- 变异链球菌、表兄链球菌复合防龋DNA疫苗的构建
- 目的：构建包含变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)和表兄链球菌(Streptococcus sobrinus,S.sobrinus)两种致龋菌的抗原片段的防龋DNA复合疫苗pGJGAC...
- 孙静华
- 关键词：变异链球菌防龋疫苗致龋菌特异性抗体
- 防龋疫苗的研究进展被引量：1
- 2008年
- 龋病是一种极为常见的细菌感染。在巴西和中国等众多国家该病甚至呈流行趋势。由于严重受累的人群多为儿童,因此亟需一种有效并可普及的抑制龋病流行的方法。研究发现,口腔中的一组微生物-变异链球菌属(MS)与龋病密切相关,临床前研究也证实了用免疫的方法干预此病的可行性。可用于防龋疫苗的合适抗原、适宜的目标人群以及合理的给药时间等问题已逐渐清晰。本文就防龋疫苗研究的必要性及进展作一综述,以期为防龋疫苗的后续研究提供参考。
- 孙静华樊明文牛玉梅
- 关键词：龋病防龋疫苗候选抗原
- 表兄链球菌致龋性与免疫防龋的研究进展被引量：1
- 2008年
- 表兄链球菌是变异链球菌群中的一种重要致龋菌,检出率逐渐提高。与变异链球菌相比较,表兄链球菌的产酸性和耐酸性更强,与高度龋活性的关系更为密切,日益引起学者们的重视。下面就该菌的致龋性及其与免疫防龋相关的研究进展作一综述,以期对龋病病因学和免疫防龋的深入研究提供参考。
- 孙静华牛玉梅樊明文
- 关键词：检出率致龋性免疫防龋
- 远缘链球菌GTF催化活性蛋白及其多克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达重组远缘链球菌葡糖基转移酶(glucosyltransferase,GTF)的催化活性区(catalytic region,CAT)蛋白并制备其多克隆抗体。方法:扩增远缘链球菌OMZ176基因组的CAT区的基因片段,克隆入pQE31载体诱导表达,鉴定表达产物。重组蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体的效价,West-ern blotting检测抗体的特异性和亲和性。结果:重组质粒成功在大肠杆菌中表达,经抗His tag单克隆抗体免疫印迹法检测,有阳性条带出现,证实重组蛋白有抗原特异性。ELISA测定免疫小鼠所得抗CAT多克隆抗体效价可达到1∶5000。Western blotting检测证明该抗体有较好的针对CAT蛋白的专一性。结论:GTF区CAT基因原核表达质粒构建成功,表达的融合蛋白具有良好的抗原性。抗CAT多克隆抗体特异性和效价良好,能够满足针对CAT免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为深入研究同时包含变形链球菌和远缘链球菌两种致龋菌的主要抗原的新型防龋DNA疫苗奠定了必要的物质基础。
- 孙静华牛玉梅樊明文
- 关键词：远缘链球菌葡糖基转移酶原核表达
- 两种GTF氨基催化区改良防龋质粒免疫小鼠的实验研究
- 2011年
- 目的:通过比较编码表兄链球菌葡糖基转移酶氨基催化区CAT不同形式基因序列的两种改良防龋质粒免疫BALB/c小鼠后激发的特异性抗体水平差异,初步评价不同形式CAT在DNA防龋疫苗中的应用潜力。方法:利用分子克隆技术构建两种改良防龋质粒,在靶向防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX中插入表兄链球菌OMZ176GTF-I CAT全基因序列构建pGJGAC/VAX;将基因公司合成的共计165bp的串联重复5次的GTF-I氨基催化区核心保守序列克隆到pGJA-P/VAX中构建pGJGA-5C/VAX。转染CHO细胞系,检测其表达。两种改良质粒经鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠,检测血清和唾液中的特异性抗PAc,抗GLU和抗CAT抗体水平。结果:重组质粒的基因序列与预期相符。不同形式CAT基因序列的两种改良防龋质粒均可在真核细胞正确表达。pGJGAC/VAX和pGJGA-5C/VAX免疫动物后血清和唾液特异性抗PAc、抗GLU和抗CAT抗体均显著高于空载体pVAX1免疫组(P<0.05)。第10、12和14周,pGJGAC/VAX免疫组小鼠的血清特异性抗CAT抗体显著高于pGJGA-5C/VAX组(P<0.05)。两组间唾液特异性抗体未见显著性差异。pGJGA-5C/VAX在小鼠体内激发特异性抗体的速度较pGJGAC/VAX略快。结论:本实验构建的增加表兄链球菌GTF氨基催化区的两种改良防龋质粒,可在真核细胞中正确表达,两种质粒有效地诱导黏膜和系统体液免疫反应,pGJGAC/VAX和pGJGA-5C/VAX各有优势。
- 孙静华樊明文
- 关键词：龋齿DNA葡糖基转移酶
- 变异链球菌、表兄链球菌复合防龋DNA疫苗防龋效能的研究
- 目的:构建包含变异链球菌和表兄链球菌两种致龋菌的主要抗原片段的复合防龋DNA疫苗,以期增强DNA防龋疫苗对表兄链球菌的抑制作用。方法:PCR获得表兄链球菌OMZ176GTF-I的CAT区,克隆至靶向防龋DNA疫苗pGJA...
- 孙静华樊明文
- 关键词：龋齿葡糖基转移酶
- 文献传递
- 胃癌前病变患者口腔中龋病和牙周病相关细菌以及口腔细菌多样性的研究
- 龋病和牙周病是人类最常见的感染性疾病。龋病是一种发生在牙体硬组织的慢性感染性疾病,变异链球菌(Streptococcus mutans, S. mutans)和表兄链球菌(Streptococcus sobrinus, ...
- 孙静华
- 关键词：胃癌前病变
- 文献传递
- 变异链球菌、表兄链球菌复合防龋DNA疫苗的研制被引量：3
- 2009年
- 目的构建包含变异链球菌和表兄链球菌两种致龋菌的主要抗原片段的复合防龋DNA疫苗，以期增强DNA防龋疫苗对表兄链球菌的抑制作用。方法PCR获得表兄链球菌OMZ176GTF—I的CAT区，克隆至靶向防龋DNA疫苗pGJA—P／VAX中，构建编码变异链球菌PAc、GLU基因序列和表兄链球菌CAT基因序列的复合防龋DNA疫苗pGJGAC／VAX，转染CHO细胞系检测其表达。重组质粒及对照质粒分别经股四头肌注射和鼻腔滴注免疫BALB／c小鼠，ELISA法检测血清和唾液中的特异性抗PAc，抗GLU和抗CAT抗体水平。重组质粒及对照质粒经鼻腔滴注免疫分别定植了变异链球菌和表兄链球菌的Wistar大鼠，龋齿记分评价防龋疫苗的龋齿保护效能。结果重组质粒pGJGAC／VAX构建成功。免疫小鼠后实验组小鼠血清和唾液抗PAc、抗GLU和抗CAT抗体水平均显著高于空载体对照组（P〈0．01）。血清特异性抗CAT抗体水平最高值在肌肉免疫组第8周和黏膜免疫组第10周时出现，分别为62．13μg/ml和11．43μg／ml；唾液特异性抗CAT抗体水平最高值在肌肉免疫组第8周和黏膜免疫组第10周时出现，分别为0．67％和0．80％。大鼠龋齿保护实验结果显示在变异链球菌和表兄链球菌定菌鼠中实验组釉质龋（E），牙本质浅龋（Ds）和牙本质中龋（Dm）均显著低于pVAX1免疫组（P〈0．05），实验组Ds和Dm均低于pGJA—P／VAX免疫组，但两组间E差异没有统计学意义（P〉0．05）。结论复合防龋DNA疫苗构建成功，可在真核细胞中正确表达，动物实验证实能有效地诱导黏膜和系统体液免疫反应，并增强了DNA防龋疫苗对表兄链球菌的抑制作用。
- 孙静华牛玉梅樊明文许庆安杨雪超
- 关键词：龋齿疫苗DNA链球菌
