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反向斑点杂交方法检测猪常见致病菌的研究: 当前传染病的发病特点是多病原混合感染增多,使病情复杂化,增加了临床诊断的难度。快速﹑灵敏﹑准确﹑特异性检测猪的致病菌是有效预防感染性疾病发生和控制其迅速传播的前提和关键。本文的研究目的是建立针对猪的多种致病菌的基因芯片检...; 曹峰子; 关键词：反向斑点杂交致病基因寡核苷酸反向PCR; 文献传递

反向斑点杂交检测仔猪常见致病菌初探: 为在没有基因芯片点样仪和扫描仪的诊断实验室操作低密度DNA反向杂交检测,将已建立的玻片为基质的芯片检测方法转换成膜基质反向斑点杂交.将玻片为基质的芯片所用25-30 mer探针修改加长到30-38 mer,点于0.2μm...; 曹峰子伍诚意周宏专陈小玲; 关键词：仔猪致病菌反向斑点杂交; 文献传递

反向斑点杂交检测仔猪常见致病菌初探: 为在没有基因芯片点样仪和扫描仪的诊断实验室操作低密度DNA反向杂交检测，将已建立的玻片为基质的芯片检测方法转换成膜基质反向斑点杂交。将玻片为基质的芯片所用25-30 mer探针修改加长到30-38mer,点于0.2μm孔...; 曹峰子伍诚意周宏专陈小玲; 关键词：反向斑点杂交; 文献传递

用于检测仔猪致病菌的23S rRNA基因芯片的研制被引量：3: 2010年; 以副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、肠道沙门氏菌、猪链球菌等12种仔猪致病菌为目标细菌,23SrRNA基因为靶基因,从GenBank中下载其23SrDNA全序列,在其变异区设计特异性探针,在保守区设计通用引物。通过序列分析、PCR靶标与探针杂交试验,建立了有13条寡核苷酸探针和2对通用引物的仔猪常见致病菌基因芯片检测方法。以参考菌株粗提基因组DNA的10倍系列稀释模板做PCR,扩增产物与探针杂交,检出芯片的灵敏度为100fg。对33个参考菌株用芯片检测,结果有1例不正确,只鉴定到属;在61个野外分离株中,55株的芯片检测结果与生化或测序结果一致,有6例不一致,符合率为90%。初步研究证明,该检测方法能快速、有效地鉴定多种仔猪常见致病菌,但要区分某些细菌的致病株与非致病株,还要检测毒力/毒素基因。; 伍诚意曹峰子梁之昶章振华杨兵周宏专季海峰陈小玲; 关键词：仔猪致病菌 RRNA基因寡核苷酸探针

肉鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定被引量：9: 2010年; 2009年5月,北京郊区某肉鸡养殖户的2 000只7日龄雏鸡出现拉白色稀粪,肝脏有黄色结节等症状和病变的疾病。为探索该病病因及制定有效防治措施,对病鸡样品进行了细菌学检验。通过细菌分离、生化试验、PCR及16 S rRNA基因测序鉴定出1株鸡白痢沙门菌。该分离株感染试验鸡能复制出与其临床表现一致的病例并能引起死亡。表明鸡白痢沙门菌是危害北京郊区该养殖户肉鸡的病原。; 王春丽姜北宇曹峰子陈小玲张培君王宏俊; 关键词：肉鸡鸡白痢沙门菌

用反向斑点杂交方法检测猪常见致病菌: 2010年; 目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法。方法:将23S rRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30 mer探针加长到30～38 mer,2对通用引物序列不变。用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交。结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100 fg DNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因。结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力。; 曹峰子伍诚意宋勤叶江洪梁之昶季海峰陈小玲; 关键词：反向斑点杂交 RRNA基因反向PCR

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曹峰子