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Ghrelin对棕榈酸诱导的THP-1巨噬细胞上TLR4/NF-κB信号通路活化的作用被引量：3: 2012年; 目的探讨酰基化Ghrelin对棕榈酸(PA)诱导的人源单核巨噬细胞(THP-1巨噬细胞)上TLR4-NF-κB信号通路的作用。方法用不同浓度的PA孵育THP-1巨噬细胞株12h;用不同浓度的酰基化Ghrelin孵育THP-1巨噬细胞株4h后,再加入PA(200μmol/L)孵育12h。用实时定量PCR检测THP-1巨噬细胞上TLR4mRNA的表达水平;用Western印记检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;用ELISA方法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的浓度。结果与对照组比较,PA呈剂量依赖性增强THP-1巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达水平,以及NF-κB p65磷酸化蛋白水平和分泌TNF-α、IL-1β的能力(P均<0.05)。与PA(200μmol/L)组比较,酰基化Ghrelin呈剂量依赖性抑制THP-1巨噬细胞TLR4mRNA(P均<0.05)、TLR4蛋白和NF-κB p65磷酸化蛋白的水平(P均<0.01),以及降低THP-1巨噬细胞分泌TNF-α水平(P均<0.05)和IL-1β的水平(P均<0.01)。结论PA可剂量依赖性诱导THP-1巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化;酰基化Ghrelin可剂量依赖性抑制PA诱导的THP-1巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化。; 李欣颖刘石平姚岚肖扬李卉周智广; 关键词：GHRELIN 棕榈酸 TOLL样受体

1型糖尿病患者酪氨酸磷酸酶2β抗体检测的临床意义被引量：1: 2008年; 目的探讨1型糖尿病（T1DM）患者中蛋白酪氨酸磷酸酶2B抗体（IA-2βA）的分布规律及阳性患者的临床特征。方法采用放射配体法检测401例T1DM患者、200例正常对照血清中IA-2βA、IA-2A和谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）水平，并分析抗体阳性患者的临床特征。结果（1）T1DM组IA-2βA阳性率8．7％（35／401），显著高于正常对照组（1．0％，P〈0．05）；（2）35例IA-2βA阳性患者中，同时合并IA-2A阳性的患者16例，阳性重叠率45．7％。IA-2BA与IA-2A指数无相关性（r=0．021，P=0．780）；（3）T1DM患者中，IA-2A、IA-2βA阳性率在0～9岁组最高，二者阳性率显著高于10岁以上的T1DM患者（62．8％vs 19．7％，Χ^2=31．41，P〈0．001；20．0％vs 7．6％，Χ^2=6．11，P〈0．05）。而GADA阳性率在各年龄组中差异无统计学意义；（4）与单独IA-2A阳性患者比较。单独IA-2βA阳性患者年龄和起病年龄较大（IA-2A阳性患者平均年龄24．2岁，平均起病年龄21．6岁；IA-2βA阳性患者平均年龄35．5岁，平均起病年龄34．0岁，均P〈0．05）。结论IA-2βA在儿童T1DM患者中阳性率较高，且随年龄增长阳性率下降。IA-2βA是糖尿病患者自身免疫检测的一项实用指标。; 李卉黄干张松王霞金河来周智广; 关键词：糖尿病蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体谷氨酸脱羧酶抗体

蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体放射配体检测法的影响因素分析: 2008年; 目的对蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体（IA-2A）放射配体检测法的影响因素进行分析。方法采用放射配体法检测186批IA-2A，对其检测结果进行回顾性分析和总结，并通过参加国际第4次糖尿病自身抗体检测标准化评估（DASP 2005）验证方法的灵敏度和特异度。结果该方法批内变异系数（CV）为3．1％-9．5％，批间CV为5．5％-11．7％；以信／噪比（S／N）≥50作为检测IA-2A的理想标准，186批次检测中合格161批（86．6％），失败25批（13．4％）。其中高温操作环境[（32．7±6．3）℃]检测失败率（占失败总批次的60％）显著高于低温操作环境[（11．8±5．7）℃，占失败总批次的16％]，且高温操作环境S／N（55．1±6．9）明显低于低温操作环境（68．5±6．2，P〈0．01）。在失败批次中，由三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲盐溶液引起的占68％（17／25），其他原因有标记失败等。DASP 2005反馈结果显示，我室IA-2A检测灵敏度72％，特异度99％，受试者工作特征（ROC）曲线分析显示，曲线下面积0．825±0．048（0．730-0．919）。结论放射配体法检测IA-2A的影响因素，特别是Tris缓冲盐溶液应引起操作者重视并加以控制，以确保结果稳定可靠。; 黄干周智广金河来王霞李卉; 关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体放射配体法影响因素

谷氨酸脱羧酶抗体微量平板放射结合检测法的建立与初步应用: 2008年; 目的建立谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）的微量平板放射结合检测（RBA）法并评价其临床价值。方法采用^35S-GAD65抗原与血清在96孔平板中保温24h，而后转入已包被蛋白A的Millipore平板中，平板经洗涤后进行放射性计数，GAD—Ab结果以WHO标准单位（U／ml）表示。检测224名健康人、162例1型糖尿病（T1DM）和210例初诊2型糖尿病（T2DM）患者GAD—Ab浓度，评价其临床应用效果。并分别选择经典放射配体（RLA）法检测GAD—Ab指数呈梯度排列的T1DM患者和健康人共119名，比较RBA法和RLA法检测结果的一致率和相关性。对32名健康人、35例TIDM患者、24例T2DM患者同时采集静脉血和手指血，探索该方法检测手指血GAD—Ab浓度的可行性，同时也与RLA法比较。分别采用直线相关分析、t检验、方差分析、受试者工作特征（ROC）曲线等方法进行统计学处理。结果（1）优化的检测条件包括采用2μl血清与3×10^4计数·min^-1的标记抗原缓慢振荡保温24h，采用4℃PBS缓冲液洗涤沉淀物10次，采用Optiphase Supermix型闪烁液测量放射性计数。（2）该法检测GAD—Ab批内CV为3．8％～10．2％，批间CV5．6％～11．9％；GAD—Ab浓度在40．3～664U／ml范围内线性良好，检测限为3．6U／ml；该方法灵敏度78％，特异性98％，与经典RLA法结果判定一致率97．5％，Kappa值0．95，两者检测值呈显著正相关（r=0．915，P〈0．001）。（3）GAD—Ab在TIDM和T2DM患者阳性率分别为46．9％（76／162）和5．2％（11／210），明显高于健康人的n89％（χ^2值为123．5和10．1，P〈0．001和〈0．01）。（4）该方法检测手指血GAD—Ab与经典RLA法检测静脉血结果判定一致率96．7％，Kappa值0．905，检测结果呈显著正相关（r=0．946，P〈0．001）。结论建立的微量平板RBA法灵敏度、特异性、重复性好，能适用于末梢血GAD—Ab检测，具有较好的临床应用价�; 黄干金河来王霞李卉张松周智广; 关键词：谷氨酸脱羧酶抗体放射免疫测定糖尿病胰岛素依赖型糖尿病非胰岛素依赖型

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李卉

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