申伟霞
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- H3亚型禽流感病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测方法的建立及其应用
- H3亚型禽流感病毒(AIV)在我国华南地区广泛存在,该亚型病毒不但能感染家禽,还能够人工感染哺乳动物,存在跨宿主感染人和哺乳动物的潜在危险,目前尚缺乏H3亚型AIV的荧光定量PCR快速检测方法。本研究针对H3亚型AIV ...
- 滕巧泱申伟霞陈圆胡涛李泽君
- 关键词：禽流感荧光定量PCR
- H3、H9亚型禽流感病毒双重荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：7
- 2014年
- 虽然H3、H9亚型禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）是低致病性禽流感病毒，但其具有跨宿主感染哺乳动物的能力，对社会公共卫生安全具有重大的潜在危害，因而对这些亚型病毒的监测极其重要。通过比对GenBank上H3、H9亚型禽流感病毒HA基因序列，设计了分别针对H3 AIV和H9 AIV的特异性探针。特异性试验和标准曲线试验的结果显示，这两个探针仅分别特异性识别H3、H9亚型AIV，且具有较好的扩增效率。通过重组质粒pMD19-T-H3HA和pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板，进行敏感性实验。结果表明，本研究所建立的荧光定量PCR方法能检测到100个DNA拷贝数H3 AIV和10个DNA拷贝数的H9 AIV，比传统PCR方法敏感性分别提高了100倍和1000倍。此外，本方法还能检测到10 EID50的H3亚型AIV或H9亚型AIV，比传统PCR方法检测敏感性均提高了1000倍。批间和批内试验的变异系数均小于3%，表明本研究建立的方法具有较好的重复性。此外，与传统PCR方法相比，用H3、H9亚型AIV双重荧光定量PCR方法检测人工感染动物的肺组织时，针对H3 AIV的敏感性提高了10~100倍，针对H9 AIV的敏感性提高了100倍。综上所述，本研究所建立的H3、H9亚型禽流感病毒双重荧光定量PCR方法具有较高的特异性和敏感性，对H3、H9亚型禽流感病毒监测具有重要的应用价值。
- 申伟霞田巧珍陈圆胡涛闫丽萍李国新李雪松滕巧泱赵宇军李泽君
- 关键词：H3H9禽流感病毒
- H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：5
- 2013年
- H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是我国主要流行的低致病性禽流感病毒亚型,因而对其进行病毒的监测与诊断显得极其重要。通过比对GenBank上H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了一个特异性针对H9 AIV HA的探针。特异性和扩增曲线实验结果显示,该探针具有较好的扩增效率,且仅特异性识别H9亚型AIV。通过重组质粒pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR。实验结果表明,本研究所建立的荧光定量PCR方法敏感性能达到100个DNA拷贝数,比传统PCR方法检测敏感性提高了1000倍。此外,本方法还能检测到10EID50个病毒,比传统PCR方法检测敏感性也提高了1000倍。通过批间和批内试验,结果表明,这两个试验的变异系数分别小于5%和1%,说明本研究的方法具有较好的重复性。此外,通过检测人工感染动物咽拭子,结果表明H9亚型AIV荧光定量PCR方法比传统PCR的方法检测敏感性提高了100倍。在临床样品的检测中,H9亚型AIV荧光定量PCR方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了大约30%。综上所述,本研究所建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确性和敏感性,对H9亚型禽流感疫情防控及其流行病学调查具有积极的科学意义。
- 胡涛滕巧泱申伟霞张月娥李国新李雪松闫丽萍姜秀云李泽君
- 关键词：H9N2禽流感病毒定量PCR敏感性
- 利用反向遗传技术构建细胞高适应性的H9N2流感病毒被引量：1
- 2014年
- H9N2亚型禽流感病毒通常在鸡胚上增值性能高,但在细胞上增值能力差。为了获得在细胞上高效表达H9N2亚型禽流感HA和NA抗原的疫苗株,通过反向遗传操作技术将A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2,SH441)的HA和NA基因与A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)的6个内部基因进行人工重组,拯救并获得了1株禽流感重组病毒441-PR8,并对它的生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒441-PR8株在细胞上的增殖能力明显高于野生毒株SH441,该重组病毒有望成为H9N2亚型禽流感疫苗研制的候选毒株。
- 任超超滕巧泱申伟霞李雪松李国新杨健美闫丽萍李泽君
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型H1N1亚型反向遗传操作重组病毒
- H3N2亚型犬流感病毒反向遗传操作系统的建立被引量：4
- 2017年
- H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)可以在犬中迅速的传播,甚至引起犬的死亡,也可感染其他哺乳动物。目前该病毒致病的分子机制尚不清楚。为此,本研究采用RT-PCR技术扩增犬流感病毒A/Canine/Zhejiang/01/2010(H3N2)(简称ZJ2010)的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS 8个基因片段,并分别克隆至双向表达载体p BD上。采用8质粒系统共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,并检测血凝效价。结果显示,本研究成功拯救获得了病毒株r ZJ2010。r ZJ2010株的8个基因片段的序列均与亲本ZJ2010株的序列相同。r ZJ2010株与ZJ2010株在鼠的肺和鼻中复制水平接近。这些结果证实,本研究已成功建立H3N2亚型犬流感病毒反向株遗传操作系统,为该病毒的致病机理、传播机制以及跨宿主传播机制研究等奠定了技术平台。
- 段旭彤荣广玉田巧珍申伟霞李雪松陈鸿军刘芹防杨健美滕巧泱赵凯李泽君
- 关键词：H3N2亚型
- H9N2亚型禽流感病毒遗传演化分析及细胞灭活苗初步研制
- H9N2亚型禽流感病毒作为最主要的低致病性禽流感毒株广泛流行于我国,对养禽业造成了巨大的经济损失。此外,该病毒还具有直接感染人、或为高致病性禽流感病毒H5N1以及新型H7N9亚型禽流感病毒提供内部基因的能力,从而感染人,...
- 申伟霞
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒遗传演化分析细胞灭活苗
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒灭活苗最小免疫剂量及抗体消长规律的初步研究被引量：1
- 2013年
- H9N2亚型禽流感疫苗在我国普遍使用,在强大免疫压力下,H9N2亚型禽流感病毒变异加快,现有商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。为此,本研究以从近期流行毒株中筛选出的一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2)(简称为SH441)为种毒,制备灭活苗,进行了最小免疫剂量及抗体消长规律的初步研究。将制备的H9N2亚型禽流感灭活苗以0.01、0.02、0.04、0.05、0.08 mL/只的不同剂量,胸部肌肉途径免疫3周龄SPF鸡只,并于免疫后21天静脉感染SH441病毒,结果显示该疫苗最小免疫剂量为0.02 mL/只。以0.05 mL/只剂量免疫SPF鸡只,该疫苗能刺激SPF鸡只产生较高的HI抗体滴度,且在免疫后第5周达到峰值(12 Log2以上),随后稍有下降但保持相对稳定,且在免疫后29周时依然保持在7 Log2以上。这些结果为为该疫苗的进一步开发奠定了良好的基础。
- 陈圆胡涛韩敏徐大伟申伟霞李雪松李国新滕巧泱李泽君
- 关键词：H9N2禽流感病毒最小免疫剂量
