张明明
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院医学检验重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- cTnI-linker-TnC融合蛋白基因的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的重组及表达人cTnI-linker-TnC融合蛋白。方法应用PCR技术从人心脏cDNA文库分别扩增出cTnI和TnC基因,通过引物设计在两者之间加上19个中性氨基酸残基TS-(G4S)3-AC的linker编码序列,克隆PCR产物,并构建pET28a-cTnI-linker-TnC表达质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,NTA树脂亲和层析纯化后检测其纯度和免疫反应性。结果成功构建了cTnI-linker-TnC融合蛋白的基因,并在大肠杆菌中实现可溶性高表达,在摇瓶中的表达量为21 mg/L,经一步NTA树脂亲和层析纯化,获得条带单一的目的蛋白,采用进口全自动免疫检测系统鉴定证实,目的蛋白有较高的免疫反应性。结论采用原核表达方法可以获得具有高纯度和高免疫反应活性的cTnI-linker-TnC融合蛋白。
- 张明明洪理泉卢仁泉郑佐娅
- 关键词：融合蛋白
- 重组人心肌TnI-TnC复合物的特性及其初步应用被引量：2
- 2008年
- 目的:从含有人cTnI-TnC基因的表达菌中抽取目的蛋白,并对其进行纯化、鉴定及稳定性的初步研究。方法:取表达菌株BL21(DE3)-pET28a-cTnI-TnC,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,NTA树脂亲和层析纯化后,检测其免疫反应性和稳定性,并试验了在4种不同液体基质中cTnI-TnC复合物的稳定性。结果:cTnI-TnC表达水平高,可溶性好。免疫分析显示较高的特异免疫反应性和稳定性。筛选到了能使cTnI-TnC复合物在液态下保持稳定的基质。结论:cTnI-TnC复合物能通过基因工程手段大量获取,并具有较高的免疫反应性和稳定性。含EDTA的10%BSA磷酸缓冲液或含10%小牛血清的磷酸缓冲液是其合适的基质。初步认为cTnI-TnC复合物可以作为cTnI免疫测定用的参考标准品或质控品。
- 刘大彪张明明卢仁泉郑佐娅
- 关键词：免疫活性蛋白质稳定性
- POCT的研究进展及应用被引量：10
- 2006年
- 该文简要介绍了POCT(point of care testing,POCT)在仪器、信息化、质量管理方面的研究进展及临床应用情况。
- 张明明郑佐娅
