王文伯
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：四川省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自然科学总论更多>>
- 牦牛病毒性腹泻病毒P20和P14蛋白基因的原核表达及其产物检测被引量：3
- 2009年
- 以牦牛BVDV基因组DNA为模板,运用聚合酶链反应首次成功扩增出牦牛BVDVP20及P14基因,并将其插入到pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒pET-28a-P20和pET-28a-P14并分别转化至Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测,pET-28a-P20在宿主菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)中表达出约26KU的融合蛋白,pET-28a-P14表达出约20KU的融合蛋白,结果分析表明p20和p14蛋白在两个宿主中都获得了高效表达,表达出的蛋白大小与预期结果相符.
- 冯英阳刘亚刚于吉锋胡炳峰王文伯王盼盼
- 关键词：牦牛牛病毒性腹泻病毒原核表达
- 牦牛病毒性腹泻病病毒E2基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2010年
- 根据GenBank中已发表的多株牛病毒性腹泻病毒的E2基因序列比较分析设计了3对引物,应用RT-PCR方法首次扩增出牦牛病毒性腹泻病毒的E2基因区637 bp的片段序列,经pMD18-T载体连接后克隆、测序,并与已发表的NADL、Osloss、Oregon C24V等毒株E2基因序列进行系统发育进化树比对分析,结果表明,牦牛病毒性腹泻病毒的E2基因无插入或缺失,系统发育进化分析表明,与其他毒株核苷酸同源性较低,最高仅为68.8%,推导氨基酸序列为68.4%。较低的同源性表明牦牛病毒性腹泻病毒存在较大的基因突变或者可能还具有独立的衍化来源。
- 胡炳峰刘亚刚王文伯杨晓农于吉峰冯英阳王盼盼
- 关键词：E2基因克隆
- 牦牛病毒性腹泻病毒E1基因的原核表达
- 2010年
- 以牦牛BVDV基因组DNA为模板,运用聚合酶链反应成功扩增出牦牛BVDV E1基因,将其插入到pET-28a及pET-32a原核表达载体,构建重组表达质粒pET-28a-E1和pET-32a-E1并分别转化至Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测,pET-28a-E1和pET-32a-E1在宿主菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)中均表达出约40KU的融合蛋白,结果分析表明E1基因在两个宿主中都获得了高效表达,表达出的蛋白大小与预期结果相符.
- 王盼盼刘亚刚孙凯王文伯胡炳峰于吉锋冯英阳
- 关键词：牦牛牛病毒性腹泻病毒E1基因原核表达
- 牦牛病毒性腹泻病毒E2基因的克隆鉴定及原核表达被引量：1
- 2011年
- 运用聚合酶链式反应,以牦牛BVDV基因组DNA为模板扩增出牦牛BVDVE2基因。为研究E2蛋白的抗原性,将E2基因插入到pET-32a原核表达载体,构建重组表达质粒pET-32a-E2,并转化至BL21(DE3)宿主菌中,利用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,pET-32a-E2在宿主菌BL21(DE3)中表达出约58kD的融合蛋白,结果表明E2基因在BL21(DE3)宿主菌获得了高效表达,表达蛋白大小与预期相符。Western-blotting结果显示E2蛋白具有良好抗原性。这对以后研究E2蛋白功能等具有十分重要的意义。
- 孙凯刘亚刚王妍王盼盼胡炳峰王文伯
- 关键词：牦牛E2基因牛病毒性腹泻病毒原核表达
- 牦牛牛病毒性腹泻病毒P20和P14基因的克隆及序列分析
- 2009年
- 参考GenBank中多个BVDV毒株基因组序列,利用生物软件primer5.0设计两对引物,扩增出BVDV牦牛株P20基因和P14基因.结果表明,克隆得到的P20基因序列为504bp,与GenBank上发表的BVDV P20大小一致,P14基因序列为312 bp,与GenBank上发表的BVDV毒株比较有6个插入碱基.核苷酸序列的同源性及系统发生分析的结果表明,牦牛(Yak)株属于BVDV-1.
- 冯英阳刘亚刚于吉锋常文棣胡炳峰王文伯
- 关键词：牦牛牛病毒性腹泻病毒BVDVGENBANK系统发生分析GENOTYPE
- 牛病毒性腹泻病毒牦牛株E0基因生物信息学分析及原核表达与抗原性检测被引量：5
- 2009年
- 为研究牦牛BVDVE0蛋白的生物信息学及抗原性,本研究对本实验室克隆并测序的牦牛病毒性腹泻病毒E0基因进行了生物信息学分析;同时用含有酶切位点、起始密码子、终止密码子的引物重新扩增E0基因,并连接PMD18-T载体,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,将获得的E0片段克隆至PET-28A原核表达载体,构建重组质粒并转入JM109.酶切、质粒PCR鉴定正确后转入rosetta(DE3)菌进行诱导表达.经SDS-PAGE检测结果显示目的基因获得了较高的表达,表达的融合蛋白约33ku,经western-blotting检测表明目的蛋白具良好的有抗原性.
- 于吉锋刘亚刚杨小艳于晓东冯英阳王文伯胡炳峰刘晓钢骆勇刘斌
- 关键词：牦牛牛病毒性腹泻病毒E0基因生物信息学分析
- 牦牛病毒性黏膜病病毒结构蛋白核苷酸的序列测定与分析
- 2012年
- 对首次从牦牛体内分离出的BVDV进行结构蛋白的研究与分析具有重要的理论价值和学术意义,本研究参考GenBank中发表的BVDV毒株的基因组序列设计四对对引物,利用PCR扩增出预期的2700bp目的片段.扩增产物克隆至pMD19-T Vector,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序.测序结果经DNNMAN同源性比较分析,克隆得到的结构蛋白基因与NADL株同源性最高,但核苷酸同源性仅为70.1%,推导氨基酸同源性仅为74.4%,证明牦牛株BVDV结构蛋白基因存在较大的变异.生物信息学分析表明结构序列中有片段高度疏水,蛋白基因推导氨基酸序列亲水性与抗原性成平行相关,亲水性和抗原性与标准毒株很相似.
- 刘亚刚孙凯王妍王盼盼王荣胡炳峰王文伯
- 关键词：克隆测序生物信息学分析
- 牦牛病毒性腹泻病毒E1基因的克隆及生物信息学分析被引量：3
- 2010年
- 参考GenBank中发表的BVDV毒株的基因组序列设计2对引物,利用套式RT-PCR方法首次成功克隆牦牛体内分离鉴定出的牛病毒性腹泻病毒E1基因,并扩增出预期的585 bp目的片段。将扩增产物克隆至pMD18-T Vector,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定获得阳性重组质粒并进行测序。测序结果经BLAST同源性比较分析,克隆得到的E1基因与Osloss株同源性最高,但核苷酸同源性仅为73.3%,推导氨基酸同源性仅为82.6%,表明牦牛病毒性腹泻病毒存在较大的基因突变。这可能是该病毒为适应牦牛这种特有生物体和牦牛所生活的高原生态环境的结果,或该病毒也可能具有独立的遗传衍化来源。
- 王文伯刘亚刚胡炳峰杨晓农于吉锋冯英阳王盼盼
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒牦牛E1基因克隆生物信息学分析
- 牦牛病毒性腹泻病毒5′-UTR和E0基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 于吉锋刘亚刚杨小艳常文棣冯英阳胡炳峰王文伯
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒猪瘟病毒蛋白质结构
- 牦牛病毒性黏膜病病毒P125基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 试验参考GenBank中发表的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)毒株基因组序列设计了5对引物,利用PCR扩增出预期的3475 bp目的片段;将扩增产物连接至pMD19-T载体,经质粒PCR鉴定及双酶切鉴定获得阳性重组质粒并进行核苷酸序列测定。经BLAST同源性分析表明,牦牛BVDV P125基因与BVDV-Ⅰ型的NADL毒株P125基因的同源性为63.4%。系统分析结果表明,牦牛P125基因与BVDV标准毒株P125基因在遗传进化与亲缘关系上均较远,这可能是因为环境诱变的结果或该毒株具有新的遗传衍化来源。
- 刘亚刚孙凯王研王盼盼胡炳峰王文伯
- 关键词：牦牛牛病毒性腹泻病毒克隆测序生物信息学分析
