张桂芝
- 作品数：5 被引量：9H指数：3
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 单羧酸转运蛋白基因对肿瘤细胞内pH值及生长特性的调节作用被引量：3
- 2001年
- 目的 以反义技术抑制肿瘤细胞的单羧酸转运蛋白基因第一亚型 (MCT1)表达 ,观察其对肿瘤细胞内pH值 (pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响。方法 (1)应用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)从人肺癌细胞系A5 49中扩增MCT1目的基因片段 ,将克隆的基因片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN ,构建反义表达重组载体pLXSN MCT1,并对其进行DNA测序验证。 (2 )通过电穿孔法将pLXSN、重组载体pLXSN MCT1转染于肺腺癌细胞系A5 49中 ,经G418筛选转染细胞阳性克隆。用PCR方法鉴定pLXSN MCT1重组载体在基因组的转染整合及表达 ;以分光光度法测定细胞内pH及乳酸含量变化 ,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况。结果 (1)对所构建的重组载体进行双酶切电泳分析及DNA序列分析证明反义载体构建成功。 (2 )与未转染的A5 49细胞比较 ,转染MCT1反义表达重组体的细胞pHi降低、乳酸显著升高 (P <0 0 0 1) ;且细胞的生长受到明显抑制。结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节。
- 黄桂君钱桂生成党校张桂芝吴国明
- 关键词：反义技术乳酸肺肿瘤PH值
- 抑制人肺腺癌细胞MCT1基因的表达对其增殖、凋亡的影响被引量：3
- 2002年
- 目的:研究抑制单羧酸转运蛋白第1亚型(MCT1)基因的表达对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:用电穿孔法将MCT1反义基因表达载体转染进人肺腺癌A549细胞中,以抑制MCT1基因表达。经G418筛选阳性克隆。用PCR,RT-PCR方法鉴定MCT1反义基因与A549基因组的整合;用分光光度法和生物发光法分别测定细胞内pH(intracellular pH,pHi)、乳酸含量和ATP含量。用原位凋亡试剂盒测定细胞凋亡情况,并接种转染MCT1反义基因的细胞和A549细胞于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长。结果:与A549细胞比较,转染MCT1反义基因的细胞pHi降低(P<0.05)、乳酸显著升高(P<0.001),ATP含量明显降低(P<0.05)。转染MCT1反义基因的细胞凋亡率明显高于A549细胞(P<0.01)。接种转染MCT1反义基因的细胞移植瘤明显比接种A549细胞的轻且小(P<0.001)。结论:MCT1基因对肿瘤细胞增殖凋亡具有重要的调节作用。
- 张桂芝黄桂君成党校郭先健钱桂生
- 关键词：肺肿瘤PHI乳酸ATP移植瘤
- 单羧酸转运蛋白反义基因转染人肺腺癌细胞对其生物学特性的影响被引量：3
- 2001年
- 目的 研究单羧酸转运蛋白基因第一亚型 (MCT1)反义表达载体转染肿瘤细胞对其细胞内pH(pHi)调节、乳酸转运及生长性质的影响。方法 通过电穿孔法将单羧酸转运蛋白MCT1基因反义表达重组子pLXSN MCT1转染于肺腺癌细胞系A5 49中 ,经G418筛选转染细胞阳性克隆。用PCR方法鉴定MCT1反义表达重组载体在基因组的转染整合 ;以分光光度法测定pHi及乳酸含量变化 ,并以细胞生长曲线研究细胞的生长情况。结果 与未转染的A5 49细胞比较 ,转染MCT1反义表达重组载体的细胞pHi降低、乳酸显著升高 (P <0 .0 0 1) ;且细胞的生长受到明显抑制。结论 单羧酸转运蛋白MCT1基因在肿瘤细胞pHi调节、乳酸转运及细胞的生长中起着重要的调节作用。
- 张桂芝黄桂君郭先健钱桂生
- 关键词：基因转染PHI乳酸
- 人肺癌细胞MCT2基因的克隆及其mRNA表达分析
- 2002年
- 目的 克隆人肺癌细胞单羧酸转运蛋白第二亚型基因 (MonocarboxylateTransporter 2 ,MCT2 )的编码序列 ,并对其在肿瘤组织细胞mRNA表达作半定量分析。方法 (1)通过RT PCR方法克隆人肺腺癌A5 4 9细胞中的MCT2基因片段。应用四色荧光、双脱氧终止法测序 ;通过Genebank数据库应用分析软件对克隆基因序列进行同源性分析。 (2 )采用半定量RT PCR方法比较人肺癌组织、癌旁正常肺组织及人肺癌细胞株中MCT2mRNA的表达水平。结果 (1)应用RT PCR方法克隆出人肺癌细胞的MCT2基因片段 ;肺癌细胞此基因编码序列与人肝细胞MCT2基因的cDNA编码序列具有高度同源性。 (2 )人肺癌组织及人肺癌细胞株中MCT2mRNA的表达非常显著地高于癌旁正常肺组织 (P <0 .0 0 1)。结论 MCT2基因为一序列保守的基因 。
- 谭永红黄桂君成党校吴国明张桂芝钱桂生
- 关键词：RT-PCRDNA测序肺肿瘤MRNA
- 联合抑制人肺腺癌细胞的MCT1基因及NHE1基因表达对其增殖生长的影响
- 2002年
- 背景与目的:以往的研究中我们发现,用反义基因分别抑制肿瘤细胞膜上的单羧酸转运蛋白第1亚型(monocarboxylatetransporter-1,MCT1)基因和Na+/H+交换蛋白第1亚型(Na+/H+exchanger-1,NHE1)基因的表达,可使肿瘤细胞内pH(intracellularpH,pHi)降低,细胞酸化死亡。而同时抑制这两种基因的表达,对肿瘤细胞pHi及其增殖生长的影响尚不清楚。方法:用电穿孔法将MCT1基因及NHE1基因相应的反义基因表达载体pLXSN-MCT1和pLXSN-NHE1同时转染于人肺腺癌细胞系A549中,经G418筛选阳性克隆,用PCR及RT-PCR方法鉴定MCT1和NHE1的反义基因与A549基因组的整合。pHi及乳酸含量用分光光度法测定;细胞生长周期用流式细胞仪测定;并将联合转染反义基因的细胞、转染MCT1反义基因的细胞、A549细胞分别接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长。结果:与A549细胞比较,联合转染反义基因的细胞pHi降低、乳酸显著升高(P<0.001),细胞周期阻滞在G0-G1期。接种联合转染反义基因细胞和转染MCT1反义基因细胞的裸鼠移植瘤明显比接种A549细胞的轻且小(P<0.001)。结论:MCT1基因和NHE1基因可能通过影响pHi对肿瘤细胞的增殖生长起重要的调节作用。
- 张桂芝黄桂君厉为良吴国明钱桂生
- 关键词：基因表达肿瘤细胞增殖
