杜文敬
- 作品数：11 被引量：18H指数：3
- 供职机构：东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力
- 2009年
- 将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力。其结果,在10℃下保存24h、15℃下保存14h、20℃下保存8h和25℃下保存4h后,其体内附有卵丘细胞的GV卵的体外成熟-体外受精后的2细胞率分别为14%、9%、10%和10%,随着保存温度的提高和保存时间的延长,带有颗粒细胞GV期卵的比率明显降低,同时其GV期卵经体外成熟及体外受精后的2细胞率明显降低。在20℃下保存24h和25℃下保存14h时,难以获得形态正常的GV期卵;体外受精获得的2细胞期胚经体外培养,总体上有64%的胚胎发育至扩张囊胚,未见有保存温度和保存时间的显著影响,且利用在15℃保存8h后的GV卵获得2细胞期胚的移植获得正常新生小鼠。上述结果表明,雌性动物室温条件下死亡后,若能短时间及时采集其体内GV期卵并体外成熟、体外受精,体外培养及胚胎移植技术,就有可能获得新生后代。
- 杜文敬安星兰王春生朴善花安铁洙
- 关键词：小鼠体外成熟体外受精
- 小鼠MyoD基因真核表达载体的构建与检测被引量：1
- 2015年
- 为了最终建立诱导小鼠iP S细胞为成肌细胞的方法,试验在克隆小鼠Myo D基因的基础上,将其与pc DNA3.1载体连接,以构建真核表达载体;采用脂质体法将重组质粒转染到小鼠胚胎成纤维细胞中,利用Real-time PCR技术、免疫荧光检测和流式分析等技术对转染前后细胞的Myo D基因表达情况进行检测。结果表明:成功克隆获得Myo D基因,并构建真核表达载体Myo D-pc DNA3.1;转染Myo D-pc DNA3.1的小鼠胚胎成纤维细胞经免疫荧光检测后在荧光显微镜下呈现表达Myo D基因的红色;Real-time PCR检测其Myo D基因相对表达量提高至8.926±0.010;经BD Accuri-C6个人型流式细胞仪检测,约有93%的转染细胞表达Myo D蛋白,在荧光倒置显微镜下可观察到表达Myo D蛋白而呈现的绿色荧光。说明已成功构建特异表达Myo D基因的真核表达载体Myo D-pc DNA3.1。
- 马丽媛王春生杜文敬朴善花安铁洙
- 关键词：小鼠成肌细胞转染成纤维细胞表达量
- 逆转录病毒载体的研究进展被引量：3
- 2010年
- 基因传递技术被广泛应用于基因治疗、基因改造等领域,其中逆转录病毒载体由于其遗传的稳定性、转染的高效性而得到迅速地发展。作为传递基因的工具,打靶到特定组织和细胞的能力、效率、目的基因的表达情况及生物安全性问题都值得深入探讨。文章从逆转录病毒的分类和基因结构、载体的发展历程、构建特点等几方面进行了阐述。
- 梁洋杜文敬苏畅安铁洙
- 关键词：逆转录病毒基因传递
- 绵羊脐带间充质干细胞iPSCs诱导及定向分化的研究
- 脐带间充质干细胞(Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UCMSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞。UCMSCs具有来源丰富、不涉及伦理道德、低免疫原性、体外扩增能力强及能...
- 杜文敬
- 关键词：绵羊定向分化诱导多能干细胞脐带间充质干细胞
- 文献传递
- 小鼠卵母细胞及早期胚胎的玻璃化冷冻
- 为了筛选适合冷冻保存小鼠成熟卵母细胞的冷冻保护剂,并且初步探明小鼠成熟卵母细胞在冷冻过程中的损伤机制,本研究采集ICR雌性性成熟小鼠的成熟卵母细胞,采取细管法使用不同的冷冻保护剂(EFS40,VS1,A10-10)冷冻保...
- 杜文敬
- 关键词：动物模型冷冻保护剂
- 文献传递
- 转敲低MSTN基因绵羊重构胚的移植及鉴定
- 2018年
- 为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发育至桑椹胚比率(分别为15.6%和33.0%)相比,差异无统计学意义;将重构胚移植23只受体后,获得1只流产胎儿,对其进行PCR鉴定,结果显示MSTN基因干涉序列已整合入流产胎儿的基因组中。
- 杜文敬李昊薛超朴善花王春生安铁洙
- 关键词：绵羊RNA干涉体细胞核移植
- DMSO在诱导绵羊脐带间充质干细胞为成肌细胞中的作用被引量：1
- 2016年
- 为了探明二甲基亚砜(DMSO)在绵羊脐带间充质干细胞(MSCs)分化为成肌细胞的作用,研究将绵羊MSCs用含有DMSO的F12/DMEM合成培养基进行诱导培养后观察其细胞形态、免疫荧光并利用流式细胞仪检测成肌细胞特异因子,如肌分化因子(Myo D)、肌间线蛋白(Desmin)、肌细胞生成素(Myo G)等的表达及RT-PCR检测成肌细胞特异因子的相对表达量。结果表明:与对照组(不含DMSO的F12/DMEM培养基)细胞形态不发生变化相比,用含DMSO的F12/DMEM培养基诱导培养21 d后,其细胞由长梭形变为具有成肌细胞特点的细长管状;在开始诱导培养后的第16天进行成肌细胞标志性蛋白Myo D、Desmin、Myo G抗体免疫荧光检测,与对照组呈现阴性相比,所诱导细胞呈阳性。用流式细胞仪的检测结果显示,诱导细胞的表达成肌细胞特异因子Myo D、Desmin、Myo G的阳性细胞率分别为99.3%、99.5%、86.6%;RT-PCR的检测结果显示,与对照组(表达量为1)相比,诱导细胞的Myo D、Myo G、Desmin相对表达量均升高,分别为(3.71±0.01)倍、(1.86±0.01)倍、(5.27±0.01)倍。表明DMSO具有诱导绵羊MSCs分化为成肌细胞的功效。
- 刘琳王春生马丽媛杜文敬朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊诱导分化成肌细胞
- 小鼠早期胚胎的EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25玻璃化法冷冻保存被引量：3
- 2010年
- 为了筛选适合用于小鼠不同发育时期胚胎的玻璃化冷冻方法,采用EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25法分别冷冻保存不同发育期的小鼠胚胎。结果表明,采用EFS20/40法冷冻的2细胞期胚经解冻后发育至扩张囊胚的比率(93%)显著高于EFS40、DAP213和GP25法(分别为70.9%、39.1%和11.1%)(P<0.01);采用EFS20/40法冷冻保存小鼠4～8细胞期胚时,与EFS40相比,解冻后发育至扩张囊胚的比率差异不显著(分别为86.2%和90.0%),但与DAP213(64.5%,P<0.05)和GP25法(47.8%,P<0.01)相比其扩张囊胚率显著增高。此外,虽然EFS40法与EFS20/40法冷冻保存小鼠桑椹胚解冻后的扩张囊胚率差异不显著(分别为68.9%和70.8%),但均显著高于DAP213(38.9%)和GP25法(37.5%)(P<0.01)。结果表明,EFS20/40法适合用于小鼠的2细胞期冷冻保存,而EFS20/40和EFS40法均适合用于4～8细胞期胚和桑椹胚的冷冻。
- 梁洋杜文敬王春生朴善花安铁洙
- 关键词：早期胚胎玻璃化冷冻保存体外培养
- EFS20/40和GP25玻璃化法冷冻保存小鼠体外受精2细胞期胚的效果被引量：2
- 2017年
- 为了筛选适合用于冷冻保存小鼠体外受精2细胞期胚胎的方法,本研究采用EFS20/40法和GP25法对体外受精小鼠2细胞胚进行冷冻保存,并经解冻后进行体外培养,观察其胚胎发育至扩张囊胚的能力。其结果,虽然两种方法冷冻解冻后的正常胚胎回收率相近,但采用EFS20/40法冷冻解冻的胚胎在体外发育至扩张囊胚比率(84.9%)显著高于GP25法的54.8%(P<0.05)。表明EFS20/40法适合用于小鼠体外受精2细胞期胚胎的冷冻保存。
- 朴香丽杜文敬王春生尹洪哲朴善花
- 关键词：小鼠体外受精玻璃化冷冻
- 小鼠MyoD基因诱导绵羊脐带间充质干细胞为成肌细胞的研究
- 2016年
- 为了探讨小鼠MyoD基因诱导绵羊脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)为成肌细胞的可能性,本研究用小鼠MyoD-pcDNA3.1真核表达载体质粒转染绵羊UCMSCs,在观察细胞形态变化的同时,检测成肌细胞标记蛋白表达、表达成肌细胞特异蛋白的细胞比率和成肌细胞特异基因mRNA相对表达量。结果显示,与对照组(未转染)相比,在转染MyoD-pcDNA3.1质粒后第21天,大部分细胞呈现似成肌细胞的细长管状;与对照组未表达相关蛋白相比,转染MyoD-pcDNA3.1后第8天,在荧光倒置显微镜下观察到细胞表达MyoD和Desmin蛋白荧光,转染后第16天,不仅观察到细胞表达MyoD和Desmin,而且观察到MyoG蛋白的表达;对于转染细胞后22d的细胞进行流式细胞仪检测显示,表达MyoD、MyoG和Desmin的细胞比率分别达93.5%、97.4%和99.5%;此外,实时荧光定量PCR检测显示,转染MyoD-pcDNA3.1后第28天,其细胞中的MyoD、MyoG和Desmin mRNA相对表达量分别提高2.046、2.389和5.489倍。上述结果表明,利用小鼠MyoD构建真核表达载体具有诱导UCMSCs分化为成肌细胞的功效。
- 张宝马丽媛王春生杜文敬朴善花安铁洙
- 关键词：小鼠MYOD基因成肌细胞
