翁维琦
- 作品数：12 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学更多>>
- 利用糖蜜发酵生产生物降解塑料PHB的研究被引量：6
- 1999年
- 由Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｌａｔｕｓ经单菌落分离，从中筛选到一株高效利用糖蜜产聚羟基丁酸（ＰＨＢ）的优良菌株１０１８。在６Ｌ台式发酵罐（Ｎ.Ｂ.Ｓ）中，进行了该菌利用甜菜糖蜜和甘蔗糖蜜积累ＰＨＢ的分批补料培养的研究。结果表明，培养５４ｈ左右发酵液中细胞干重达７０～８５ｇ／Ｌ，ＰＨＢ含量占细胞干重的６０％～７０％，生产强度１．０ｇＰＨＢ／Ｌ／ｈ以上；发酵液经非有机溶剂提取制得ＰＨＢ产品，纯度９５％，提取收率８０％以上。
- 翁维琦易祖华黄和容陈琦
- 关键词：糖蜜发酵PHB生物降解塑料
- 发酵法生产羟基丁酸与羟基戊酸共聚物(PHBV)中试
- 翁维琦
- PHBV具有完全生物降解性，可作为工业、农业、日常生活用品等领域一次性材料使用。研究中建立了利用廉价碳源（淀粉水解糖）/丙酸发酵和非有机溶剂提取的新工艺，利用真氧产碱杆菌突变株65-7，以淀粉水解糖和丙酸为碳源，通过分批...
- 关键词：
- 关键词：羟基丁酸共聚物发酵法
- 罗氏真养菌W50的D-木糖代谢途径工程改造被引量：2
- 2014年
- 【目的】拓宽高产聚-β-羟基丁酸酯(poly-β-hydroxybutyrate,PHB)罗氏真养菌(Ralstonia eutropha)W50的碳源使用范围,使其获得D-木糖代谢能力。【方法】运用PCR技术扩增大肠杆菌(Escherichia coli)K-12W3110来源的D-木糖转运蛋白基因xylE,利用同源重组技术将xylE基因整合到R.eutropha W50的染色体上构建菌株W50-E。运用PCR技术扩增E.coli K-12 W3110来源的D-木糖代谢基因xylAB和R.eutropha H16来源的PHA合酶基因phaC1的启动子片段P pha C1,同表达载体连接后构建重组质粒p1-AB。将重组质粒分别转入菌株R.eutropha W50和W50-E中构建工程菌株W50-AB和W50-EAB。通过摇瓶发酵研究W50-AB和W50-EAB的D-木糖代谢特性。【结果】酶活分析结果表明,xylA和xylB基因在菌株R.eutropha W50中得到表达。摇瓶发酵结果表明,W50-AB在含0.1 mol/L D-木糖的基础发酵培养基中的最大比生长速率为0.025 h-1,在含0.01 mol/L D-木糖的基础发酵培养基中没有生长;W50-EAB在含0.01 mol/L D-木糖的基础发酵培养基中表现出一定生长,在含0.1 mol/L D-木糖的基础发酵培养基中最大比生长速率为0.035 h-1。PHB含量分析结果表明,摇瓶发酵终点时,W50-AB和W50-EAB菌株内的PHB含量分别为细胞干重的15.07±1.01%和15.07±1.64%,其相应的D-木糖-PHB转化率分别为0.0920 g·g-1和0.0838 g·g-1,低于两重组菌株利用葡萄糖发酵的糖-PHB转化率(>0.22 g·g-1)。另外,重组菌株W50-AB和W50-EAB在含葡萄糖(0.01 mol/L)和D-木糖(0.09 mol/L)的混合糖培养基中的发酵结果表明,两重组菌株均表现出更高的生长速率和D-木糖消耗速率以及胞内PHB积累量。【结论】来源于E.coli K-12W3110菌株的xylAB基因的表达使R.eutropha W50获得了一定的D-木糖代谢能力,通过D-木糖转运蛋白基因xylE的表达能提高菌株的D-木糖代谢能力,同时重组菌株利用D-木糖能积累一定量PHB。
- 刘凯刘桂明张英姿丁久元翁维琦
- 缬氨酸发酵动力学的研究
- 了从连续培养中分离的缬氨酸稳产菌Ａ５３及其出发菌株１２５的生长动力学，分别用连续培养和补料分批培养测得了二菌生长动力学模型参数－－饱和常数Ｋｓ值，并从理论上分析了连续培养时二菌产酸水平的差异。
- 翁维琦
- 关键词：发酵动力学缬氨酸氨基酸
- 真养产碱杆菌突变株65－7产聚－β－羟基丁酸的研究被引量：19
- 1995年
- 本文对真养产碱杆菌突变株６５－７在台式２Ｌ发酵罐中利用葡萄糖积累ＰＨＢ进行了碳源和氮源补料分批培养的研究。结果表明７２ｈ发酵液中细胞干重达５０ｇ／Ｌ，ＰＨＢ占细胞干重的７７％，糖对ＰＨＢ的转化率为２５％。制得的ＰＨＢ产品纯度与Ｓｉｇｍａ公司的相当，熔点１７４℃。
- 易祖华黄和容翁维琦陈琦陈东郑平弟
- 关键词：真养产碱杆菌突变株补料分批培养
- 重组菌Ralstonia eutropha W50-EAB D-木糖代谢相关的限速靶点
- 2015年
- 【目的】通过代谢工程改造真养罗氏菌(Ralstonia eutropha)W50-EAB木糖代谢的相关限速靶点,进一步提高R.eutropha W50-EAB的D-木糖利用效率,为获得高效利用纤维素水解液的菌株奠定基础。【方法】利用PCR技术扩增R.eutropha转酮酶基因tkt A,cbb T2和转醛酶基因tal,将扩增的tkt A,cbb T2和tal基因分别构建到表达载体p BBR1MCS-3上,获得重组质粒p WL1-TKT,p WL1-CBBT2,p WL1-TAL。通过电转的方式将质粒分别转化W50-EAB获得重组菌W50-KAB,W50-CAB和W50-TAB。利用基因敲除的方法,获得醛还原酶基因h16_A3186敲除株W50'-EAB。通过电转的方式将重组质粒p WL1-TAL导入敲除株W50'-EAB获得重组菌株W50'-TAB。通过摇瓶发酵研究重组菌株W50-KAB,W50-CAB,W50-TAB,W50'-EAB以及W50'-TAB的发酵特性。【结果】酶活分析结果表明,转酮酶和转醛酶基因实现表达。摇瓶发酵结果表明,转酮酶基因过表达菌株W50-KAB和W50-CAB相比于对照菌株W50-EAB/p3,表现出降低的木糖利用能力;而转醛酶基因过表达重组菌株W50-TAB以及敲除菌株W50'-EAB对木糖的利用得到一定的提高。在0.1 mol/L木糖的发酵培养基中,W50-EAB的最大比生长速率为0.035 h-1,PHB干重比为16.2±1.01%;而W50-TAB的最大比生长速率提高到0.039 h-1,PHB干重比达到20.5±0.76%;醛还原酶基因敲除菌株W50'-EAB最大比生长速率提高到0.040 h-1,PHB含量提高到19.8±1.05%。结果显示转醛酶基因的过表达与醛还原酶基因的敲除对木糖利用均表现出一定的优势,将这两种优势组合获得菌株W50'-TAB,摇瓶发酵分析结果为最大比生长速率达到0.042 h-1,PHB积累达到27.9±0.47%,相比于对照菌株提高了72.2%。另外,在含有葡萄糖(0.01 mol/L)和木糖(0.09 mol/L)的混合糖培养下,重组菌株W50-TAB,W50'-EAB和W50'-TAB相比于在纯木糖培养下都表现出更高的生物量和胞内PHB积累量。【结论】磷酸戊糖途径关键酶转醛酶基因的过表达加速了木糖代谢流,从而
- 王露刘桂明张英姿王宇丁久元翁维琦
- 生产聚羟基丁酸－戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用
- 本发明公开了生产聚羟基丁酸－戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明的基因工程菌是真氧罗氏菌的基因缺失株或将甲基丙二酸单酰辅酶A变位酶的编码基因yliK、GTP激酶的编码基因argK和甲基丙二酸单酰辅酶A脱羧酶的编码...
- 丁久元张英姿刘桂明翁维琦刘双江
- 文献传递
- 一种从发酵液中直接提取聚羟基烷酸酯的一步分离法
- 本发明公开了一种从含有聚羟基烷酸酯的细胞发酵液中直接提取聚羟基烷酸酯一步分离提取法。本发明属生物工程技术领域。其主要特征是在以真养产碱杆菌发酵生产聚羟基烷酸酯(PHAs)的发酵液中,直接加入表面活性剂、次氯酸钠和变形剂,...
- 翁维琦蔡以滨刘墨青易祖华陈琦
- 文献传递
- 补料培养提高真养产碱杆菌产3-羟基丁酸和3-羟基戊酸共聚物生产强度的研究被引量：4
- 2001年
- 对Alcaligeneseutrophus进行高密度培养 ,研究表明在发酵过程中进行有效控制 ,可以较大幅度地提高 3 羟基丁酸和 3 羟基戊酸共聚物 [P(3HB co 3HV) ]的生产强度。实验中选择使用限氮的方法积累P(3HB co 3HV) ,分别采用丙酸和戊酸为 3HV前体 ,对摇瓶种子生长状态 ,停氮时机对菌体生产P(3HB co 3HV)的影响以及补酸 (3HV前体 )策略进行了研究 ,在 6 6L罐中 ,以葡萄糖为碳源 ,以丙酸为 3HV前体培养 5 0h ,细胞干重 ,PHA产量 ,PHA含量分别达到 149 9g L ,12 4 9g L ,83 3% (其中 3HV组分占PHA的 12 4mol% ) ,生产强度达到 2 5 0 (g·h- 1 ·L- 1 ) ;以戊酸为3HV前体培养 45h ,细胞干重 ,PHA产量 ,PHA含量分别达到 16 0 2g L、119 0g L、74 2 % (其中 3HV组分占PHA的17 7mol% ) ,生产强度达到 2 6 4(g·h- 1 ·L- 1 )
- 蔡以滨刘墨青易祖华陈琦翁维琦
- 关键词：真养产碱杆菌3-羟基丁酸生物降解性
- 生产聚羟基丁酸-戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用
- 本发明公开了生产聚羟基丁酸－戊酸酯的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明的基因工程菌是真氧罗氏菌的基因缺失株或将甲基丙二酸单酰辅酶A变位酶的编码基因yliK、GTP激酶的编码基因argK和甲基丙二酸单酰辅酶A脱羧酶的编码...
- 丁久元张英姿刘桂明翁维琦刘双江
