王智
- 作品数：40 被引量：80H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡
- 2004年
- 目的 观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法 用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的 5’端连接绿脓杆菌外毒素 (PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后 ,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞 ,经G4 18和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达 ,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果 建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达 ,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态 ,细胞生长受到抑制。电镜和TUNEL分析表明 ,颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达使部分细胞呈现凋亡的典型特征。
- 王智赵晶张莉温伟红王成济杨安钢
- 关键词：颗粒酶B融合蛋白HELA细胞凋亡
- 截短型人Bid融合蛋白对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：12
- 2003年
- 目的 :观察截短型人bid及其N端融合蛋白的表达对HeLa细胞的促凋亡作用 .方法 :通过反转录PCR方法获取人全长bid基因 ,再经PCR方法克隆得到截短型bid(trun catedbid ,tbid)基因及其N端融合蛋白基因插入pcDNA3真核表达载体 ,脂质体法转染HeLa细胞 ,通过间接免疫荧光 ,电子显微镜以及流式细胞仪等方法观察被转染细胞的生长及凋亡状况 .结果 :成功获得人bid基因 ,构建了tbid基因及tbid与绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因的真核表达载体 (pcDNA3 tbid6 1 ,pcDNA3 PE tbid6 1 ) .与对照组相比 ,在转染后 1 2～ 4 8h内两种基因的表达均导致HeLa细胞发生凋亡 ,且两者活性相当 .结论
- 裘秀春于翠娟许彦鸣贾林涛曹云新王智王成济范清宇杨安钢
- 关键词：细胞凋亡HELA细胞促凋亡作用基因表达
- 抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析被引量：6
- 2001年
- 目的 扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法 从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 pGEX 4T 1中进行表达 ,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果 VH 单域抗体基因全长 363bp ,含起始码和终止码。将其克隆到 pGEX 4T 1内 ,转化大肠杆菌DH5α ,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗γ SmVH 单域抗体。竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示 ,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论 构建成功抗γ Sm的VH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。
- 袁建林王智武国军王禾王栋郝晓柯
- 关键词：单域抗体克隆前列腺癌
- 饥饿和高脂餐对小鼠运动病的影响被引量：3
- 1992年
- 作者观察了饥饿和高脂食物对诱发小鼠运动病的影响.雄性小鼠56只被分为7组.其中实验组分别在进食日常食物、饥饿状态或进食高脂肪食物后接受双向加速度运动刺激,以其饮用0.15％糖精溶液的量作指标,观测各组条件反射性味觉厌恶的反应程度.结果表明,进食正常食物小鼠30min饮量平均为0.71ml,饥饿和高脂食物组该饮量明显减少,仅为0.26ml.说明饥饿或高脂食物均可加剧小鼠的运动病反应.
- 王智刘立姜斌
- 关键词：饥饿运动病甘油三脂
- 四聚功能域提高前列腺特异抗体亲和力的作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨人p53四聚功能域在提高抗前列腺特异抗原(PSA)／抗人CD3双特异性单链抗体(scFv)亲和力方面的作用。方法利用递归聚合酶链反应(PCR)法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19／IgG3／p53克隆载体。将抗 PSA／CD3双特异性scFv克隆入pUC19／IgG3／p53载体中,构建多价抗PSA/CD3双特异性scFv融合基因。将融合基因克隆入真核表达载体pSeeTag2-B中,转染HeLa细胞进行表达,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果获得了多价抗PSA/CD3双特异性scFv融合基因,基因全长1638 bp,可编码546个氨基酸,与已发表的抗PSA／CD3双特异性scFv和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致。表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约67×103的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC-3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),亲和力高于双特异性scFv。结论人IgG3上游铰链区／p53四聚功能域基因与抗PSA／CD3双特异性 scFv基因融合后表达产物的功能性亲和力大大提高,为提高抗体的功能性亲和力开辟了新的思路。
- 武国军王栋王禾袁建林于磊张更郝晓柯白玉杰王智
- 关键词：前列腺肿瘤基因克隆
- 缺血样条件和血清对培养神经细胞存活的影响
- 1996年
- 目的：观察缺血样条件和血清对培养神经细胞存活的影响．方法：将培养１２ｄ的新生大鼠皮层神经细胞分为６组：①单纯缺血样条件组：神经细胞暴露于９４％Ｎ２／６％ＣＯ２混合气和无糖平衡盐液的环境１ｈ；②正常血清组：神经细胞暴露于正常大鼠血清１ｈ；③去补体血清组：神经细胞暴露于用蛇毒因子去除补体（Ｃ３，Ｃ５）的大鼠血清１ｈ；④缺血样条件加正常血清组；⑤缺血样条件加去补体血清组；⑥对照组：仅更换培养液．２４ｈ后按下式计数神经细胞存活率：神经细胞存活率＝实验后２４ｈ选定视野内的正常神经细胞数实验前选定视野内的正常神经细胞数×１００％．结果：单纯缺血样条件组［（５６．６９±５．２７）％］和正常血清组［（７２．５０±８．０４）％］的神经细胞存活率均比对照组［（８９．８３±２．１６）％］明显减少（Ｐ＜０．０１）．缺血样条件和正常血清复合作用下神经细胞的存活率［（３５．０８±６．４６）％］进一步降低（Ｐ＜０．０１），去补体血清既不影响神经细胞的存活率［（８９．７０±４．１２）％，Ｐ＞０．０５］也不加重缺血样条件对神经细胞的损伤作用［（５５．０９±３．８２）％，Ｐ＞０．０５］．结论：缺血样条件和正常血清可对神经细胞造成损伤。
- 刘立王智洪咏菊
- 关键词：脑缺血神经细胞血清
- 人早幼粒白血病细胞及HL-60细胞在维甲酸诱导分化中细胞周期的改变
- 2000年
- 梁英民蒋珊珊吴绒丽王智
- 关键词：早幼粒白血病HL-60细胞细胞分化维甲酸
- 抗人CD3单链抗体四聚体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定
- 2003年
- 目的 将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法 将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果 表达产物经SDS PAGE和Westernblot证实 ,为Mr约35 0 0 0的特异蛋白条带。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMCs) ,亲和力高于scFv。结论 获得了可与PBMCs特异性结合的抗人CD3scFv四聚体 。
- 武国军王禾王栋于磊王智袁建林张波药立波
- 关键词：SCFV基因HELA细胞T细胞抗原受体
- 影响DNA测序的因素及解决方法
- 2000年
- 冯蕾王智等
- 关键词：DNA测序影响因素
- 人截短型凋亡诱导因子的表达对HeLa细胞的促凋亡作用被引量：5
- 2003年
- 目的:观察人截短型AIF基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用。方法:用RT-PCR法分段克隆全长人AIF基因。经改造截去其N-端线粒体定位信号及部分Spacer区域(1～120位氨基酸)的编码序列,从而获得人截短型AIF(AIF△1-120)基因。将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、 免疫组织化学检测、间接免疫荧光检测、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达,以及对转染细胞的形态及生长状况的影响。结果:成功地构建了人截短型AIF(AIF△1-120)基因的真核表达载体。转染HeLa细胞后,可检测到人截短型AIF分子的表达。随着转染后时间的延长,可观察到表达人截短型AIF分子的HeLa细胞呈现典型的凋亡特征。结论:人截短型AIF基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡。
- 于翠娟孟艳玲赵晶王智王成济杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子HELA细胞基因表达细胞凋亡
