孙自勇
- 作品数：32 被引量：61H指数：6
- 供职机构：南京大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 金属铂配合物与细胞色素C修饰体系研究
- 孙自勇
- 肽图法对细胞色素C中铂修饰位点研究
- 1993年
- 生物体系电子转移反应的研究是当今生物无机化学的一个热点,许多重要的生命过程如光合作用、呼吸链氧化磷酸化等均涉及电子转移。电子转移反应速率受驱动力、电子给体与受体之间的距离以及传递介质等因素的影响。
- 孙自勇钱卫平秦素珍朱德煦
- 关键词：细胞色素C铂
- Hirulog18在大肠杆菌中的表达及其生物学活性检测
- 2006年
- 以化学合成的H iru log 18基因为模板,经PCR扩增、限制性内切酶Xho I和Kpn I消化,将编码H iru-log 18的基因片断插入表达载体pET-32b中编码硫氧化还原蛋白(Trx)基因序列的下游.用重组质粒转化感受态大肠杆菌-BL21(DE3),并用IPTG诱导表达Trx-H iru log 18融合蛋白.复性、肠激酶酶切、N i-Sepharose和HPLC纯化后,用质谱测定其分子量并进行活性测定.检测结果表明构建的PET-32b/H iru log 18能够在大肠杆菌中高效表达,表达的H iru log 18具有较低的凝血酶抑制活性并能够竞争抑制Angiomax活性.
- 王东孙自勇陈俊勇邓华玲王莹唐艳春刘建宁
- 关键词：克隆融合蛋白HPLC
- 液相色谱与串联质谱偶联在蛋白质序列分析中的应用被引量：15
- 2003年
- 本文对液相色谱与电喷雾电离串联质谱仪偶联 (LC ESI MS MS)技术分析蛋白质序列的方法进行了详细介绍。并以尿激酶原的一个酶解片段的LC ESI MS MS图谱为例 。
- 孙自勇吴盛王石泉刘建宁
- 关键词：蛋白质序列分析液相色谱多肽氨基酸序列尿激酶原
- 重组人脑钠素在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定被引量：7
- 2004年
- 人脑钠素(hBNP，human brain natriuretic peptide)是心室分泌的由32个氨基酸组成的多肽激素．临床研究表明，hBNP是治疗充血型心衰竭的一种安全有效的多肽药物．化学合成脑钠素全基因，以pET32a为表达载体，构建了硫氧还蛋白-脑钠素(thioredoxin—hBNP)融合蛋白表达质粒，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，融合蛋白的表达量占全菌蛋白量的25％以上．融合蛋白经肠激酶裂解、Zn—Sepharose亲和层析和C4反相高效液相层析，从每升培养液中可获取4mg rhBNP，纯度达到95％．经质谱测定，rhBNP样品的分子量为3464Da．体外活性测定结果表明，rhBNP样品对兔胸主动脉条具有显著的血管舒张效应，其ED50为(2．24±0．58)×10^-6mg／mL．
- 孙自勇朱镇华陈均勇刘莉莉张巍杨庆张菁刘建宁
- 关键词：大肠杆菌纯化肠激酶酶解多肽激素
- 牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定被引量：12
- 2004年
- 用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.
- 孙自勇陈均勇陈新园汪晶田鹏鹏吴盛刘建宁
- 关键词：肠激酶毕赤酵母分泌表达纯化免疫印迹
- 重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定
- 2004年
- 用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白．经凝血因子Xa酶切、Zn—Sepharose亲和层析以及反相高效液相色谱纯化获得3．8mg重组人胸腺肽．小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系．
- 吴盛陈新园陈均勇刘莉莉朱镇华孙自勇张燕刘建宁
- 关键词：胸腺肽大肠杆菌纯化酶解
- 重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2004年
- 将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1 34)纯品.每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1 34).经质谱测定,所得样品的分子量为4117.0Da,与rhPTH(1 34)理论分子量一致.
- 陈均勇陈新园孙自勇刘莉莉朱镇华汪晶吴盛王石泉刘建宁
- 关键词：甲状旁腺激素大肠杆菌纯化FACTOR
- 重组人尿激酶原氨基末端片段的制备及活性测定被引量：1
- 2004年
- 尿激酶原的N 末端135个氨基酸片段包含了表皮生长因子结构域和环柄结构域,参与了尿激酶原和其受体的结合以及尿激酶原诱导的化学趋化活性.利用RT PCR,从人脐带静脉内皮细胞中克隆ATF基因.将ATF基因插入pET 29a(+)中构建表达质粒pET 29a(+)/ATF,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达及纯化后,从每升培养液中获得15mgrhATF,其纯度超过95%.活性测定结果表明rhATF能够阻断尿激酶原与尿激酶受体的结合,并能抑制尿激酶对纤溶酶原以及纤溶酶对尿激酶原的激活.
- 汪晶陈新园孙自勇姚宏伟陈均勇刘建宁
- 关键词：ATF尿激酶受体纯化活性测定多肽
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究被引量：2
- 2004年
- 将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性、TI Sepharose亲和层析、SP Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g,纯度达95%以上,比活大于500000IU/mg,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准.其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符.同时进行了等电点测定及肽图分析等性质研究.
- 朱镇华孙自勇陈于红张菁王石泉杨庆刘莉莉丁楅森陈新园刘建宁
- 关键词：发酵活化纯化蛋白
