张庆
- 作品数：10 被引量：104H指数：5
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- 肾阳虚证动物模型的造模方法与评价指标被引量：26
- 2014年
- 肾阳虚证是由。肾脏阳气不足．温煦功能减弱所引起，临床以腰膝酸软、畏寒肢冷、精神不振、舌淡胖苔白、脉沉弱无力为主要表现的证候。可兼见男子阳痿早泄，妇女宫寒不孕；或大便久泻不止，完谷不化，五更泄泻；或浮肿，腹部胀满；或心悸，咳喘等症。为了探索肾阳虚证的本质，研究温补肾阳方药的作用及其机制，建立中医肾阳虚证的动物模型是必不可少的环节。
- 张子怡陈宝军张庆王艺茹苏友新
- 关键词：肾阳虚动物模型评价指标
- 壮骨健膝方治疗肝肾亏虚、风寒湿痹型膝骨关节炎76例临床观察被引量：20
- 2013年
- 目的观察壮骨健膝方治疗肝肾亏虚、风寒湿痹型膝骨关节炎的临床疗效。方法将152例膝骨关节炎患者采用随机数字表分为2组,治疗组76例给予壮骨健膝方,对照组76例给予美洛昔康片;3周后,观察2组临床疗效及治疗前后各症状评分变化情况。结果治疗组总有效率为94.7%,对照组总有效率为84.2%;治疗组治疗后休息痛、运动痛、压痛症状评分与对照组无显著差异,而肿胀、僵硬及行走能力评分显著低于对照组(P<0.05);胃肠道的不良反应发生率治疗组明显低于对照组。结论壮骨健膝方能有效改善肝肾亏虚、风寒湿痹阻证型膝骨关节炎患者疼痛、肿胀及运动功能障碍等症状,且胃肠道不良反应小,值得临床推广应用。
- 陈宝军闫虎张庆周必洪张子怡苏友新
- 关键词：膝骨关节炎肝肾亏虚风寒湿痹
- 壮骨健膝方含药血清中药物成分骨碎补柚皮苷对IL-1β诱导兔退变软骨细胞“caveolin-p38MAPK”信号通路的影响被引量：16
- 2014年
- 目的观察壮骨健膝方含药血清中药物成分骨碎补柚皮苷(简称柚皮苷)对IL-1β诱导退变软骨细胞中'caveolin-p38MAPK'通路相关信号因子小窝蛋白-1(caveolin-1)、磷酸化p38(p-p38)、磷酸化核转录因子-2(p-ATF-2)、IL-1β及TNF-α等的影响,进一步探讨该方保护关节软骨的机制。方法 (1)通过高效液相-飞行时间质谱联用(HPLC-TOF/MS)技术分析并获得壮骨健膝方含药血清中的原组方药物成分柚皮苷;(2)取4周龄新西兰兔双侧膝关节软骨,建立兔关节软骨细胞体外培养体系,取第二代软骨细胞用于后续实验。MTT法检测柚皮苷对软骨细胞增殖的影响;免疫组化方法检测柚皮苷对IL-1β诱导后的软骨细胞中Ⅱ型胶原表达的影响;Western blot法检测柚皮苷对IL-1β诱导后软骨细胞中caveolin-1、pp38与p-ATF-2蛋白表达的影响;RT-PCR检测柚皮苷对IL-1β诱导后软骨细胞中IL-1β及TNF-αmRNA表达的影响。结果 (1)柚皮苷标准品溶液及壮骨健膝方含药血清离子流图中柚皮苷的出峰时间均为23.5 min,分子量均在581.0~581.5 m/z之间;(2)柚皮苷能促进软骨细胞的增殖,抑制IL-1β对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响;(3)与模型组比较,柚皮苷能降低IL-1β诱导后软骨细胞中caveolin-1、p-p38、p-ATF-2等蛋白及IL-1β、TNF-αmRNA的表达(P<0.05),并接近正常组水平。结论壮骨健膝方含药血清中原组方药物成分柚皮苷不仅能够促进软骨细胞的增殖,还可保护软骨细胞的功能,其机制可能与柚皮苷降低诱导退变软骨细胞中caveolin-1、p-p38与p-ATF-2的表达,抑制'caveolin-p38MAPK'通路的活动,进而减少通路下游IL-1β及TNF-αmRNA表达有关。
- 苏友新闫虎陈宝军张庆王艺茹卢美丽王雯婷何浈盛录
- 关键词：含药血清软骨细胞
- 壮骨健膝方对IL-1β诱导后软骨细胞表达Caveolin-1、p-p38、MMP-3、MMP-13及TNF-α的影响被引量：5
- 2014年
- 目的:观察壮骨健膝方对IL-1β诱导后软骨细胞中Caveolin-1、p-p38及其培养液中MMP-3、MMP-13和TNF-α表达的影响,探讨该方保护关节软骨的机制。方法:制备兔含药血清;取新西兰大白兔膝关节第二代软骨细胞,以10ng/mL IL-1β进行诱导,48h后随机分为空白血清组、含药血清组、阻滞剂A组、阻滞剂B组,并设未诱导的细胞为正常对照组,分别用不同方法干预6h后,检测软骨细胞及其培养液中上述5个指标的表达。结果:空白血清组5个指标的表达均高于其它各组(P<0.05),而3个干预组均能降低其表达(P<0.05),其中含药血清与SB203580联用的阻滞剂B组效果最明显。结论:壮骨健膝方对关节软骨的保护作用可能与其抑制Caveolinp38MAPK信号通路的激活,进而降低软骨细胞表达MMP-3、MMP-13及TNF-α有关。
- 陈宝军闫虎林学义张庆张子怡王艺茹李亚楠苏友新
- 关键词：小窝蛋白1磷酸化P38基质金属蛋白酶3基质金属蛋白酶13
- Ⅱ型胶原酶消化法培养兔关节软骨细胞被引量：25
- 2013年
- 背景:目前关节软骨细胞的分离培养技术已经比较成熟,但是研究中发现通过目前技术培养的软骨细胞生长周期慢,容易出现退变现象,不利于后续试验的进行。目的:改进并探讨4周龄新西兰大白兔膝关节软骨细胞的分离与培养的方法。方法:无菌条件下取4周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法,分离关节软骨细胞并进行原代、传代培养;采用形态学观察,甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对关节软骨细胞进行鉴定;MTT法检测关节软骨细胞增殖情况。结果与结论:倒置显微镜下见膝关节软骨分离的原代软骨细胞6 h后开始贴壁,72 h可形成单层,96 h即可传代;前3代软骨细胞表型稳定,增殖力良好;第4,5代软骨细胞增殖能力减弱,绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞细胞质染成浅蓝色,细胞核染成深蓝色;免疫组织化学显示软骨细胞Ⅱ型胶原呈黄褐色阳性表达;MTT法检测表明前3代软骨细胞增殖差异无显著性意义(P>0.05),且第1-3代与4代软骨细胞在培养第4-7天时,吸光度值差异有显著性意义(P<0.05),与第5代软骨细胞在培养1-7天时,吸光度值差异有显著性意义(P<0.05)。提示采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法能够获得大量生长速度快且不宜退变的新西兰大白兔膝关节软骨细胞,且培养的前3代新西兰兔膝关节软骨细胞最为适宜。
- 闫虎苏友新林学义陈宝军周必洪张庆
- 关键词：软骨细胞II型胶原酶退变软骨
- 基于Keap-1/Nrf2/ARE信号通路探讨片仔癀改善MCAO大鼠氧化应激损伤的作用
- 2022年
- 目的:基于Keap-1/Nrf2/ARE信号通路探讨片仔癀(PTH)减轻大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠氧化应激损伤的作用及其机制。方法:36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PTH组,每组12只。用线栓法制备MCAO大鼠模型。Zea-Longa法进行神经功能缺损评分;MRI法检测大鼠脑梗死体积;HE染色法观察大鼠脑组织病理形态;DCFH-DA探针法检测活性氧(ROS)含量;比色法测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western Blot法检测Keap-1、Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白的表达。采用侧脑室注射Nrf2抑制剂Brusatol,30 min后造模,检测上述指标的表达。结果:与模型组比较,PTH组能显著改善大鼠神经功能损伤(P<0.05),改善大鼠脑组织病理状态,降低脑内MDA、ROS含量(P<0.01),升高SOD含量(P<0.01),同时下调Keap-1(P<0.05)、上调HO-1、NQO-1蛋白及核内Nrf2蛋白的表达(P<0.01)。经侧脑室注射Brusatol,逆转了PTH对以上指标的作用。结论:PTH可显著改善MCAO大鼠脑内氧化应激损伤,其机制主要与激活Keap-1/Nrf2/ARE通路有关。
- 张小琴赵优琴黄莉莉张庆黄贞伟黄鸣清
- 关键词：片仔癀缺血性脑卒中氧化应激血红素加氧酶-1
- 人软骨细胞体外分离与培养及其在中医药研究中的应用
- 2013年
- 20世纪60年代起人们对软骨组织的研究进入到细胞水平。1967年Manning WK等[1]使用胰蛋白酶联合细菌胶原酶消化分离与培养人软骨细胞获得成功。目前人软骨细胞体外分离与培养的方法已被广泛应用于软骨细胞生物学研究,为髌骨软化症、骨关节炎(osteoarthritis,OA)等疾病的防治及组织工程技术修复软骨缺损等研究提供了重要的方法学参考[2-3]。鉴于中医药在防治疾病方面多靶点、多层次、多环节整体调控的独特优势,借助中医药方法干预人软骨细胞体外分离与培养的骨科方面研究也备受关注。1人软骨细胞体外分离与培养的研究1.
- 张庆陈宝军闫虎周必洪苏友新
- 关键词：人软骨细胞体外分离体外培养中医药研究
- 人正常及骨关节炎关节软骨细胞的体外分离培养及鉴定被引量：6
- 2014年
- 目的建立人正常关节及人骨关节炎(OA)关节软骨细胞体外分离、培养及鉴定方法,比较二者之间部分软骨细胞生物学特征的差异。方法取人正常及人OA关节软骨组织,用胰蛋白酶联合Ⅱ型胶原酶消化法分离软骨细胞,进行原代、传代培养。采用生长情况观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对第2代软骨细胞进行比较。结果人正常关节软骨细胞生长及增殖快于人OA关节软骨细胞,且表型稳定;甲苯胺蓝及免疫组织化学染色显示人正常关节软骨细胞染色后异染颗粒的阳性表达均高于人OA关节软骨细胞。结论体外分离培养的人OA关节软骨细胞符合软骨细胞退变的表现,可为OA的相关实验研究提供细胞来源。
- 张庆翁绳健陈宝军闫虎王艺茹张子怡苏友新
- 关键词：人关节软骨细胞骨关节炎体外分离体外培养
- 痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎模型大鼠膝关节PGE-2、IL-8及IκB-α、IKK-α的影响被引量：5
- 2013年
- 目的从"TLR-ILR/NF-κB"通路下游的几个关键信号分子及其炎症效应产物探讨痛风宁颗粒的抗炎作用机制。方法采用随机数字表法将实验动物分为正常组、模型组、痛风宁组、痛风定组、塞来昔布组共5组;使用尿酸盐结晶制作急性痛风性关节炎大鼠模型;采用ELISA法检测大鼠膝关节液细胞因子PGE-2、IL-8的含量及免疫组化法检测关节滑膜组织IκB-α、IKK-α的表达情况。结果痛风宁颗粒降低发病关节液中PGE-2、IL-8的含量及病变关节滑膜组织IKK-α的表达,促进IκB-α表达,与模型组及痛风定组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论痛风宁颗粒可能通过影响"TLR-ILR/NF-κB"信号通路中关键信号分子IκB-α、IKK-α的表达,抑制PGE-2、IL-8的生成,从而达到对急性痛风性关节炎的抗炎作用。
- 苏友新陈宝军赵富强闫虎周必洪张庆张子怡
- 关键词：痛风性关节炎痛风宁颗粒IΚB-ΑIL-8
- 痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎模型大鼠关节局部炎证因子及TLRs/MyD88的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎的抗炎机制。方法 36只雄性SD大鼠,随机设立正常组、模型组、痛风宁颗粒组及秋水仙碱组,以尿酸钠混悬液关节腔注射建立急性痛风性关节炎动物模型,运用病理学、放射免疫及RT-PCR等技术方法,观测大鼠膝关节液中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β含量及关节滑膜组织TLR-2、4及MyD88 mRNA的表达情况。结果痛风宁颗粒能显著降低急性痛风性关节炎模型大鼠关节液中中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β含量及滑膜组织TLR-2、4及MyD88 mRNA的表达。结论痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎的抗炎机制可能是通过抑制TLR-2、4及MyD88基因的表达,阻止TLRs/MyD88信号通路的激活,减少TNF-α、IL-1β的生成,进而减轻急性痛风性关节炎症反应。
- 周必洪傅玉辉闫虎陈宝军张庆张子怡王艺如苏友新
- 关键词：急性痛风性关节炎痛风宁颗粒
