梁燕 作品数:9 被引量:44 H指数:3 供职机构: 内蒙古大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家基础科学人才培养基金 转基因生物新品种培育专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
内蒙古白绒山羊4E-BP1基因cDNA克隆及组织表达特异性分析 被引量:1 2012年 旨在克隆内蒙古白绒山羊4E-BP1(真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)基因并进行生物信息学及表达模式分析。根据已报道物种4E-BP1基因cDNA序列,用primer premier5软件设计引物,通过RT-PCR从绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA中扩增出4E-BP1基因编码区cDNA序列,对目的片段进行测序及表达模式分析。克隆到的内蒙古白绒山羊4E-BP1基因cDNA全长357 bp,包含了完整的的ORF,编码118个氨基酸残基。核酸序列与牛、马、人、大鼠及小鼠的同源性分别为98%、90%、90%、88%和87%。4E-BP1基因在绒山羊脑、心脏、睾丸及胰腺组织中均有表达。 傅海霞 杨娇馥 梁燕 陈宇浩 王志钢关键词:组织特异性表达 克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞 被引量:6 2010年 【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整ORF,编码44个氨基酸残基,氨基酸序列与已报道的牛胸腺素β4(NM_001002885)同源性为100%。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KT中,Tβ4基因正确连接在皮肤特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和Tβ4基因整合到细胞基因组中,筛选出的转基因细胞高效表达红色荧光蛋白。【结论】克隆得到内蒙古白绒山羊Tβ4基因并构建成功其真核表达载体,可稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过核移植方法获得转胸腺素β4基因绒山羊提供了条件。 王彦凤 梁燕 金永 王晓晶 郭旭东 王玮 王潇 王志钢 刘东军关键词:胸腺素Β4 稳定转染 退化羊草草原围栏封育多样性动态研究 被引量:23 2009年 在内蒙古锡林郭勒盟中国科学院内蒙古草原生态系统定位研究站对退化羊草草原围栏封育后的多样性动态进行了研究。样地于1983年围栏封育自然恢复,围封前植被为羊草草原的退化变体,即以冷蒿为建群种的含小叶锦鸡儿斑块的冷蒿+丛生小禾草、羊草群落。对25年恢复过程的群落多样性进行研究的结果表明:退化草原围栏封育自然恢复过程中,密度多度和生物量多度分布基本符合正态分布;植物群落的多样性指数和均匀性指数总体上保持稳定;羊草、冰草、冷蒿的生物量和密度的变化与多样性指数有显著负相关关系,星毛委陵菜的生物量和密度变化与多样性指数有显著的正相关关系。 宝音陶格涛 刘海松 图雅 梁燕关键词:多样性 内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT基因的克隆及表达模式分析 被引量:3 2011年 【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM_001161857.1)同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的S_TKc结构域。Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。PSORT程序预测其定位于细胞质中。AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTOR活性,AKT表达量降低。【结论】内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控。 杨娇馥 史偈君 梁燕 郑旭 张涛 秦毅 王志钢 刘东军关键词:AKT 基因克隆 共转染Krox20和IGFBP5基因绒山羊胎儿成纤维细胞克隆的筛选 IGFBPS基因被认为是第一个区分不同毛囊类型的标记基因,它在毛囊中的表达可引起毛发的弯曲与细化。本研究旨在筛选得到IGFBPS和Krox20两个基因共转染的绒山羊胎儿成纤维细胞克隆,以探索IGFBPS与Krox20在绒... 梁燕 王晓晶 王彦凤 王潇 郭旭东 王志钢 刘东军关键词:转基因克隆 绒山羊 胎儿成纤维细胞 文献传递 表达红色荧光及转胸腺素β4基因绵羊胎儿成纤维细胞系的制备 被引量:1 2010年 旨在构建胸腺素β4(thymosin beta4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆。将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2的多克隆位点,构建表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4,脂质体介导转染绵羊胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。RT-PCR检测Tβ4基因在宿主细胞中的转录。测序结果显示,构建的表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4序列中,Tβ4基因正确连接在CMV启动子下游,顺序连接IRES2序列和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为15%,经G418筛选得到转基因细胞克隆并高效表达红色荧光蛋白。RT-PCR检测显示外源Tβ4基因在绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建具有红色荧光蛋白和新霉素抗性双选择标记的胸腺素β4基因真核表达载体并稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞,筛选得到的超表达胸腺素β4绵羊胎儿成纤维细胞系为下一步通过核移植和克隆技术获得转基因绵羊提供了条件。 王彦凤 梁燕 王玮 史偈君 金永 王晓晶 郭旭东 王潇 王志钢 刘东军关键词:胸腺素Β4 天冬氨酸介导的细胞增殖调控 被引量:7 2018年 细胞生长与增殖是一个复杂的调控过程,需要大量营养物质、能量、辅因子及代谢中间物。该文着重讨论了天冬氨酸与细胞呼吸过程对细胞增殖的影响及其作用机制。首先,介绍了电子传递链(electron transport chain,ETC)的作用原理,并讨论与细胞增殖之间的关系;其次,从天冬氨酸的合成代谢开始,探讨了天冬氨酸对ETC缺陷型细胞的影响,与三羧酸循环、核苷酸代谢的相互关系,进而探讨了天冬氨酸作为一个重要氨基酸对细胞周期的协调作用。总结已有研究成果发现,天冬氨酸不同于丙酮酸作为电子受体发挥功能,而是通过其在体内的合成与转化参与胞内三羧酸循环及核苷酸代谢等生物途径进而促进细胞增殖,为后续细胞增殖调控研究提供了新思路。 梁燕 莫日根关键词:天冬氨酸 细胞呼吸 细胞增殖 细菌的群体感应及与病原菌致病性的关系 被引量:3 2011年 微生物的群体感应(quorum sensing,QS)也称为自诱导,是微生物间通过小分子分泌物(自诱导物)在细胞与细胞之间扩散以感知群体密度,并通过自诱导物的浓度及其与转录因子的相互作用调控整个群体细胞中一系列目标基因表达的一种自我感知系统。不同的细菌类型,其QS系统也有一定的差异。根据信号分子的不同,一般可以将细菌的QS系统分为3类,即以AHL为信号分子的革兰氏阴性细菌、以寡肽类物质为信号分子的革兰氏阳性细菌和以哈氏弧菌为代表的兼具上述两种类型QS系统特征的第三类QS系统。综述革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和哈氏弧菌的3种不同QS系统及其在病原菌致病性方面的研究进展。 梁燕 王志钢关键词:细菌 信号分子 大肠杆菌SeqA蛋白质结构与功能 2016年 大肠杆菌Seq A蛋白质是染色体复制起始负调控因子。在体内,Seq A主要以四聚体或多聚体形式存在,有N-端多聚化结构域和C-端DNA结合结构域。大肠杆菌复制原点(the origin of replication of the Escherichia coli chromosome,ori C)有11个GATC位点,新复制的ori C处于半甲基化状态,其中相邻的两个半甲基化GATC是Seq A特异性结合靶位点。Seq A通过结合新复制的半甲基化ori C来抑制复制起重新发生,从而使ori C隔绝(sequestration)。由Seq A介导的ori C隔绝是抑制同一个细胞周期中复制起始重新发生的机制之一。Seq A不仅是复制起始调控因子,也是一个转录因子,抑制或激活一些基因的表达。该文就Seq A蛋白质的结构与功能域特点,对DNA复制起始和基因表达调控机制以及细胞分裂中的作用作一综述。 乌日汗 梁燕 李静 莫日根