- 感觉神经节与心肌细胞联合培养的方法探索
- 1998年
- 本实验室自1984年起至今一直从事神经细胞体外培养的研究.Burrow已发表了在含血清培养液中培养出了鸡胚心脏组织的游离心肌细胞.本文旨在将新生大鼠的背根神经节或迷走神经结状神经节分别与自身的分离心肌细胞进行联合培养并首次成功地建立了感觉神经支配心肌细胞的体外培养模型.为研究神经细胞与心肌细胞之间的相互作用提供新的途径.1材料与方法1.1背根神经节或迷走神经结状神经节的培养,采用出生后24小时内的Sprague-Daluey大鼠,性别不限.在无菌条件下用显微解剖镜下取出背根神经节或迷走神经结状神经节,放入Tyrode平衡盐溶液中精细解剖,剥去神经节外膜,并以Tyrode平衡盐溶液反复冲洗,将其种植于预先涂有鼠尾胶的直径为24mm的圆玻片上同时可种3～4个背根神经节或迷走神经结状神经节,加培养液,然后将圆玻片放入小培养血中,置于37C,5%CO_2培养箱内约2～3小时,让组织块贴壁于涂有鼠尾胶的圆玻片上.1.2心肌细胞培养 无菌条件下,在取神经节的同时取出该动物的心脏,用D—Hank液将心脏漂洗干净.用眼科尖剪刀将其的成直径约1mm大小的小块,用0.125%胰酶消化5分钟。
- 汪洋沈馨亚于彦铮李振中
- 关键词：感觉神经节心肌细胞体外培养
- 脊神经节来源的人胎儿雪旺氏细胞的体外培养研究被引量：10
- 1995年
- 实验介绍一种简便快速的从人胎儿脊神经节中获得雪旺氏细胞的方法.取孕15～20周人胎儿腰部脊神经节,将其切成0.5mm^3大小,接种于涂有鼠尾胶的圆盖玻片上,为了消除成纤维细胞,每隔2～3天将组织块移种到新的盖玻片上,共2～3次,最后一次移种后,培养液中加入牛脑垂体浸出液(200μg/ml)培养7～10天以刺激细胞增殖,每个脊神经节可获细胞5×10~6,细胞传代培养生长良好.根据形态学以及抗S—100蛋白免疫细胞化学染色阳性标准计数,雪旺氏细胞的纯度超过96%.扫描电镜和透射电镜显示典型的雪旺氏细胞的形态学特征.
- 严恒林沈馨亚刘才栋陈丽琏汪洋王之美
- 关键词：人胚胎脊神经节雪旺氏细胞
- 血管内皮细胞的体外培养及形态学观察被引量：26
- 1996年
- 为探索经济有效的体外培养血管内皮细胞的方法,实验分别用(1)单纯胰酶;(2)全胶原酶:(3)胰酶(5份)和胶原酶(1份)三种方法分离牛主动脉内皮细胞.结果表明:用胰酶胶原酶混合消化的方式获取的内皮细胞的数量与全胶原酶获取的内皮细胞数量接近,而混合消化的方法大大降低了价格昂贵的胶原酶的用量,既经济效果又好.用相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察培养细胞的形态符合内皮细胞的特征.细胞八因子抗原染色阳性进一步证明培养的细胞是血管内皮细胞.
- 孙继虎汪洋于彦铮江国伟王克强
- 关键词：血管内皮细胞胰蛋白酶胶原酶形态学
- 雪旺氏细胞对中枢神经轴突生长的支持和促进作用被引量：4
- 1995年
- 胚胎大鼠脊髓植块接种于纯度>95%的单层人胎儿雪旺氏细胞表面进行培养,观察雪旺氏细胞对神经突起生长的支持作用.脊髓神经突起在雪旺氏细胞表面活跃生长,突起生长速度>450μm/天,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).将长于鼠尾胶上的雪旺氏细胞移植于成年大鼠脊髓(T10～12)损伤腔内,移植后21天后,透射电镜观察,有髓或无髓纤维长入移植物中,移植后30天,长入移植物中的轴突更丰富,而无细胞的胶原移植物中未见轴突长入.结果表明,雪旺氏细胞在体内、外能支持和促进中枢神经轴突生长.
- 严恒林沈馨亚刘才栋陈丽琏汪洋王之美
- 关键词：雪旺氏细胞脊髓神经发育轴突
- 雪旺细胞在聚酯纤维上的迁移及对神经突起的引导作用被引量：12
- 1996年
- 用组织培养技术,将SD大鼠的坐骨神经段及脊神经节培养在聚酯纤维上,最长培养时间为30天,对雪旺细胞的行为进行了研究.用倒置相差显微镜、扫描电镜及透射电镜对雪旺细胞的行为作了观察.结果显示:雪旺细胞沿聚酯纤维作螺旋式迁移;雪旺细胞支持并引导脊神经节突起的生长;聚酯纤维对神经段和脊神经节有良好的生物相容性.实验为非神经移植体研究提供了新的材料.
- 杨勤沈馨亚刘才栋严恒林汪洋
- 关键词：雪旺细胞迁移聚酯纤维
- 体外培养人胎儿雪旺氏细胞的增殖及其细胞动力学研究被引量：7
- 1996年
- 新鲜和液氮保存3个月的人胎儿雪旺氏细胞体外培养8天,细胞数量增加一倍,培养液中加入二丁基环磷酸腺苷和牛脑垂体浸出液,细胞增倍时间缩短近一倍.流式细胞计测定结果显示,培养早期,S期、G2+M期细胞所占比例<5%,随着培养时间的延长,其比例逐渐增加,第6天达高峰,环磷酸腺苷和垂体浸出液作用3天,S期、G2期+M期比例达15%.实验结果表明:人胎儿雪旺氏细胞在体外增殖缓慢,环磷酸腺苷和垂体浸出液能刺激雪旺氏细胞分裂;冷冻复苏后的雪旺氏细胞其生长特征以及对环磷酸腺苷和垂体浸出液的反应与新鲜细胞相同.
- 严恒林沈馨亚刘才栋陈丽琏汪洋王之美
- 关键词：胎儿雪旺氏细胞细胞动力学细胞培养
- 成纤维细胞转录BDNF基因后的条件培养液在体外培养中对神经突起生长的作用被引量：3
- 1999年
- 将带有 ＢＤＮＦ基因的成纤维细胞（ＮＩＨ／３Ｔ３）（由上海生化所提供）冻存－７０℃， ６个月后将此工程细胞复苏，放在３７℃、５％ＣＯ_２培养箱中培养扩增，观察形态学并同时收集其培养液，对新生ＳＤ大鼠的脊神经节、脊髓和大脑皮层中的神经元进行条件培养并设对照组。脊神经节植块培养２天后显示ＢＤＮＦ转基因成纤维细胞的条件培养液对促进神经元突起的生长具有良好的活性。对脊髓、大脑皮层中神经元分别进行分散原代培养，１５天后，其突起长度作图像分析（Ｌｅｉｃａ Ｑ５００ ＩＷ）并分别计算出它们的平均长度。脊髓实验组为 １９２． ２０±７５μｍ，对照组为１６０．３７±４８μｍ。大脑皮质实验组为３４７．１４±１０６μｍ，对照组为１２５．６７±４２μｍ。两组的ｔ检验分别是Ｐ＜０．０５。结果显示ＢＤＮＦ转基因成纤维细胞的条件培养液对体外培养神经元突起的生长具有一定的促生长作用。
- 汪洋沈馨亚
- 关键词：脑源性神经生长因子脊神经节BDNF
- 人胎儿雪旺氏细胞的体外培养及其纯化研究被引量：5
- 1994年
- 本实验用酶消化法从孕１４～１９周人胎儿周围神经中分离培养雪旺氏细胞，结合差速贴壁和阿糖胞苷处理进行纯化，根据Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征，分析不同时期雪旺氏细胞的纯化程度。实验结果显示：培养４ｄ，倒置相差显微镜下观察，雪旺氏细胞呈典型的双极或三极形，端对端或旋涡状排列，Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色呈阳性反应，其比例约占９８％；在２～３周内，雪旺氏细胞的纯度维持在８５％～９０％；培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占８０％；单纯采用阿糖胞苷或差速贴壁处理，培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占７０％；原代培养９２ｄ，传代１１代细胞生长良好。实验结果表明，多种方法联合使用较单一方法所得的纯度高。本方法快速、简便，能为雪旺氏细胞作为移植材料提供足够的来源。
- 严恒林沈馨亚刘才栋陈丽琏汪洋王自美
- 关键词：雪旺氏细胞细胞培养人胎儿提纯
