王捷
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
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- 海芋凝集素cDNA的分子克隆及其性质预测(英文)被引量：8
- 2006年
- 用cDNA末端快速扩增-聚合酶链式反应(RACE-PCR)方法克隆了海芋(Alocasiamacrorrhiza)凝集素的全长cDNA(GenBank检索号DQ340864),并用多种生物信息学工具对其性质进行了预测。根据来源于天南星科其他植物的凝集素和类似蛋白的保守区的DNA序列,设计了几个海芋凝集素基因aml特异引物(GSP)。用RNeasy试剂盒从海芋块茎中提取出总RNA,并以此为模板,用SMARTTMRACEcDNA扩增试剂盒提供的经特殊设计的通用引物以及不同的基因特异引物,分别获得海芋凝集素5'-和3'-RACE-PCR扩增片段。这些PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶纯化后,分别与T克隆载体pMD18-T相连,筛选获得阳性克隆并提取质粒,经双酶切和特异引物的PCR验证无误后,进行序列分析。从5'-和3'-RACE-PCR测序结果拼接出全长海芋凝集素cDNA序列,并用新设计自5'-RACE-PCR5'末端的引物GSP7进行全长3'-RACE-PCR反应,获得全长海芋凝集素cDNA克隆并再次测序验证。这一新克隆的海芋凝集素cDNA的长度为1124核苷酸,分析表明它是一个编码270个氨基酸残基的蛋白质,其等电点为pH5.7,相对分子量为29.7kD。同源性分析结果表明,海芋凝集素与其他来源于天南星科的甘露糖凝集素以及相似蛋白具有高度同源性。在海芋凝集素序列中发现了2个B型凝集素功能区域和3个甘露糖的结合位点。综合上述信息,认为这一新克隆的海芋凝集素cDNA是一个编码甘露糖识别凝集素的基因序列。
- 朱亚然王捷黄炳球侯学文
- 关键词：海芋凝集分子克隆
- 海芋凝集素蛋白基因及其应用
- 本发明提供了一个来源于海芋的凝集素蛋白的核苷酸(cDNA)序列及其编码的氨基酸(AA)多肽序列。该基因属于甘露糖结合凝集素基因家族的成员，为一个组成型表述的基因。本发明还涉及用该基因转化棉花或其它植物，将该基因序列运用到...
- 侯学文朱亚然王捷潘科
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