宫雅楠
- 作品数：24 被引量：17H指数：3
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- 一种新型冠状病毒N蛋白高效可溶性表达的方法
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒N蛋白高效可溶性表达的方法。本发明将原始的SARS‑COV‑2N蛋白基因序列进行优化，并手动调整部分碱基，获得如SEQ ID NO.1所示的基因序列。采用本发明提供的优化后...
- 宫雅楠闫笑梅房梦飏尤元海魏销玥张建中
- 金黄色葡萄球菌类肠毒素SElW的制备方法及其应用
- 本发明公开了金黄色葡萄球菌类肠毒素SElW的制备方法及其应用。构建含有selw基因的重组表达质粒selw‑pET‑28a(+)，该质粒由pET‑28a(+)和SEQ ID NO:1所示的核苷酸构建而成，可转化至合适的表达...
- 杨玉花闫笑梅魏销玥孟凡亮宫雅楠张茂俊张建中
- 幽门螺杆菌CagA转运相关蛋白CagE、Cagδ及Cagβ的克隆表达及免疫反应性分析被引量：3
- 2013年
- 目的构建幽门螺杆菌IV型分泌系统组分中与CagA转运相关蛋白cagE(HP0544)、cagδ(HP0522)及cagβ(HP0524)编码基因重组质粒,在大肠埃希菌中表达并分析表达蛋白的免疫反应性。方法根据在线预测的3种蛋白信号肽及跨膜区特征,以标准菌株HP26695染色体DNA为模板扩增相关蛋白编码片段,与表达载体pET28a及pGEX4t-1连接后转入大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,分析蛋白表达状态,用Western blot检测表达蛋白与HP26695全菌蛋白免疫血清的反应。结果测序及飞行质谱鉴定表明成功构建CagE、Cagδ及Cagβ的表达载体,其中Cagδ可大量可溶表达,CagE及Cagβ主要以包涵体形式表达。Westernblot显示3种表达蛋白均能被HP26695全菌蛋白免疫血清识别,但Cagδ的免疫反应性较弱。结论成功获得HP26695的与CagA转运相关CagE、Cagδ及Cagβ重组蛋白,其中CagE和Cagβ具有较好的免疫反应性,是潜在的药物靶点和诊断生物标志物。
- 宫雅楠肖迪张建中
- 关键词：幽门螺杆菌抗原性
- 金黄色葡萄球菌类肠毒素W的超抗原活性位点预测与克隆表达
- 2023年
- 目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点,并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测,借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型进行评估。用ZDOCK服务器模拟SElW与TCR的对接构象,并对SElW与其他肠毒素的氨基酸序列进行比对。设计引物扩增selw基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序;经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段重组于表达质粒pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后用IPTG诱导表达;用亲和层析法对表达于上清中的SElW蛋白进行纯化,用BCA法对蛋白进行定量。结果三维结构预测结果显示,SElW蛋白由氨基末端和羧基末端两个结构域组成,其中氨基末端结构域由3个α-螺旋和6个β-片层组成,羧基末端结构域由2个α-螺旋和7个反向平行的β-片层组成。SElW蛋白模型的整体质量因素得分为98.08,其中93.24%的氨基酸Verify_3D得分≥0.2,且无氨基酸位于不允许区。模拟对接预测选择评分最高的对接构象(评分值为1521.328)作为分析对象,采用PyMOL软件分析SElW与TCR之间形成的19个氢键。结合序列比对和既往研究结果,本研究预测发现了SElW蛋白的5个重要超抗原活性位点,分别是Y18、N19、W55、C88和C98。通过克隆表达和蛋白纯化,获得了高纯度的可溶性重组蛋白SElW。结论研究预测了SElW蛋白中5个可能的超抗原活性位点,成功构建并表达了SElW蛋白,为进一步探索SElW免疫识别机制奠定了基础。
- 杨玉花库鑫宫雅楠孟凡亮卜东波郭亚慧魏销玥龙丽瑾范佳铭张茂俊张茂俊张建中
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素分子对接克隆表达
- 一种新型冠状病毒S蛋白受体结合域蛋白的真核表达方法
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒S蛋白受体结合域蛋白的真核表达方法。本发明将原始的S‑RBD蛋白基因序列进行优化，并手动调整部分碱基，获得如SEQ ID NO.1所示的基因序列。采用本发明提供的如SEQ ...
- 魏销玥闫笑梅尤元海宫雅楠孟凡亮房梦飏张建中
- 鉴定幽门螺杆菌抗原肽的方法及应用
- 本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种系统鉴定幽门螺杆菌抗原肽的方法及应用。本发明提供的方法包括：制备幽门螺杆菌裂解液；使用树突状细胞摄取所述幽门螺杆菌裂解液中的抗原肽，形成MHC‑II抗原肽复合物；裂解提呈抗原的树突...
- 宫雅楠翟康乐张建中孙路何利华肖迪
- 截短的BabA蛋白结合区(C51)具有促进幽门螺杆菌AGS细胞黏附作用被引量：1
- 2021年
- 目的获得能与Lewis b结合的截短的BabA结合域,并评价其对幽门螺杆菌黏附人胃腺癌上皮细胞系(AGS细胞)的影响。方法采用Swiss Model分析蛋白截短后的结构变化,克隆表达截短的BabA结合区蛋白,命名为C51,用Native-PAGE蛋白电泳法检测其是否为多聚体。用流式细胞术检测C51蛋白对J99和M523两株幽门螺杆菌黏附AGS细胞的影响,并用革兰染色观察C51蛋白对幽门螺杆菌聚集的影响。结果体外表达的C51蛋白以多聚体形式存在,该蛋白促进了J99和M523的聚集并使其与AGS的黏附分别增加了12%(t=8.211,P=0.001)和22%(t=4.402,P=0.012)。结论C51蛋白仍保持了与黏附相关的空间结构,并促进了幽门螺杆菌和AGS细胞的结合。
- 韩秀瑞范如岳何利华宫雅楠薛志静翟康乐杨雅名孙路尤元海赵飞范冬洁张建中
- 关键词：幽门螺杆菌黏附素
- 幽门螺杆菌免疫鸡scFv抗体库的建立方法及应用
- 本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种幽门螺杆菌免疫鸡scFv抗体库的建立方法及应用。本发明利用特定菌株对鸡进行接种免疫，能充分发挥鸡源scFv抗体的优势和特点，同时保证了免疫鸡scFv抗体库的多样性。本发明所述方法获得...
- 宫雅楠张建中闫笑梅刘文韬何利华孙路顾一心王海瑞范佳铭
- IgY免疫用幽门螺旋杆菌组合及其应用
- 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及IgY免疫用幽门螺旋杆菌组合及其应用。本发明提供两株优势菌株CHPC1.9800和CHPC1.9804的组合，所述组合菌株已完成全基因组测序，可以覆盖85％以上HP菌株黏附素，能够实现有...
- 何利华宫雅楠孙路翟康乐杨雅名房梦飏黄新福王立宾孙艳杰崔月张建中
- 一种检测幽门螺旋杆菌的方法与应用
- 本发明涉及幽门螺旋杆菌检测技术领域，具体公开了一种检测幽门螺旋杆菌的方法与应用。本发明的方法以氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示的抗原蛋白或SEQ ID No.2‑5所示的抗原肽为靶点，进行待测样品中幽门螺旋杆菌的检测...
- 宫雅楠翟康乐张建中孙路何利华房梦飏
