田丽娜
- 作品数：10 被引量：38H指数：4
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划中俄国际合作项目更多>>
- 相关领域：农业科学自动化与计算机技术生物学更多>>
- 利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型被引量：6
- 2008年
- 【目的】研制可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。【方法】分别克隆了禽流感病毒的M基因,H5、H7、H9亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因以及看家基因GAPDH的重组质粒。以重组质粒为模板,用PCR方法扩增制备探针,纯化后点于氨基修饰的片基上,制备基因芯片。在PCR过程中对待检样品进行标记,然后与芯片杂交,洗涤,扫描并进行结果分析。【结果】结果显示检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。同时用RT-PCR、鸡胚接种和基因芯片方法对H1-H15亚型AIV参考毒株、30份人工感染样品、21份现地疑似样品进行检测,结果发现,对人工感染样品芯片检测方法与鸡胚接种和RT-PCR的符合率分别为100%和96%,现地样品符合率为100%。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别部分主要流行的禽流感亚型,是一种有效的新方法。
- 杨忠苹王秀荣田丽娜王煜陈化兰
- 关键词：基因芯片禽流感
- 禽流感病毒等RNA病毒鉴别基因芯片的制备被引量：6
- 2008年
- 将克隆和鉴定的AIV的HA、NA、M、NS、NP基因以及NDV、IBDV、IBV的保守基因片段作为探针，同时以克隆的GAPDH基因作为阳性对照，利用芯片点样系统spotArray TM24将探针与阳性对照、阴性对照和空白对照按照设计好的阵列点在基片上，制备了AIV等RNA病毒诊断芯片，并从点样条件和杂交条件两个方面进行了优化。结果显示，探针浓度在300～1200μg／mL时点样，Cy3-dUTP终浓度为0．05μmol／mL，杂交温度在42℃，杂交时间在8～12h时，杂交信号比较理想。该方法对20份已鉴定的H5N1亚型禽流感病毒的检出率为100％（20／20）；10份现地送检的疑似AIV样品的检出率为70％（7／10），检测结果与RT—PCR和鸡胚传代分离鉴定的符合率为100％。结果表明，制备的DNA芯片可有效诊断上述病毒。
- 田丽娜王秀荣杨忠苹石霖陶启蒙包红梅李雁冰陈化兰
- 关键词：禽流感病毒基因芯片
- 区分禽流感病毒亚型诊断基因芯片的构建被引量：7
- 2008年
- 制备了可同时区分AIVH5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。试验以重组质粒为模板,进行PCR扩增,然后用异丙醇沉淀法进行纯化,制备探针及内参基因。将探针及内参基因用点样缓冲液稀释到0.3μg/μL后用芯片点样仪将其点制到醛基化基片上,样点中心间距450μm,样点直径220μm。将点好的基片在室温干燥24h以上,后经65℃再水合10s、80℃干燥、65mj紫外线交联照射25min后,再用封闭液封闭,95℃变性处理,成功构建了能区分禽流感血凝素H5,H7,H9亚型及神经氨酸酶N1,N2亚型的检测基因芯片。在PCR扩增中标记待检样品,对制备的检测芯片进行质量检验,结果表明,制备的区分禽流感病毒亚型基因芯片可区分AIV部分亚型。
- 杨忠苹王秀荣石霖田丽娜王煜陶启蒙陈化兰
- 关键词：禽流感基因芯片
- 禽流感基因诊断技术研究进展被引量：2
- 2008年
- 禽流感是由流感病毒引起的一种人和动物的高度传染性疾病,不但造成养禽业的巨大经济损失,还对人类公共卫生安全存在威胁。因此,快速、准确的基因诊断技术对于禽流感的防控显得非常重要。近年来,主要有RT-PCR技术、荧光定量RT-PCR技术、核酸依赖扩增技术(NASBA)以及基因芯片等基因诊断技术。文章就这些方法的基本原理、检测优点以及应用现状进行综述,以期为有效控制禽流感的发生与流行提供有力技术支撑。
- 田丽娜王秀荣杨忠苹石霖陶启蒙陈化兰
- 关键词：禽流感反转录-聚合酶链反应基因芯片
- H5和H9亚型禽流感病毒诊断芯片的初步研究
- 本实验利用基因芯片技术在禽流感病毒亚型鉴定上做了初步的研究，希望构建一种在基因水平提供一次样品就可以鉴别流感病毒亚型平台。研究的内容主要包括：
1.探针的制备：禽流感病毒的H1～H15(无H12)亚型HA基因、...
- 田丽娜
- 关键词：H5亚型禽流感H9亚型禽流感基因芯片
- 文献传递
- 抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的影响研究被引量：13
- 2020年
- 为研究抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的调节作用,本研究将216只海兰褐壳蛋鸡随机分为对照组(饲喂基础饲粮,C组)、低剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+100 mg/kg Sublancin,L组)、中剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg Sublancin,M组)和高剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+300 mg/kg Sublancin,H组)进行抗菌肽调控蛋鸡免疫的实验。实验持续30 d,分别在饲喂Sublancin后第1 d、15 d和30 d用ELISA试剂盒检测每组鸡血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量;检测肝脏和脾脏指数;利用免疫印迹法检测每组鸡脾脏中干扰素γ(IFN-γ)表达;利用ELISA试剂盒检测每组鸡血清中IL-2、IL-4和IL-6含量。结果显示:与C组比较,L组、M组和H组鸡血清中IgA、IgG和IgM含量、肝脏和脾脏指数、脾脏中IFN-γ的表达、血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量在饲喂Sublancin后第1 d均无显著变化(p>0.05),在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均显著升高(p<0.05);与L组比较,M组和H组中上述检测指标在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均显著升高(p<0.05);与M组比较,H组中上述检测指标在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均无显著变化(p>0.05)。实验表明饲粮中添加抗菌肽Sublancin可以显著增强蛋鸡免疫力,其添加浓度在100 mg/kg^200 mg/kg时,作用效果有剂量依赖性;但添加浓度在200 mg/kg^300 mg/kg时,作用效果与浓度无关。本研究为家禽养殖业中功能性饲料添加剂的开发及抗菌肽Sublancin在养殖业中的应用提供了新的参考依据。
- 田丽娜王秀荣李广兴
- 关键词：抗菌肽蛋鸡免疫功能
- 利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型
- 禽流感病毒(AIV)亚型众多,变异频繁,现已发现16种不同的血凝素亚型(HA)和9种不同的神经氨酸酶亚型(NA),一般认为H5、H7亚型具有高致病力,并且发现H5,H7和H9亚型逐渐对人有感染性。因此建立能迅速、有效的鉴...
- 杨忠苹王秀荣田丽娜陈化兰王煜
- 关键词：疾病诊断基因芯片技术
- 文献传递网络资源链接
- 禽流感H5亚型病毒血凝素基因的表达和抗原性分析被引量：2
- 2007年
- 参考已发表的Guangdong/96/1(H5N1)基因序列设计引物,用鸡胚扩增中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室保存的病毒,收集尿囊液,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增HA基因,将PCR产物平端克隆到pMD18-T中,经酶切、PCR及测序鉴定后,定向亚克隆到pET-30a表达载体中。重组子经酶切和测序鉴定为正确后,用IPTG诱导表达,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析重组蛋白的表达情况。重组蛋白r5HA经Ni-NTA His.Bind Resins纯化,并复性,用Western Blotting分析重组蛋白的抗原性。结果表明:表达产物大小约为65 ku,主要存在于包涵体中,表达量约占总蛋白的30%;同时,表达的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性,可以用作检测H5亚型禽流感病毒抗血清的捕获抗原。
- 王昱王秀荣石锐刘丽玲包红梅杨忠萍田丽娜陈化兰
- 关键词：禽流感病毒H5亚型血凝素抗原性分析
- 高致病性禽流感疫苗免疫程序优化及临床应用
- 禽流感（Avian influenza,AI）,尤其是高致病性禽流感是由禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）感染所引发的一种高度接触性烈性传染病。禽流感在世界范围内广泛传播,不仅能够感染鸡、鸭...
- 田丽娜
- 关键词：高致病性禽流感疫苗免疫程序联合免疫
- 文献传递
- 原核表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)及其抗原性分析
- 禽流感(Avian influenza,AI)是由正粘病毒科A型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)所引起的禽类疾病。AIV为单股负链RNA,由8个独立的RNA节段组成,其中片段4编码血凝素(...
- 王秀荣王煜石锐杨忠萍田丽娜
- 文献传递
