张弓
- 作品数：17 被引量：49H指数：4
- 供职机构：南方医科大学基础医学院病理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省社会发展攻关项目广州市科技计划项目更多>>
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- NF-κB信号通路在异丙酚抑制脂多糖诱导RAW264．7细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达上调中的作用
- 2011年
- 目的探讨NF-κB信号通路在异丙酚抑制脂多糖（LPS）诱导RAW264．7细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达上调中的作用。方法体外培养RAW264．7细胞，以5×105／ml密度接种于6cm培养皿（3ml／皿）或6孔板（2ml／孔），采用随机数字表法，将其随机分为3组（n=18）：正常对照组（C组）、LPS组（L组）和12S＋异丙酚（LP组）。C组不做任何处理；L组和LP组均加入1μg／mlLPS，LP组于加入LPS前2h加入50μmol／L异丙酚。于LPS孵育30min时，每组取6皿和6孔，收集细胞，分别采用免疫印迹法测定磷酸化IxB激酶（p-IKK）和NF．KB活性；于LPS孵育6h时，每组取6皿，收集细胞，测定iNOSmRNA表达。结果与C组比较，L组p-IKK和iNOSmRNA表达上调，NF-κB活性升高（P〈0．05）；与L组比较，LP组p-IKK和iNOSmRNA表达下调，NF-κB活性降低（P〈0．05）。结论NF-κB信号通路参与了异丙酚抑制脂多糖诱导的RAW264．7细胞iNOS基因表达上调。
- 毕小宝宋兴荣张弓金宇林田航谭淑霞
- 关键词：二异丙酚内毒素血症信使
- 盐霉毒抑制鼻咽癌干细胞的作用及机理研究
- 研究背景:
鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)是发生于鼻咽粘膜的恶性肿瘤，好发于中国华南地区，每100，000人大约有25-50人发病。鼻咽癌的发病同EBV病毒感染，遗传易感性以及接触...
- 张弓
- 关键词：鼻咽癌干细胞分子机制
- 文献传递
- 悬浮培养细胞的细胞块制作及其应用被引量：9
- 2009年
- 淋巴造血系统来源的细胞株在细胞培养过程中因细胞无法贴壁生长，只能采取悬浮培养的方式。悬浮培养的细胞在进行形态学及免疫表型研究中，通常采用细胞滴片和细胞甩片技术，因获得的细胞为三维立体结构，故所观察到的细胞结构欠清晰。细胞块技术是近几年逐步发展起来的针对人体细针穿刺标本及脱落细胞学诊断的一项技术，基本原理是将液体中的样本进行离心，
- 王志强黄学平黎相照李锋陈小艳张弓吴自勍赵彤
- 关键词：细胞块细胞株免疫细胞化学
- 散发性乳腺浸润性导管癌中BRCA1表达及临床意义被引量：1
- 2009年
- 目的：研究散发性乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）（breast cancer 1 BRCA1）基因的表达及其与其临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化sP三步法检泖167例乳腺浸润性导管癌，53例乳腺腺病患者的石蜡标本BRCA1的表达。从病理科的档案提取患者的年龄，肿物大小，淋巴结转移情况，ER，PR，Her-2表达结果，分析BRCA1的表达和患者的年龄，肿物大小，淋巴结转移情况及ER，PR，Her－2表达的关系。结果：BRCA1蛋白在IDC组织表达率56．7％（38／67），癌旁组织表达率80．0％（36／45），乳腺腺病组织表达率92．5％（49，53）。阳性细胞定位除细胞核外，也见于胞浆。IDC癌组织与癌旁组织、乳腺腺病组织比较，BRCA1阳性表达率均下降，均有显著性差异（P〈0．05）。BRCAI的表达与淋巴结转移呈负相关（r=-0．137，P〈0．05），与ER、PR、Her－2的表达均呈负相关（r值分别为－0．439，－0．250，－0．363，P〈0．05），与年龄、肿物大小无明显相关性（P〉0，05）。结论：BRCA1蛋白可作为估计乳腺癌生物学行为和预后的潜在指标。
- 王辛熊静波黎相照褚红娟张弓杨建芳赵彤
- 关键词：免疫组织化学
- 组织微阵列技术对胃癌组织p53和MDM2蛋白表达的同步检测与对应分析被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨胃癌组织中p53和MDM2蛋白表达的相互关系.方法:47例石蜡包埋胃癌组织制成组织阵列,应用免疫组织化学方法检测其p53和MDM2蛋白表达,并运用统计软件SPSS11.5对两个蛋白之间的相互关系进行对应分析.结果:p53与MDM2蛋白阳性表达率分别为34.0%(16/47)和42.5%(20/47).p53蛋白与MDM2蛋白表达呈负相关(P=0.012).结论:p53突变是胃癌发生发展中重要的一步,MDM2可能在胃癌的恶性增生过程中起重要作用.
- 李慧灵陈小艳刘芳黄作平褚红娟王辛张弓赵彤
- 关键词：P53蛋白MDM2蛋白组织微阵列
- mCD99L2基因干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建mCD99L2(mouse CD99 antigen-like2)基因RNA干扰慢病毒表达载体,检测其对293FT细胞的感染效率。方法应用基因工程技术,首先设计并合成4对siRNA序列,退火、酶切并连接于慢病毒表达载体SD1259,构建携带针对目的基因mCD99L2的siRNA慢病毒穿梭质粒表达载体(其中包括1条阴性对照序列);然后使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒穿梭质粒共转染293FT细胞,转染48h后收集上清离心过滤,浓缩病毒,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果构建3个携带针对目的基因mCD99L2的siRNA慢病毒穿梭质粒表达载体和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293FT细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×107/m1,适合感染目的细胞。结论应用基因工程技术成功构建了mCD99L2基因RNA干扰慢病毒表达载体,为进一步构建类人霍奇金淋巴瘤可视化细胞模型及动物模型奠定了基础。
- 张弓刘芳陈小艳方唯意李慧灵黄作平褚红娟王辛赵彤
- 关键词：慢病毒RNA干扰霍奇金淋巴瘤
- LMP1基因重组慢病毒载体的构建及体外表达被引量：4
- 2009年
- 目的构建EB病毒潜伏膜蛋白I(LMP1)基因重组慢病毒载体,并检测其在体外的表达。方法采用DNA重组技术,将LMP1基因克隆到带绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体质粒pCDF中,筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR扩增和DNA测序鉴定重组载体。以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装质粒pFIV-34N、包膜质粒pVSV-G和带目的基因的质粒pCDF-LMP1共同转染到包装细胞293FT细胞内包装病毒,荧光显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组病毒的滴度。将重组慢病毒转染小鼠B淋巴瘤细胞系A20,RT-PCR和Western blotting检测LMP1的表达。结果重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实LMP1基因准确克隆入pCDF的多克隆位点,LMP1序列与GenBank中的数据完全一致。荧光显微镜下观察可见293FT细胞的细胞浆与细胞膜有大量的绿色荧光,重组慢病毒浓缩后滴度为107Tu/ml,慢病毒转染A20细胞的效率>90%。RT-PCR和Western blotting检测A20细胞内有LMP1的表达。结论成功构建了LMP1基因重组慢病毒表达载体,慢病毒可高效转染A20细胞,为后期研究EBV致瘤基因LMP1在淋巴瘤发病机制中的作用奠定基础。
- 陈小艳张弓刘芳李慧灵方唯意江庆萍赵彤
- 关键词：潜伏膜蛋白1基因重组慢病毒载体
- 不同方式转染小鼠B淋巴瘤细胞A20的探讨被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨小鼠B淋巴瘤细胞A20最佳的转染方式,为后期研究LMP1基因在A20细胞中的表达及作用奠定基础。方法:分别使用脂质体转染法、NucleofectorTM核酸转染法和慢病毒载体介导转染法将带有报告基因绿色荧光蛋白的重组质粒pCDF-LMP1转染小鼠B淋巴瘤细胞A20,荧光显微镜观察细胞内绿色荧光的分布,比较分析这三种转染方式对A20细胞的转染效率。结果:脂质体转染效率最低,仅见个别细胞有绿色荧光,NucleofectorTM核酸转染效率约为10%,浓缩后的慢病毒载体介导转染法效率最高,可达80%以上。结论:对于悬浮细胞A20而言,浓缩后的慢病毒载体介导的转染法是最佳的转染方式,该方法在将外源基因转染至悬浮细胞方面值得推广,也为极难转染的细胞做稳定转染提供参考价值。
- 陈小艳张弓刘芳赵彤
- 关键词：脂质体转染慢病毒转染
- 慢病毒载体介导的RNAi技术构建稳定抑制β-catenin的人鼻咽癌细胞株被引量：3
- 2011年
- 目的建立稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为探讨Wnt/β-catenin信号在鼻咽癌发生中的作用提供细胞模型。方法于β-catenin CTNNB1基因编码区选择3个siRNA靶点合成3对shRNA干扰序列,分别与pLKO.1载体连接,构建pLKO.1-sh-β-catenin质粒(干扰组1)、pLVTHM-sh-β-catenin(干扰组2)和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒(阴性对照组);将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集含慢病毒颗粒的上清液感染人鼻咽癌6-10B细胞,感染pLKO.1-sh-β-catenin和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒的细胞经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株。Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率及下游基因c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测比较细胞增殖状况,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率。结果 Western blot检测结果显示pLKO.1-sh-β-catenin(干扰组1)干扰效率最佳,β-catenin及c-myc蛋白表达减少;MTT检测显示干扰β-catenin后细胞吸光度下降,细胞增殖受到抑制;穿过Transwell小室底膜的细胞数:干扰组1为(23.5±4.6)个,明显低于阴性对照组(50.3±5.3,P<0.01)及空白对照组(54.3±5.6,P<0.01)。结论成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为进一步研究以β-catenin为靶点的鼻咽癌基因治疗奠定基础。
- 姜睿张弓马磊李锡清肖广惠姚开泰
- 关键词：WNT/Β-CATENIN慢病毒载体RNAI鼻咽癌
- mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞A20生物学特性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探究mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞生物学特性的影响。方法采用MTT法和流式细胞仪检测mCD99L2基因沉默前后干扰组A20-LV-mCD99L2和未干扰组A20细胞的增殖率和细胞周期;Transwell法测定两组细胞的体外侵袭能力;采用裸鼠与BALB/c鼠皮下成瘤实验观察比较两组细胞在体内的成瘤时间和成瘤率。结果MTT法显示干扰组A20-LV-mCD99L2增殖率为(0.61±0.12),低于未干扰组增殖率(0.75±0.20),差异有统计学意义(P=0.000);干扰组A20-LV-mCD99L2处于G2期的细胞比例为(10.58±4.97),高于未干扰组(3.33±1.31),差异有统计学意义(P=0.009);Transwell法显示干扰组A20-LV-mCD99L2运动能力较未干扰组下降。裸鼠皮下成瘤时间干扰组(13.33±4.63)d长于未干扰组(9.50±2.90)d,成瘤率均为100%;BALB/c鼠皮下成瘤时间干扰组(10d)长于未干扰组(7.0±0.82)d,成瘤率干扰组为14.3%,显著低于未干扰组(100%),差异有统计学意义(P=0.000)。结论mCD99L2基因沉默可抑制小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞的生物学行为,降低其在体外的增殖能力和运动能力,显著降低其在BALB/c鼠体内的成瘤率。
- 陈小艳刘芳沈丽佳李慧灵张弓黄作平王辛赵彤
- 关键词：基因沉默
