孙晞
- 作品数：10 被引量：66H指数：5
- 供职机构：暨南大学理工学院食品科学与工程系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程生物学轻工技术与工程更多>>
- 荧光实时定量PCR检测单核李斯特菌方法学建立及应用被引量：11
- 2005年
- 目的建立检测单核细胞增多性李斯特菌的荧光定量PCR方法,并利用此方法检测人工污染的牛奶中单增李斯特菌菌量。方法选择单增李斯特菌特异性的基因ListeriolysinO基因为靶目标设计引物,采用煮沸法抽提纯单增李斯特菌株(1/2a)DNA,建立SYBRGREEN实时定量PCR检测体系。结果定量PCR对李斯特菌可产生特异扩增信号,对其他菌(大肠杆菌)无响应。标准曲线的相关系数为0.9521。最小检菌量约为100个菌落形成单位/反应体系。在人为污染牛奶检测中,与传统细菌计数方法结果相比,相关系数为0.839。结论实时定量PCR是一种快速、灵敏的定量检测单增李斯特菌的方法,可用于牛奶样品的检测。
- 孙晞吴建中张宁欧仕益唐书泽
- 关键词：荧光实时定量PCR
- 酶切保护PCR分析检测环境中二恶英类化合物的方法学研究
- 二恶英类化合物(DLCs)是包括二氯苯并二恶英(PCDDs)、二氯苯并呋喃(PCDFs)和多氯联苯(PCBs)等一大类化合物的总称,由于其在环境中分布广泛,不易于生物及化学降解,毒性高以及生物富集和生物放大的特性,对人和...
- 孙晞
- 关键词：二恶英类化合物生物检测TCDD
- 文献传递
- 食品安全危机中大学生的安全意识及行为影响因素研究被引量：27
- 2006年
- 目的:了解我国在校大学生在当前食品安全事件频发的危机中食品安全意识、消毒行为及其影响因素,为制定相应指导措施提供依据。方法:利用问卷调查方式抽查332个来自大陆、港、澳3地的在校大学生,调查其食品安全知识、卫生习惯、安全意识及消费行为,应用方差分析和相关分析,探索影响大学生消费行为的因素及各因素之间关系。结果:在校大学生当前消费行为较为理性,影响因素包括年级、专业、人际关系及饮食卫生习惯等;大学生对五年内达到食品安全信心不足,但能积极出谋划策。结论:应加强健康饮食习惯的宣教,强调消费者的监督意识。
- 孙晞唐书泽黄才欢张志森杨爱华
- 关键词：食品安全食品安全意识
- PCDFs的Ah受体结合能力的定量结构效应关系被引量：5
- 2004年
- 应用单苯环氯取代方法取G1～G10 10个分子结构描述符,通过正向逐步线性回归方法构建对于Ah受体结合能力的定量结构-性质相关(QSAR)模型.与有关文献相比,此模型能更好地预测多氯代二苯并呋喃(PCDFs)竞争结合Ah受体logEC50值,各自变量间不存在共线性.模型可以较好地反映PCDFs分子Ah受体结合能力与其分子氯取代位点之间的关系.
- 李芳孙晞李柏生王小利徐顺清
- 改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用
- 2006年
- 目的改进聚合酶链反应(PCR),并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌(E.coliDH5α),筛选阳性克隆,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSF lA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛未呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。
- 张莉君王先良张迟孙晞徐顺清
- 关键词：甲基化聚合酶链反应E-CADHERINRASSF1A
- 改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态被引量：5
- 2006年
- 目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序。结果HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。
- 张莉君王先良孙晞徐顺清
- 关键词：甲基化聚合酶链反应
- 二恶英类化学物质生物检测方法研究进展被引量：11
- 2007年
- 应用生物检测手段(如生物法、免疫测定及体外受体结合实验等)检测环境污染物是环境检测领域一个研究热点,特别在二恶英类化合物的痕量分析中的作用令人瞩目。本文综述了用于二恶英类化合物筛选的几类生物检测方法的原理和优缺点,对各种方法进行了比较,指出建立二恶英两级检测的体系的合理性以及发展方向。
- 孙晞欧仕益彭喜春
- 关键词：二恶英类化合物生物检测
- 外切酶保护PCR快速检测垃圾焚烧飞灰中二噁英类化合物被引量：6
- 2005年
- [目的]利用外切酶保护PCR分析(exoucleaseprotectionmediated-PCRassay,EPM-PCR)方法检测焚烧炉飞灰中的二(?)英类化合物(dioxins-likechemicals,DLCs)的毒性当量(toxicequivalencyquantities,TEQs)。[方法]将两份5g飞灰样品经过抽提、浓缩及纯化等前处理步骤后,采用EPM-PCR方法检测其中的二(?)英类化合物的TEQs。与高分辨气相色谱-质谱联用技术(high-resolutionchromatographycombinedwithhigh-resolutionmassspectrometry,HRGC-HRMS)检测结果相比较,分析其差异原因。[结果]两份垃圾焚烧飞灰样品TEQs值分别为1288ng/kg和16000ng/kg,相当于根据HRGC-HRMS检测结果估算出来的TEQ值的1.61倍和2.63倍。EPM-PCR检测TEQ值偏高可能由于检测物中包含一些被化学方法排除的物质(如多氯联苯)造成。[结论]结合有效的前处理过程,EPM-PCR可快速地用于实际样品的定性与定量检测。
- 孙晞徐顺清
- 关键词：二噁英类化合物毒性当量
- 配体活化多环芳烃受体与二恶英反应元件结合能力的测定
- 2005年
- 目的 :2 ,3,7,8-四氯化二苯并二恶英 (TCDD)激活细胞溶质中多环芳烃受体后形成的复合物可与含二恶英反应元件的DNA探针结合 ,本研究利用新建立的外切酶保护PCR方法测定此结合亲和力 ,为评估配体的生物或毒效应提供依据。方法 :将 2 0nmol/LTCDD溶液与 10 0 μlSD大鼠肝细胞溶质温育 ,再与 0～ 15nmol/L含二恶英反应元件的寡核苷酸探针作用形成复合物 ,用核酸外切酶Ⅲ和S1核酸酶进行消化后 ,利用SYBRGREEN荧光适明定量PCR测定其诱导产生的结合DNA含量 ,绘制饱和曲线。经过数学变换估算配体—AhR复合物与DNA结合反应的宏观解离常数 (Kd和最大受体结合量 (Bmax)。结果 :绘制出TCDD活化AhR结合DNA的饱和曲线 ,计算得 :宏观解离常数Kd值为 1. 7± 0 . 2 (nmol/L) 2 ,DNA探针的最大受体结合量为 (14 6 7± 12 3)fmol/mg蛋白。结论 :外切酶保护PCR分析可测定配体诱导产生的AhR -DNA结合活性 ,为二恶英作用强度提供信息。
- 孙晞徐顺清
- 关键词：受体结合DNA探针反应元件解离常数DNA结合活性TCDD
- 一种新的酶切保护PCR分析方法及其在二恶英类化合物检测中的应用
- 2004年
- 背景与目的:建立一种灵敏、快速、无放射性污染的生物方法来检测环境样本中的二恶英类化合物。 材料与方法 :二恶英类化合物可以活化胞浆内芳香烃受体(AhR)使之与一段包含特定序列的双链DNA结合 ,结合的DNA因受蛋白质保护可抵抗核酸外切酶消化而保留下来 ,痕量的保留DNA通过PCR检测出来。根据此原理本研究将TCDD溶液加入到含AhR及相关蛋白的细胞溶质中 ,在体外与含二恶英反应元件的DNA作用形成二恶英_AhR_DNA复合物 ,用核酸外切酶ExoⅢ和S1核酸酶进行消化后作PCR ,通过琼脂糖电泳可以检测目的DNA是否存在 ;同时以有机溶剂DMSO设为对照。结果 :在实验组用琼脂糖电泳可以检测到期望大小片段的DNA,而对照组为阴性。结论 :该方法可作为环境样本中二恶英污染的生物检测手段 ,具有灵敏。
- 孙晞李芳陈启政孙纳王小利严红徐顺清
- 关键词：二恶英类化合物芳香烃受体
