林华
- 作品数：44 被引量：138H指数：6
- 供职机构：四川出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 鲤疱疹病毒2型ORF5截短基因的克隆表达及免疫原性研究被引量：8
- 2016年
- 根据G en Bank上已登录的鲤疱疹病毒2型的O RF5基因序列(登录号:AFJ20457.1)设计1对引物,采用PCR扩增技术获得目的基因。序列分析表明,目的基因长357 bp,是一个完整的开放阅读框,编码119个氨基酸,理论分子质量为13 059.70 u,无信号肽,无跨膜区,含有4个抗原表位。将扩增片段克隆至原核表达载体p ET-32a中,并将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。对表达蛋白进行复性纯化后免疫小鼠和异育银鲫,SD S-PAGE和W estern-blot检测分析表明,重组蛋白的分子质量约为33 ku,与预期相符,表达形式为包涵体,该蛋白能够与抗H is标签的抗体发生特异性反应,也能识别病毒粒子上的ORF5蛋白。对免疫的异育银鲫进行攻毒,结果显示注射生理盐水组的银鲫保护率为0,注射15、25、50 g重组蛋白组的保护率分别为20%、30%、35%,表明免疫重组蛋白组的保护率高于对照组。本研究证实了表达的融合蛋白具有一定的免疫原性,丰富了鲤疱疹病毒2型ORF5基因及基因组的研究,为研发制备新型鲤疱疹病毒2型的疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。
- 廖红林华郝中香佘容陈世界杨苗陈珍容薛昌华赵珊韩国全曹三杰颜其贵
- 关键词：克隆表达攻毒保护试验
- HP-PRRSV和PCV-2混合感染的诊断及阿司匹林与替米考星联合应用的治疗效果
- 2017年
- 四川省某规模化猪场各阶段猪只陆续发病,通过临床症状观察、病理剖检、实验室诊断确诊发病猪为高致病性繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)混合感染,选取混合感染检测阳性病猪40头进行治疗试验,结果表明阿司匹林与替米考星联合使用对HP-PRRSV与PCV-2混合感染治疗效果较好,随后联合应用阿司匹林与替米考星对大群猪进行了治疗,取得了较为理想的效果。
- 杨苗林华李建臻陈世界方智安微
- 关键词：阿司匹林替米考星联合用药
- 混合感染猪繁殖与呼吸综合征和圆环病毒2型猪群的猪瘟抗体变化研究被引量：6
- 2016年
- 本试验研究旨在探究猪场发生猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)与圆环病毒2型(PCV2)混合感染后,猪群的猪瘟抗体变化,运用RT-PCR、实时荧光RT-PCR与PCR方法,对四川某规模化发病猪场进行高致病性PRRS、猪瘟与圆环2型的病原检测。结果显示高致病性PRRS、圆环2型和猪瘟阳性率分别为54%(19/35)、50%(17/34)、0(0/5)。结合临床症状、病猪剖检变化,确诊为PRRSV与PCV-2混合感染。采集PRRS与PCV-2混合感染病猪血清12份为试验组,本场健康猪只(无临床症状、抗原检测阴性)12份为对照组,运用ELISA试验检测猪群猪瘟抗体,结果显示试验组的猪瘟抗体合格率为33%(4/12),显著低于健康对照组的合格率83.3%(10/12)(P<0.05),结果表明PRRS和PCV2混合感染会对猪瘟抗体产生负面影响。
- 杨苗李建臻林华陈世界徐刚
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征圆环病毒2型猪瘟抗体
- 登革病毒3型E蛋白的原核表达及抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 目的原核表达并纯化登革病毒3型（DENV-3）E蛋白，并用于制备其抗体。方法采用PCR技术克隆DENV-3E蛋白基因，插入原核表达质粒载体pET-32a（＋），转化大肠杆菌RoseRa（DE3），IPTG诱导表达。表达产物经纯化后，免疫家兔，制备DENV-3E蛋白抗血清，并用于Westernblot鉴定。同时，采用ELISA测定其抗体效价，并初步应用于DENV-3的检测。结果重组表达载体经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为65×103，主要以包涵体形式表达；用纯化的包涵体蛋白免疫家兔后，获得的特异性抗血清效价为1：20480，该血清可与DENV-3发生特异性反应。结论本研究原核表达并纯化了DENV-3E蛋白，制备了高滴度的特异性兔抗血清。制备获得的DENV-3E蛋白抗体可用于登革病毒的鉴定，为登革病毒相关研究奠定了基础。
- 林华杨会强李竹石杨健赵宇刘俐葛永红曾献武曹毅乔代蓉李玉华
- 关键词：登革病毒E蛋白原核表达多克隆抗体
- 沙门菌nirB基因启动子区域分子克隆及序列分析
- 2011年
- 为了给构建含沙门菌内源性诱导启动子基因疫苗表达载体奠定物质基础,试验从活化培养的猪霍乱沙门菌C500中提取细菌基因组DNA,运用PCR技术扩增nirB基因启动子区域,回收、纯化,将TA克隆到pUCX-T载体上,对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果表明:成功扩增出nirB基因启动子区域,长约760 bp;成功构建了其TA克隆重组质粒pUCX-Pn irB;序列分析结果显示Pn irB与其他沙门菌相关序列核苷酸同源性较高,为96%～100%,其中与猪霍乱沙门菌SC-B67核苷酸同源性高达100%;NNPP分析结果显示Pn irB启动子基因区域有3个较强的启动子Promotor序列,具有启动基因表达的基本元件。说明成功获得了猪霍乱沙门菌C500 nirB基因启动子区域基因。
- 王小玉韩国全郭万柱林华张博王利娜任玉鹏
- 关键词：分子克隆
- 乙型脑炎疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸回复突变对其毒力的影响被引量：6
- 2013年
- 目的:探索乙型脑炎病毒(JEV)疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸(E279)MK回复突变(M279K)对其毒力的影响。方法:用重叠延伸PCR技术和基因克隆技术构建含有SA14-14-2包膜蛋白M279K突变的全长cDNA质粒pACNR-JEV(M279K),并以其为模板体外转录RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞得到恢复病毒rJEV(M279K),并比较恢复病毒和疫苗病毒在蚀斑大小以及对小鼠神经毒力等方面的差别。结果:酶切及测序表明质粒模板成功构建,除人为引入的突变外(碱基1813处T→A),无任何碱基突变,并发现rJEV(M279K)形成比疫苗株更小的蚀斑,但毒力与疫苗株无显著差异。结论:E279回复突变影响乙脑疫苗SA14-14-2病毒蚀斑大小,但并未明显增强疫苗株对小鼠的神经毒力。
- 杨健李玉华李竹石林华汪伟刘丽娜倪谦枝曾献武杨会强
- 关键词：乙型脑炎病毒疫苗回复突变
- 内江猪IL-15基因的表达与免疫增强作用研究被引量：3
- 2009年
- 参照GenBank中猪IL-15基因的mRNA序列设计1对特异性引物,从经由刀豆蛋白A诱导培养的内江猪外周血淋巴细胞扩增猪IL-15基因;构建其成熟肽原核表达载体pMAL-pIL-15,在Rosetta(DE3)pLysS中表达;构建其真核表达载体pCI-pIL-15,与pCI-gD(PRV)联合免疫雌性BALB/c小鼠以研究其免疫增强作用。测序结果显示,内江猪IL-15基因与发表的猪IL-15基因的核苷酸同源性为97%～99%,含489 bp的完整开放阅读框。SDS-PAGE分析显示,表达的融合蛋白约为52.5 ku,约占菌体总蛋白的27%。Western-blot检测显示,所表达的融合蛋白为麦芽糖结合蛋白的融合蛋白。MTT法试验证实,该融合表达产物经初步纯化、透析复性后,可明显增强淋巴细胞增殖;小鼠免疫试验显示,pCI-pIL-15能够促进小鼠脾CD4+、CD8+T细胞增殖,加强PRV-gD基因疫苗特异性中和抗体的产生。
- 韩国全郭万柱王印徐志文朱玲林华张博王小玉
- 关键词：内江猪分子克隆免疫增强作用
- 猪前胸腺素真核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 为了构建含有EGFP的猪ProTα基因的真核表达载体,用RT-PCR从猪肾脏中扩增ProTα基因,连接到T载体,测序鉴定后,连接到pEGFP-N3真核表达载体,构建真核表达载体pEGFP-ProTα。通过脂质体法转染Vero细胞,进行荧光检测。结果表明,构建的pEGFP-ProTα真核表达质粒,转染Vero细胞后,经荧光观察EGFP-ProTα融合蛋白有向细胞核聚集的现象。结论:本研究成功构建了真核表达载体pEGFP-ProTα,并在Vero细胞中表达,为研究猪ProTα的功能奠定了基础。
- 王小玉林华郭万柱徐志文王印朱玲
- 关键词：真核表达绿色荧光蛋白VERO细胞
- 减毒猪霍乱沙门菌C500作为基因疫苗运载体的研究现状被引量：1
- 2009年
- 基因疫苗具有众多的优点,被誉为疫苗研究的第3次革命,但是在畜牧生产的使用中存在系列亟待解决的问题,其中关键的问题就是如何将基因疫苗表达质粒导入到动物机体免疫细胞,减毒胞内寄生菌的应用很好的解决这一问题。目前我国仔猪副伤寒弱毒活疫苗使用的基本都是C500株,以其作为猪群重要传染病基因疫苗运载体的应用研究具有重要临床应用价值,对猪霍乱沙门菌疫苗株C500作为基因疫苗运载体的研究现状予以概述。
- 韩国全郭万柱林华张博王利娜李小欢王小玉
- 关键词：基因疫苗
- 猪瘟病毒四川分离株E2基因的分子克隆、原核表达及免疫学活性分析被引量：4
- 2010年
- 分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3)plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CS-FVE2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。
- 韩国全郭万柱林华王利娜张博陈弟诗陈杨
- 关键词：猪瘟病毒四川分离株E2基因原核表达免疫学活性
