法进行纯化。Western-blot分析其与PRRSV阳性和阴性血清的反应性;冻融法比较N-dimer与单体N蛋白(N-monomer)的沉淀析出情况;ELISA法比较N-dimer与N-monomer的免疫反应性。以N-dimer作为包被抗原建立PRRSV抗体iELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化,验证其特异性、敏感性、重复性,并应用于临床血清样品检测。结果表明,在16℃、0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导16 h,N-dimer获得大量可溶性表达。Western-blot结果表明,N-dimer能够与PRRSV阳性血清发生特异性反应;相较于N-monomer,N-dimer能够稳定保存,并且免疫反应性更佳。成功建立了基于N-dimer的PRRSV抗体iELISA检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性;与商业试剂盒结果进行比较,其阳性符合率为96.88%,总符合率为96.86%,符合率高。综上,成功制备了稳定性好、免疫反应性佳的N-dimer,并基于N-dimer建立了PRRSV抗体iELISA检测方法。
- 赵啸乔松林孙亚宁钱祁昇李睿张改平
- 关键词：核衣壳蛋白二聚体间接ELISA
- 禽网状内皮组织增生病病毒和J亚群禽白血病病毒快速联检试纸条
- 本发明公开一种一步法快速检测禽网状内皮组织增生病病毒REV和J亚群禽白血病病毒ALV-J的试纸条，包括不吸水的支撑层、附着在支撑层上的吸附层，吸附层由样品吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水层依次拼接而成；纤维素...
- 滕蔓罗俊张改平崔治中江国托李学伍郭军庆赵鹏卢清侠郅玉宝王方雨职爱民梁跃孙亚宁史西保
- 文献传递
- 快速检测大豆致敏蛋白β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸及制备方法
- 本发明涉及一种快速检测大豆致敏蛋白β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸及制备方法，该试纸基于双抗体夹心的原理检测β-conglycinin，试纸含有支撑层、吸附层、保护层，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤...
- 胡骁飞王耀魏凤仙王方雨邢广旭孙亚宁
- 文献传递
- 猪瘟抗体检测试纸研发及制备工艺的优化被引量：8
- 2019年
- 为研制灵敏、准确、稳定的猪瘟抗体检测试纸,对胶体金标记猪瘟病毒(CSFV)Erns-E2蛋白的pH、封闭液、保存液及样品垫等试纸生产各环节的保护剂、稳定剂及缓冲系统进行优化,确定猪瘟抗体检测试纸生产的工艺参数,使试纸的准确性、灵敏度及稳定性满足批量生产要求。该试纸在室温干燥条件下可稳定保存1a以上,为实现猪瘟抗体检测试纸的商业化及广泛应用奠定基础。
- 孙亚宁孙亚宁王丽杨苏珍杨苏珍陈鑫鑫张立林邓瑞广邓瑞广
- 关键词：猪瘟抗体试纸
- 非洲猪瘟病毒野毒感染与基因缺失毒株双重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒
- 本发明涉及一种非洲猪瘟病毒野毒感染与基因缺失毒株双重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒。采用TaqMan探针荧光定量检测法，建立了针对B646L基因和MGF505‑2R基因的双重荧光定量PCR检测方法，可以有效区分野...
- 张改平郭振华金前跃孙亚宁李青梅杨继飞王方雨乔松林郭军庆
- 文献传递
- T2毒素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备被引量：6
- 2013年
- 合成并鉴定T 2毒素人工抗原,通过动物免疫制备敏感性高、特异性好的鼠源T 2毒素多克隆抗血清。采用琥珀酸酐法将T 2毒素活化为T 2HS,T 2HS在碳二亚胺(EDC)作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原T 2 BSA和检测抗原T 2OVA,经鉴定后,分别按30、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定其敏感性和特异性。结果表明,免疫的6只小鼠效价均达到了1∶104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,其半数抑制质量浓度(IC50)为324ng/mL,且具有良好的特异性。成功合成了T 2毒素人工抗原,制备了多克隆抗体血清,为T 2毒素单克隆抗体的制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。
- 王坤李清州胡骁飞李文君孙亚宁王方雨职爱民邓瑞广张改平
- 关键词：T2毒素人工抗原ELISA
