沈开元
- 作品数：21 被引量：37H指数：3
- 供职机构：柳州市人民医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- H3K4和H3K9三甲基化在猪体外成熟卵母细胞和克隆胚胎中的表达分析
- 2017年
- 该研究主要运用单细胞免疫荧光技术分析猪卵母细胞和克隆胚胎发育过程中,H3K4和H3K9三甲基化(H3K4me3,H3K9me3)的表达情况.收集体外成熟0h,6h,12h,24h,30h,36h,42h的猪卵母细胞;同时通过体细胞核移植操作获得一细胞、四细胞、桑葚胚和囊胚期克隆胚胎,经过免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察H3K4me3和H3K9me3修饰在卵母细胞和胚胎中的变化情况.免疫荧光结果显示,在不同减数分裂阶段的猪卵母细胞内均能观察到H3K4me3的表达,并且呈现出逐渐下降的趋势;在生发泡期(GV),生发泡晚期(L-GV)和生发泡破裂(GVBD)阶段的卵母细胞中能发现明显的H3K9me3表达,随着减数分裂的进行,H3K9me3表达消失,在第一次减数分裂中期前阶段(Pre-MI)到第二次减数分裂中期(MⅡ)阶段卵母细胞中未发现H3K9me3荧光信号.H3K4me3和H3K9me3在不同发育阶段的猪克隆胚胎中都有表达,其中H3K4me3在不同阶段胚胎中荧光信号强度相近,H3K9me3在四细胞胚胎中荧光强度降低,在桑葚胚和囊胚中荧光强度出现升高的趋势.以上结果说明,H3K4me3参与调控猪卵母细胞体外成熟的整个过程,H3K4me3和H3K9me3在猪体细胞核移植胚胎早期发育过程中可能具有调控作用.
- 沈开元代小丽杨婷佘春石德顺李湘萍
- 关键词：卵母细胞
- 卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据。方法选取SPF级4~6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体。利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异。结果(1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0μg/ml组(P<0.05),而MⅡ期卵母细胞百分比均显著低于0μg/ml组(P<0.05)。使用150μg/ml作为后续实验工作浓度;(3)qPCR的结果显示,小鼠COCs中卵丘扩展相关基因Has2的mRNA表达水平在体内成熟组及体外成熟培养组各组间的差异无统计学意义(P>0.05),exo+组和exo-组的Tnfaip6、Bcl2和Bax mRNA表达水平均显著低于control组(P<0.05或P<0.01),exo+组Ptgs2的mRNA表达水平显著低于control组(P<0.05);此外,exo+组Tnfaip6、Ptgs2和Bcl2的mRNA表达水平均显著低于exo-组(P<0.05或P<0.01)。结论DOR患者卵泡液外泌体能够抑制小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩展和减数分裂恢复,并且显著抑制了卵丘扩展相关基因Ptgs2和Tnfaip6以及细胞凋亡抑制基因Bcl2的表达。
- 沈开元杨冠群罗平代小丽黄萍梁媛媛李顺陈立群曲晓力
- 关键词：外泌体体外成熟
- 广西德保黑猪的体细胞克隆与鉴定
- 2016年
- 研究旨在于运用体细胞克隆技术生产广西德保黑猪,并运用微卫星技术进行克隆猪胎儿的亲缘鉴定。试验选择广西德保黑猪体细胞作为核移植供体,巴马小型猪作为核移植受体猪;并选择9个微卫星位点以作克隆猪的亲缘鉴定。结果显示受体猪在夏季移植时受孕但流产,而冬季移植时均无受孕;微卫星分析也显示流产胎猪与供核成纤维细胞的亲缘关系一致。结果表明德保黑猪的体细胞克隆是可行的。
- 覃倩沈开元刘明君王崇洲农素群李湘萍谢炳坤
- 关键词：体细胞克隆微卫星分析
- 小鼠胚胎DNA氧化损伤模型的建立被引量：2
- 2015年
- 为了研究胚胎DNA损伤修复机制,试验以H2O2为DNA损伤诱导剂,建立小鼠胚胎DNA氧化损伤模型,采用不同浓度H2O2培养小鼠受精卵,观察其对小鼠胚胎发育能力的影响;再通过免疫荧光方法检测γH2AX和ρATM蛋白的表达状况,以判断H2O2处理所导致的胚胎DNA损伤情况及较适宜的诱导条件。结果表明：1.5~2.4μmol/L H2O2处理对小鼠胚胎发育能力具有影响,与KOSM（-）对照组相比,H2O2处理组小鼠胚胎的分裂率、囊胚率呈下降趋势,其中1.8~2.4μmol/L H2O2处理组的胚胎分裂率、囊胚率呈显著下降趋势（P〈0.05）。免疫荧光法检测发现KOSM（-）对照组中,2-细胞期胚胎的γH2AX焦点数多于1-细胞期胚胎,ρATM在两个时期的胚胎中未检测到。γH2AX和ρATM在1.5,1.8μmol/L H2O2处理组的1-细胞期胚胎中均未检测到;2-细胞期胚胎表达γH2AX,未检测到ρATM。2.1,2.4μmol/L H2O2处理组的1-细胞和2-细胞期胚胎均有γH2AX和ρATM表达,其中2.4μmol/L H2O2处理组两个时期胚胎的γH2AX焦点数多于2.1μmol/L H2O2处理组。说明1.5~2.4μmol/L H2O2处理会影响小鼠胚胎体外发育能力,2.1,2.4μmol/L H2O2处理可诱导小鼠胚胎发生DNA双链断裂现象。
- 何金娜李胜沈开元王萍石德顺李湘萍
- 关键词：小鼠胚胎DNA氧化损伤H2O2
- 体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎培养液中HLA-G检测在预测胚胎发育潜能和临床结局中的应用价值研究被引量：3
- 2020年
- 目的探讨培养液中可溶性人类白细胞抗原G(HLA-G)表达水平在预测胚胎发育潜能、评估临床结局中的应用价值。方法选取2017年12月~2019年8月在柳州市人民医院生殖医学科接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的不孕不育夫妇共156对,收集其胚胎培养第三天(D3)或第五天(D5)的培养上清液,检测培养液中HLA-G浓度。根据移植临床结局分为临床妊娠组和未妊娠组,根据移植胚胎培养液HLA-G浓度按D3卵裂期胚胎≥2.5U/ml或D5囊胚≥6.8U/ml分为高浓度组和低浓度组分别进行比较,同时对D3胚胎继续培养形成囊胚情况及不同级别囊胚培养液HLA-G含量进行比较分析。结果临床妊娠组和未妊娠组间的平均年龄、不孕年限、抗苗勒管激素(AMH)、子宫内膜厚度、平均获卵数、受精率、优质胚胎率比较差异均无统计学意义(均P>0.05),HLA-G浓度分别为7.38±4.12 U/ml和2.46±1.69 U/ml,两组比较差异有统计学意义(t=3.628,P<0.01);形成优质囊胚、可用囊胚和不可用囊胚培养液中的HLA-G浓度分别为12.36±5.27,8.15±3.69和5.62±3.10 U/ml,三组比较差异有统计学意义(t=2.856,P<0.05);HLA-G高浓度组临床妊娠率和胚胎种植率分别为69.41%(59/85)和49.60%(62/125),均高于HLA-G低浓度组46.05%(35/76)和26.78%(30/112),差异有统计学意义(χ2=9.011,12.946,均P<0.01),两组之间的生化妊娠率和流产率比较差异无统计学意义(χ2=0.527,0.368,均P>0.05)。结论检测胚胎培养液中HLA-G水平可作为胚胎发育潜能的预测指标,联合形态学评分进行胚胎移植可获得较好的临床结局。
- 罗平沈开元卢娜罗江霞黄芬刘刚毅
- 关键词：体外受精-胚胎移植可溶性人类白细胞抗原G发育潜能
- 重组杆状病毒载体在基因治疗中的应用被引量：2
- 2020年
- 重组杆状病毒作为安全、可靠的基因治疗载体,在神经性疾病、心血管疾病以及恶性肿瘤的基因治疗中具有重要的应用价值。随着分子生物学技术日趋成熟,杆状病毒表达系统的研究使得该载体能够成功规避机体血液中补体系统的清除。另外,具有组织特异性的启动子也为实现各类重组病毒载体的靶向治疗发挥了重要的作用。该文对重组杆状病毒基因治疗载体的研究进行总结和阐述,以期对构建p53基因重组杆状病毒基因治疗载体提供文献依据,实现更安全、可靠、精准的基因治疗策略。
- 廖致红代小丽吴春凤刘志华李丽敏徐鹏沈开元
- 关键词：杆状病毒基因治疗
- SUV39H1/2基因表达抑制对转基因克隆猪胚胎早期发育潜能及外源基因表达水平的影响研究
- 李湘萍黄时海沈开元王萍代小
- 1.项目研究的背景及意义：组蛋白甲基化是组蛋白修饰方式之一，其对染色质的结构和功能具有很重要的作用。组蛋白赖氨酸9位残基(H3K9)的二、三甲基化(H3K9me2/3)主要是由花斑抑制因子同源物1和2(SUV39H1、S...
- 关键词：
- 关键词：胚胎发育基因表达
- 卵巢功能减退患者卵泡液外泌体miRNA表达谱分析研究被引量：11
- 2021年
- 目的利用高通量测序技术筛选卵巢储备功能减退(DOR)与卵巢功能正常卵泡液外泌体中差异表达的miRNAs,探讨其对DOR的发病影响。方法收集DOR患者和卵巢功能正常者(对照组)的卵泡液各15例,各组每5例卵泡液混合为均一样本提取外泌体,共进行3次生物学重复。使用Illumina HiSeq4000测序平台对DOR组和对照组卵泡液外泌体中的miRNAs进行测序分析,使用miRanda和TargetScanS软件、GO以及KEGG数据库对差异显著的miRNAs进行靶基因预测、生物学功能富集以及信号通路预测。结果与对照组相比,DOR卵泡液外泌体有80个显著差异表达的miRNAs,其中31个表达上调(包括hsa-miR-4792、hsa-let-7c-3p和hsa-miR-184等),49个表达下调(包括hsa-miR-136-3p、hsa-miR-296-3p和hsa-miR-337-5p等)(P<0.05);通过miRanda和TargetScanS的算法预测所有差异表达miRNA的靶基因共17159个,经GO和KEGG分析发现,这些靶基因主要富集的生物学功能有电离型谷氨酸受体信号通路、氨基酸转运调节、脂多糖介导信号通路及发育相关的凋亡过程等,主要参与调节的信号通路有趋化因子信号通路、环磷酸腺苷信号通路、肿瘤坏死因子信号通路及丝裂原活化蛋白激酶信号通路等。结论来源于DOR和卵巢功能正常者的卵泡液外泌体的miRNAs表达谱存在显著差异,差异表达的miRNAs可能在DOR的发生中起到重要的调控作用,这些miRNAs可能经过靶基因参与调节多种生物学功能以及信号通路进而影响DOR的病理生理过程。
- 沈开元黄芬罗江霞韦静陈春艳罗平黄彦妮
- 关键词：卵泡液外泌体高通量测序
- 卵巢功能减退患者卵泡液外泌体差异表达miRNA筛选及生物学功能分析
- 2023年
- 目的 筛选卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者卵泡液外泌体差异表达微小核糖核酸(micro RNA,mi RNA),探索其与DOR相关的潜在分子机制。方法 收集2021年12月~2022年3月于柳州市人民医院生殖医学科辅助生殖助孕18例患者的卵泡液为研究样本,根据卵巢功能评估结果分为卵巢功能正常(Normal)组和卵巢功能减退(DOR)组。miRNA PCR阵列芯片法检测两组卵泡液外泌体miRNA的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证芯片结果,最后通过生物信息学分析差异表达miRNA的靶基因及其富集的相关生物学功能和分子通路。结果 DOR组筛选出5条差异表达miRNA:let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达下调,miR-483-3p表达上调;qRT-PCR验证结果显示与Normal组比较,DOR组let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达降低,miR-483-3p的表达升高,差异具有统计学意义(t=3.147,4.405,3.95,3.147,-3.198,均P<0.05);差异表达miRNA的靶基因主要富集于p53信号通路和FoxO信号通路,靶基因CDKN1A, RRM2, CCND1, SESN3, MDM4, BCL2L11,SMAD4, IGF1及IGF1R参与p53信号通路和FoxO信号通路,靶基因METTL3,METTL6及METTL8参与RNA m6A甲基化。结论 DOR患者卵泡液外泌体中的差异表达miRNA参与p53和FoxO信号通路及RNA m6A甲基化的调控,是DOR发生机制和诊疗的潜在标靶。
- 沈开元曲晓力代小丽代小丽邹乾兴梁媛媛罗平
- 关键词：卵巢功能减退微小核糖核酸
- 不同能量底物对猪卵母细胞成熟效果的影响
- 本研究目的是探讨不同能量底物组合及不同成熟基础液对猪卵母细胞成熟及后期胚胎发育的影响。研究证明葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酞胺都可作为卵母细胞的能量底物，但低能量底物情况下会造成卵母细胞的早期凋亡，这与卵母细胞抗ROS作用减弱...
- 刘帅崔奎青沈开元刘庆友石德顺
- 关键词：猪卵母细胞胚胎发育培养基细胞凋亡胚胎移植
