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下调CD59的表达可以抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡被引量：5: 2014年; 目的采用RNA干扰与噬菌体肽库展示技术2种方法干预宫颈癌HeLa细胞CD59的表达,以探讨比较2种CD59低表达方式对HeLa细胞增殖与凋亡的影响。方法将10μg/mL的CD59短肽封条作用于HeLa细胞8 h后,联合CD59干扰质粒pSUPER-siCD59稳定转染HeLa细胞系,采用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用TUNEL染色、annexin V-PE/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 CD59短肽封条组与pSUPER-siCD59质粒稳定转染细胞组HeLa细胞增殖明显弱于对照组,TUNEL及流式细胞术检测结果显示2组处理细胞均存在细胞凋亡现象,且短肽封条的效果要好于pSUPER-siCD59质粒。结论下调CD59表达能抑制其细胞增殖并促进其凋亡,且短肽封条效果要优于CD59 RNA干扰质粒。; 高美华李营张蓓王冰梁洁李园园; 关键词：CD59 RNA干扰 HELA细胞增殖凋亡

大鼠Ⅱ型糖尿病血管增殖症与CD59基因突变的相关性研究: 目的:建立糖尿病动物模型,研究CD59基因点突变与大鼠Ⅱ型糖尿病的相关性。方法:将Wistar大鼠随机分成三组,即正常组,双高饮食组和模型组。采用链尿佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,并设计MRCD59寡核苷酸探针(MRC...; 高美华王秋波王冰赵鹏任书荣张艳丽; 关键词：CD59 基因突变糖尿病血管硬化寡核苷酸探针; 文献传递

角膜碱烧伤大鼠模型中CD44及其配体透明质酸的表达: 目的研究CD44及其配体透明质酸在角膜碱烧伤大鼠模型中表达的变化，揭示其在角膜碱烧伤修复过程中的作用。方法制作角膜碱烧伤大鼠模型，以免疫组化的方法观察CD44及其配体透明质酸在角膜碱烧伤后12h，24h，3d，7d，...; 王冰; 关键词：CD44 透明质酸角膜碱烧伤; 文献传递

锚定蛋白CD59与接头分子Cbp在T细胞上的定位及功能研究被引量：6: 2013年; 目的研究CD59、Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)在细胞膜的定位,及其在细胞活化及增殖中的相互作用。方法应用免疫荧光细胞化学技术,通过荧光显微镜分析系统对CD59、Cbp的定位进行了分析;Jurkat细胞转染pSUPER-siCD59重组质粒,并行RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中CD59的表达及蛋白酪氨酸激酶癌基因家族(fyn)磷酸化水平。利用MTT比色法检测转染各组细胞的增殖效应。结果 CD59、Cbp主要分布在细胞膜上。转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞中CD59表达量减少,磷酸化的fyn含量也随之减少,细胞增殖能力也低于其他各组。结论 CD59是一种膜蛋白,在细胞活化及增殖中与Cbp分子共同发挥作用。; 高美华姬静王冰张蓓张树超秦云; 关键词：CD59 CBP JURKAT细胞

过表达C-Src激酶结合蛋白诱导Jurkat淋巴细胞表型改变和凋亡被引量：1: 2015年; 目的研究上调C-Src激酶结合蛋白(CBP)表达对Jurkat细胞超微结构及相关生物学功能的影响。方法构建CBP-EGFP融合蛋白过表达病毒载体,转染建立稳定的高表达CBP-EGFP融合蛋白的Jurkat细胞株。光学显微镜下观察细胞的基础生长状态,共聚焦显微镜观察病毒转染效率及CBP蛋白在细胞上的定位,电镜观察细胞内细胞器的复杂程度。流式细胞术检测细胞的基本参数及凋亡情况,实时定量PCR(qRT-PCR)检测CBP基因及信号转导通路中C-Src激酶(CSK)、原癌基因蛋白Vav(Vav oncoprotein)mRNA水平。结果光镜下发现转染CBP-EGFP病毒的Jurkat细胞皱缩细胞增多,大小均一性较差。共聚焦显微镜显示细胞转染效率达到100%,同时发现CBP定位于细胞膜上。电镜可见CBP组细胞内细胞器较Jurkat细胞复杂,有线粒体,并出现大量的溶酶体样结构。与阴性组相比,转染了CBP-EGFP病毒后,死亡细胞的数量大大增加,而qRT-PCR结果显示CBP组CSK表达上调,Vav则表达下调。结论在Jurkat细胞中,CBP蛋白高表达可以使细胞的均一性下降,凋亡细胞增多。; 高美华丛蓓蓓王冰王丽娜邵志伟; 关键词：细胞器

T细胞活化接头蛋白棕榈酰化位点突变抑制CD59 GPI介导的T淋巴细胞活化信号转导: 2015年; 目的构建T细胞活化接头蛋白(LAT)棕榈酰化位点突变的慢病毒,感染Jurkat细胞,建立稳定转染的细胞株,观察LAT棕榈酰化位点突变对CD59介导的T淋巴细胞活化信号转导的影响。方法构建阴性对照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因载体,包装成慢病毒,分别感染Jurkat细胞,建立稳定感染的细胞株。激光共聚焦显微镜观察病毒感染效率及融合蛋白在细胞上的定位;CCK-8法检测CD59单克隆抗体交联前后各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)蛋白的表达。结果共聚焦显微镜观察发现LAT-M组细胞的LAT分子在细胞膜上散在分布,CD59抗体交联刺激后,未出现明显的点簇状聚集区。与阴性对照细胞相比,LAT-M细胞增殖活性明显降低,中晚期凋亡细胞明显增加;Western blot结果显示,LAT-M组的PLC-γ1、LCK蛋白表达水平和阴性对照组大致相同,经抗体活化后无明显变化,而阴性对照细胞的PLC-γ1、LCK蛋白表达量下降。结论 LAT棕榈酰化位点突变的Jurkat细胞脂筏定位功能缺失,细胞处于抑制状态,对CD59糖基磷脂酰肌醇(GPI)介导的T淋巴细胞活化信号转导有抑制作用。; 高美华王丽娜王冰丛蓓蓓张树超; 关键词：CD59 信号转导

过表达Src羧基末端激酶结合蛋白的Jurkat细胞荷瘤小鼠模型的建立与鉴定: 2015年; 目的建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型。方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只。小鼠腋窝皮下注射Jurkat细胞1×107个/0.1 m L。建模成功后取出完整瘤体组织称质量、HE染色观察小鼠皮下肿块的病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血Jurkat细胞增殖水平;ELISA检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)水平。结果病毒转染过表达CBP模型组小鼠瘤体组织块体积和质量小于对照组,HE染色瘤体内有Jurkat细胞增殖,外周血Jurkat细胞增殖水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组,血清中IL-2水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组。结论成功建立了过表达CBP的Jurkat白血病细胞小鼠荷瘤模型,CBP可抑制Jurkat细胞IL-2分泌和增殖。; 高美华马宇王冰张蓓张敏锐张树超; 关键词：JURKAT细胞

CD46 RNAi对CD59介导的T细胞信号转导的作用研究被引量：8: 2012年; 目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,转化大肠杆菌JM109并转染Jurkat细胞。将Jurkat细胞分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染CD46干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞中的CD59、CD46基因的表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD46与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确,构建成功,稳定转染后,Ⅳ组细胞CD46分子的表达被成功抑制,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD46与CD59单抗联合作用后,增殖能力明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅲ组和Ⅳ组之间无差异。结论 CD59可增强CD46对T细胞信号转导的效应。; 高美华王美娟张蓓解西河王冰; 关键词：CD59 CD46 信号转导

跨膜接头蛋白CBP对皮肤鳞癌细胞A431生长增殖的负调控作用研究被引量：2: 2017年; 背景与目的:跨膜接头蛋白(Csk-binding protein,CBP)是新发现的Src家族成员,与多种肿瘤的发生有关。该研究旨在观察CBP基因过表达对皮肤鳞癌细胞系A431增殖及细胞凋亡的影响,探讨其相关的分子机制。方法:构建CBP-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合蛋白的慢病毒过表达载体,采用反转录病毒转染的方法建立CBP过表达的A431细胞株。实验分为亲本细胞组(未进行基因转染的A431细胞)、对照组(A431细胞转染仅含EGFP阴性对照病毒)和实验组(A431细胞转染CBP-EGFP病毒)。在激光共聚焦显微镜下观察细胞转染率,验证转染成功与否;CCK-8法检测CBP过表达对A431细胞增殖能力的影响,并采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测对细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Lck、Csk和Fyn三种上游信号转导分子分别在m RNA和蛋白中的表达水平变化。结果:建立了稳定过表达CBP的A431细胞株;CCK-8法结果提示,CBP过表达明显抑制细胞生长,第2~6天的组间差异有统计学意义(P<0.05);FCM检测显示,实验组细胞凋亡率显著增加,与亲本细胞组及对照组相比差异有统计学意义(P<0.001);RTFQ-PCR结果显示,实验组A431细胞Lck m RNA的相对表达水平显著下调(P<0.001),实验组细胞Csk和Fyn m RNA的表达分别约为亲本细胞组的1.6倍和3.8倍,表达显著上调(P<0.001);Western blot结果表明,实验组Lck蛋白的相对表达水平明显下降(P<0.001),实验组细胞Csk和Fyn蛋白与亲本细胞组和对照组相比表达明显增加(P<0.001)。结论:CBP过表达可抑制皮肤鳞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡及坏死。CBP通过调节上游信号转导通路中的蛋白酪氨酸激酶Lck、Csk和Fyn来调控细胞的增殖活性。; 李美佳张维娜渠开攀王冰; 关键词：皮肤鳞癌细胞增殖

高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响(英文): 2015年; 背景:衔接蛋白分子的联动和协同有效调控T细胞的信号转导,形成级联放大或限制,最终实现T细胞复杂的免疫功能。蛋白分子Src羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。目的:探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。方法:构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。结果与结论:细胞转染效率大于95%,Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的Jurkat细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中Src羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示Jurkat细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。; 丛蓓蓓高美华王冰邵志伟王丽娜张文; 关键词：SRC SRC 酪氨酸蛋白激酶

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王冰

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