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5-杂氮-2′-脱氧胞苷对前列腺癌PC3细胞系生长以及抑癌基因GSTP1、RASSF1A转录的影响: 2009年; 目的:观察DNA去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对前列腺癌细胞株PC3抑癌基因GSTP1和RASSF1A转录改变以及细胞增殖活性的影响。方法:用不同浓度5-aza-CdR(2、5、10μmol/L)处理前列腺癌细胞株PC3,利用甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前PC3细胞株GSTP1、RASSF1A启动子甲基化状态;采用实时荧光定量RT-PCR法检测用药过程中GSTP1和RASSF1A mRNA转录改变;用MTT法和流式细胞术检测用药前后PC3肿瘤细胞增殖活性改变。结果:GSTP1、RASSF1A启动子区域出现甲基化现象。与对照组相比,药物组培养24h后GSTP1和RASSF1A mRNA表达未发生明显改变;培养48h后5、10μmol/L药物组GSTP1和RASSF1A mRNA表达出现上调;72h后各浓度药物组均检测出两基因mRNA表达升高(P<0.05)。药物组培养24和48h未出现明显的细胞增殖抑制现象和细胞周期改变;培养72h后,药物组细胞增殖抑制显著(P<0.05),细胞周期改变明显(P<0.05),阻滞于G0/G1期。结论:GSTP1和RASSF1A基因在PC3前列腺癌细胞系中的失表达可能与其启动子CpG岛高甲基化有关;5-aza-CdR能在一定程度上抑制PC3细胞增殖,干扰细胞周期,提高GSTP1和RASSF1A的转录水平。; 翁文浩郑军华冷俊李智李晶华; 关键词：GSTP1基因 RASSF1A基因

基因Wip1低表达与椎间盘退行性病变的关系被引量：1: 2013年; 目的探讨基因Wip1异常表达与椎间盘退行性疾病(intervertebral disc degeneration,IDD)的关系。方法选取62例患者退行性病变的椎间盘组织,通过实时定量PCR测定Wip1基因表达量;siRNA干扰人髓核(nucleus pulposus,NP)细胞Wip1的表达后,通过SA-β-ga1染色检测细胞衰老情况;通过MTT检测NP细胞的增殖能力;通过实时定量PCR检测NP细胞衰老分子标记的表达水平;γ射线照射siRNA转染后的NP P3细胞,分别于不同时间点行SA-β-gal染色检查。结果 62例病变椎间盘组织中,18例Wip1基因的表达明显下降(P<0.01);siRNA干扰人NP细胞Wip1表达后,衰老细胞数量明显增加;MTT结果表明,干扰Wip1的表达能够显著抑制人NP细胞的增殖;P3细胞培养8 d,实时定量PCR检测发现,Col2a1、Agc、Ver的表达水平显著下调,MMP3的表达水平明显增高。y射线照射NP细胞后,SA-β-gal染色显示,Wip1表达组出现明显的衰老现象。结论 Wip1的低表达与椎间盘退行性病变的发生相关,干扰Wip1的表达能够促进NP细胞衰老,而过表达Wip1可以有效抑制细胞衰老的发生。; 俞蕾马纪王勤婉于永春潘秋辉李晶华; 关键词：椎间盘退行性疾病细胞衰老

流式细胞术检测胎儿红细胞的影响因素探讨: 2008年; 目的探讨流式细胞术检测胎儿红细胞的影响因素。方法45名健康产妇脐血样本分别用同血型健康人外周血调整为5种浓度,使用抗胎儿血红蛋白(HbF)单克隆抗体,用直接标记和间接标记2种方法分别测定HbF阳性细胞比例,将样本放置24 h、48 h和72 h后再次测定。结果以Fetal Cell Count TM KitⅡ双色标记碳酸酐酶和HbF抗体[碳酸酐酶-异硫氰酸荧光素(CA-FITC)、HbF-藻红蛋白(PE)]为标准,5种浓度的直接标记结果均高于间接标记(P<0.05),阳性细胞数低时差异有统计学意义(P<0.01)。样本放置48 h直接标记结果未见明显下降,间接标记结果下降明显,放置72 h直接标记结果也有明显下降(P<0.05)。结论利用流式细胞仪检测母血中胎儿红细胞含量受到标记方法、样本放置时间等因素的影响。较好的方法是采用直接标记法,染色完毕立即检测,最好不要超过3 d,样本必须避光保存。; 李晶华李智左玫刘佳; 关键词：流式细胞仪影响因素胎儿血红蛋白

ABBOTT CD-3700全自动血液分析仪对低值血小板检测准确度探讨被引量：8: 2008年; 目的探讨全自动血液分析仪对低值血小板检测的准确度。方法将ABBOTTCELL-DYN3700血液分析仪检测出的102例血小板小于50×109/L的血常规标本同时用血小板计数参考方法和手工计数法进行比对,使用受试者工作特征曲线(Receiver 0perating Characteristic Curve,简称ROC曲线)观察血液分析仪对其检测的准确度。结果血液分析仪对102例低值血小板曲线下的面积(Area Under the Curve,简称Area)为0.893,血小板数在30×109/L^50×109/L时,Area 0.846;当血小板数在10×109/L^30×109/L时,Area 0.746;当血小板数在0×109/L^10×109/L,Area 0.650。102例手工计数的血小板ROC Area 0.759,当血小板数在30×109/L^50×109/L时,ROC Area 0.702,当血小板数在10×109/L^30×109/L时,ROC Area 0.780;当血小板数在0×109/L^10×109/L时,Area为0.565。结论全自动血液分析仪CD-3700对低值血小板(<50×109/L)的检测准确度较好(Area 0.893),但随着血小板数值的降低,其准确度明显下降。当血小板数值低于10×109/L时,分析仪已无法保证检测准确性,而传统的手工计数准确性较差,差异较大,无法起到良好的复核作用。建议采用流式细胞术对此类标本进行复检。; 张蕾李智李泳汪嘉李晶华; 关键词：低值血液分析仪 ROC曲线手工计数

妊娠高血压综合征患者外周血中胎儿细胞的检测与免疫状况研究被引量：1: 2008年; 目的研究孕妇外周血中胎儿细胞种类、数量及免疫状况与妊娠高血压综合征（PIH）的关系，探讨PIH的发病机制。方法（1）采用流式细胞术比较3种不同方法：CD71、HbF／i抗原（血红蛋白F／血型i抗原）和HbF／CA（血红蛋白F／碳酸酐酶）分别检测孕妇外周血中胎儿有核红细胞（tNRBCs）。（2）同时检测孕妇组和PIH组的免疫学指标：淋巴细胞亚群、细胞因子等。结果（1）3种方法CD71、HbWi抗原、HbF／CA检测胎儿红细胞PIH患者组[百分比中位数（95％可信上限）分别为6．56（11．37）％、0．09（0．16）％、0．6（0．11）％]与正常孕妇组[分别为1．58（3．35）％、0．04（0．08）％、0．02（0．06）％]差异均具有统计学意义（z值分别为：-5．31、-2．97、-4．13，P值均〈0．01）。（2）PIH组的淋巴细胞亚群和TNFα及IL-6，除CD8（30．2±7．1）％与正常孕妇组（31．0±7．1）％差异无统计学意义（P=0．620）外，CD3（76．4±8．5）％、CD4（42．6±6．4）％、CD4／CDB（1．5±0．4）％、CD19（10．5±3．9）％、CD16／CD56（12．2±7．7）％、TNF-α（1．4±0．6）μg/L及IL-6（89．6±12．9）μg/L和正常孕妇组[分别为CD3（70．4±8．3）％、CD4（35．3±6．9）％、CD4／CD8（1．2±0．4）％、CD19（8．2±2．8）％、CD16／CD56（20．5±8．9）％、TNF-α（0．5±0．2）μg／L及IL-6（22．0±5．7）μg/L]之间差异均具有统计学意义（P〈0．001）。结论孕妇外周血中tNRBCs的数量增多引起的免疫状况的改变均可能是PIH发生发展的重要因素。; 李智李晶华许丙根成佳景吴逸顾小萍; 关键词：高血压妊娠性幼红细胞淋巴细胞亚群细胞因子类

上海汉族人群维生素D结合蛋白基因多态性与2型糖尿病的相关分析被引量：2: 2006年; 采用PCR-RFLP技术研究维生素D结合蛋白(DBP)基因Asp416Glu和Thr420Lys多态性与2型糖尿病的关系。经传递不平衡检验和同胞传递不平衡检验,结果不支持连锁。但此基因多态性对胰岛B细胞功能有一定作用。; 王艳波于永春李智李晶华汪纯王红玲

膀胱癌组织中上皮细胞钙依粘连蛋白基因启动子区CpG岛甲基化状态的分析被引量：7: 2005年; 　　目的　探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状态及其与mRNA表达的关系。方法　收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测E cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态;采用逆转录PCR检测E cadherin基因的mR NA表达。结果　E cadherin基因在膀胱癌组织中的甲基化阳性率(43.3%)显著高于在癌周正常组织中的甲基化阳性率(6.7%,P<0.01);在复发性膀胱癌中的甲基化阳性率(64.7%)显著高于在原发性膀胱癌中的甲基化阳性率(15.4%,P<0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性。13例异常甲基化的膀胱癌组织中有10 例未检测到CDH1mRNA的表达,而13例未甲基化膀胱癌组织中有2例未检测到,二者差异有显著性(P< 0.01)。结论　E cadherin在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床分期和病理分级无显著相关性,提示其可能参与了膀胱癌的发生;E cadherin基因CpG岛的过甲基化可能成为判断膀胱癌复发的指标之一;E cadherin基因CpG岛的过甲基化可能是造成E cadherinmRNA不表达的原因之一。; 赵敏李智于永春段建敏李晶华; 关键词：膀胱癌组织 E-CADHERIN基因 CPG岛基因启动子区粘连蛋白

Wip1联合Bmi1参与人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复: 2013年; 目的探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)在人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复中的可能作用,为椎间盘退行性变的临床诊治提供参考。方法取人椎间盘髓核细胞体外培养,小干扰(siRNA)技术干扰细胞Wip1表达,放射性照射(4、10、15、25Gy)髓核细胞,采用彗尾实验观察DNA损伤及损伤修复反应(DNAdamagerepair,DDR)情况,并与未干扰Wip1髓核细胞作对照;采用免疫共沉淀(Co-IP)技术检测Wip1潜在结合蛋白;根据筛选结果采用实时定量RT-PCR技术检测病变椎间盘组织Wip1及潜在结合蛋白的表达情况。结果彗尾实验表明:干扰Wip1表达后,25Gy剂量射线导致髓核细胞DNA损伤的修复并不受影响,但DDR持续激活,对照组在照射后24h已经检测不到DNA损伤修复的标识分子,但siRNA干扰Wip1表达组细胞照射后48h仍可检测到标识分子。Co-IP实验表明:放射性照射正常对照细胞后,Wip1与Bmi1在细胞核内分布重合,而且聚集在DNA损伤位点,而siRNA抑制Wip1表达后,这种结合随即消失。实时定量RT-PCR结果表明:与正常椎间盘组织相比,椎间盘退变组织Wip1、Bmi1基因表达下降,且两者呈正相关(P<0.05)。结论 Wip1通过调控DDR时限参与了人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复,Bmi1可能参与此过程。; 俞蕾何奖图王勤婉于永春潘秋辉李晶华; 关键词：椎间盘退行性疾病 DNA修复 WIP1 BMI1

PC-1基因K121Q变异与2型糖尿病的关系被引量：7: 2005年; 目的探讨浆细胞膜糖蛋白(PC1)基因4号外显子K121Q多态性与2型糖尿病及临床特征的相关性。方法用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR RFLP)、DNA测序等技术检测上海地区汉族人群中165例2型糖尿病患者和98名正常糖耐量对照者PC1基因K121Q的多态性分布情况,同时采用PCR单链构像多态性分析(PCR SSCP)筛查该区域其他可能与2型糖尿病发生有关的多态性位点。结果糖尿病患者中KK基因型143例(86.67%),KQ基因型22例(13.33%),QQ基因型0例(0.00%),K、Q等位基因频率分别为93.33%和6.67%;正常对照组中KK基因型85例(86.73%),KQ基因型12例(12.25%),QQ基因型1例(1.02%),K、Q等位基因频率分别为92.86%和7.14%,2组人群的基因型和等位基因频率差异无显著性(P>0.05);2型糖尿病患者中Q等位基因携带者的胰岛素抵抗指数(IR)、血糖、胰岛素、血脂等均略高于KK基因型的患者,但两者之间的差异均无显著性;中国上海地区汉族人群Q等位基因频率明显低于欧洲白种人。结论目前尚不能确定PC1基因K121Q多态性与上海地区汉族人群胰岛素抵抗及2型糖尿病发病相关;PC1基因的K121Q多态性具有明显的种族差异。; 于永春李智李晶华滕小洪汪纯赵敏; 关键词：2型糖尿病遗传多态性

5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响: 2009年; 目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2-′deoxyc ityd ine,5-Aza-CdR)对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-tim e RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化。结果2×10-6、5×10-6、1×10-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显:5×10-6、1×10-5mol/L组分别为(34.09±0.79)、(28.55±1.76),与对照组(42.78±1.23)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达。结论5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。; 冷俊翁文浩李智许闪闪李晶华; 关键词：5-AZA-CDR APAF-1基因膀胱肿瘤 DNA甲基化

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李晶华

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