薛栋
- 作品数：8 被引量：5H指数：2
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- 大鼠的不同纯度胰岛中干细胞标志物CK-19及PDX-1 mRNA的表达被引量：2
- 2006年
- 目的探讨大鼠的不同纯度胰岛中干细胞标志物细胞角质蛋白19(CK-19)和胰十二指肠同源盒基因1(PDX-1)mRNA的表达。方法将30只雄性SD大鼠随机平均分成3组,均采用胶原酶Ⅴ型通过胰管对胰腺进行灌注,切取胰腺,剪碎、吹打、消化、离心获得胰岛细胞沉淀物。A组胰岛沉淀物不进行纯化;B组胰岛沉淀物中加入体积分数为25%的Ficoll-400液纯化;C组胰岛沉淀物依次加入25%及11%的Ficoll-400纯化。分别将上述3组纯化后的胰岛抽提RNA行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),分析胰岛干细胞标志物CK-19及PDX-1mRNA的表达。结果采用不同的纯化方法后,A、B、C三组获得胰岛的纯度分别为(43.6±6.29)%、(65.3±4.40)%和(77.6±6.36)%,三组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。A组胰岛中CK-19和PDX-1mRNA的表达明显高于B组和C组,而C组表达最弱。结论不同纯度的胰岛中均有CK-19及PDX-1mRNA的表达,表明在纯化胰岛中均有干细胞存在。
- 杨闯王济明杜成友薛栋
- 关键词：胰岛干细胞
- 不同纯度大鼠胰岛中Nestin、Ngn3阳性细胞表达的实验研究
- 目的：制备不同纯度的大鼠胰岛，探讨不同纯度大鼠胰岛中NestinNgn3阳性细胞的表达。
方法：30只雄性SD大鼠随机分成3组，采用胶原酶V型胰管灌注分离消化及不连续密度梯度法Ficoll一400纯化，制备三种...
- 薛栋
- 关键词：巢蛋白免疫组化
- 文献传递
- 不同纯度的大鼠胰岛中干细胞标记物细胞角质蛋白19及胰十二指肠同源盒基因的表达
- 2007年
- 目的探讨不同纯度的大鼠胰岛中干细胞标记物细胞角质蛋白19(CK-19)及胰十二指肠同源盒基因1(PDX-1)的表达。方法将30只雄性SD大鼠随机平均分成3组,均采用胶原酶Ⅴ型通过胰管对胰腺进行灌注,切取胰腺,剪碎,吹打、消化、离心获得胰岛细胞沉淀物。A组:胰岛沉淀物不进行纯化;B组:胰岛沉淀物中加入25%的Ficoll液纯化;C组:胰岛沉淀物依次加入25%及11%的Ficoll液纯化。应用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),分析不同纯度胰岛中干细胞标记物CK-19及PDX-1蛋白和mRNA的表达。结果采用不同的纯化方法后,A、B、C3组获得胰岛的纯度不同,3组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化和RT-PCR分析A、B、C3组中CK-19及PDX-1的蛋白和mRNA的表达,A组中CK-19及PDX-1蛋白和mRNA的表达明显高于B、C组,而C组表达最弱。结论不同纯度的胰岛中均有CK-19及PDX-1蛋白和mRNA的表达,表明在纯化胰岛中均有干细胞存在。
- 杨闯王济明杜成友薛栋
- 关键词：胰岛干细胞免疫组织化学逆转录聚合酶链反应
- 大鼠不同纯度胰岛样本中干细胞标志物细胞角蛋白19的表达(英文)
- 2007年
- 背景:胰腺中存在的干细胞在合适的培养条件下可分化为具有内分泌功能的细胞,可以作为一种新的胰岛来源治疗糖尿病。目的:分析大鼠胰岛纯化程度与其中所携带的干细胞数量的关系。设计:以细胞为观察对象,对比实验。单位:绵阳市第三人民医院材料:实验于2005-03/2006-03在重庆医科大学附属一院中心实验室完成。选取30只清洁级健康雄性SD大鼠,鼠龄50 d。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。细胞角蛋白19和β-actin引物由上海英俊生物有限公司设计。Brdu试剂、小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体、兔抗鼠CK-19多克隆抗体、Brdu免疫组织化学试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。Histostain^(TM)-DS免疫组织化学双染试剂盒购于北京中杉公司。方法:大鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记,均采用胶原酶V型通过胰管对胰腺进行灌注,切取胰腺,剪碎,吹打、消化、离心获得胰岛细胞沉淀物。离心后沉淀物进行如下处理:即,不纯化组:胰岛沉淀物不进行纯化;高密度介质纯化法组:胰岛沉淀物中加入体积分数为25%的Ficoll液纯化;两种不同密度梯度纯化法组:胰岛沉淀物依次加入25%及11%的Ficoll液纯化。主要观察指标:应用免疫组织化学法检测胰岛样本中Brdu及细胞角蛋白19阳性细胞的表达,应用反转录聚合酶链反应检测不同纯度胰岛中细胞角蛋白19 mRNA的表达。结果:①胰岛纯度:不纯化组最低,3组获得的胰岛细胞纯度比较,差异有显著性意义(F=89.42,P<0.05)。②胰岛样本中Brdu和细胞角蛋白19阳性细胞的表达:不纯化组的阳性表达高于高密度介质纯化法组和两种不同密度梯度纯化法组,差异有显著性意义(F=18.64,22.12,38.61,P<0.01)。③胰岛中细胞角蛋白19 mRNA的表达:不纯化组最强,两种不同密度梯度纯化法组最弱。结论:不同纯度的胰岛中有Brdu及细胞角蛋白19阳性细胞,在低纯度�
- 杨闯王济明杜成友黄艳君薛栋
- 关键词：胰岛干细胞免疫组织化学逆转录聚合酶链反应
- 不同纯度大鼠供体胰岛中巢蛋白、神经元素3的表达
- 2007年
- 目的观察巢蛋白(Nestin)、神经元素(Ngn)3在不同纯度大鼠胰岛中的表达。方法将30只成年雄性SD大鼠随机分为3组,采用胰管内注入胶原酶消化法分离成年大鼠胰腺,Ⅰ组(n=10):胰岛沉淀物不进行纯化;Ⅱ组(n=10):胰岛沉淀物加入25%Ficoll-400纯化,Ⅲ组(n= 10):胰岛沉淀物依次加入25%、11%的Ficoll-400纯化。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Nes- tin和Ngn3 mRNA在不同纯度胰岛细胞中的表达。结果Ⅰ组获得胰岛纯度为(43.60±6.29)%,Ⅱ组获得胰岛纯度为(65.30±4.40)%,Ⅲ组获得胰岛纯度为(77.60±6.36)%,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ组中Nestin和Ngn3的mRNA表达明显高于Ⅱ组、Ⅲ组,Ⅲ组中表达最弱。结论Nestin、Ngn3在不同纯度胰岛细胞中均有表达,但是在低纯度胰岛中表达最明显,提示低纯度胰岛中可能携带较多的干细胞。
- 薛栋杜成友杨闯尹昌生
- 关键词：巢蛋白胰岛逆转录-聚合酶链反应
- Nestin阳性细胞的研究进展被引量：3
- 2005年
- 胰岛干细胞移植有望能治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病。从胰腺组织分离得到的Nestin阳性细胞,可以转分化为胰腺的内、外分泌细胞和肝细胞,因而被认为是胰岛干细胞;但是也有研究表明Nestin阳性细胞不能转分化为胰岛细胞,主要与未成熟胰岛细胞向胰岛细胞过渡过程中的血管生成有关,并向未成熟胰岛细胞传递信号,促进胰岛细胞的成型(formation)并维持胰岛细胞的形态功能。本文就Nestin阳性细胞的研究进展进行综述。
- 薛栋杜成友
- 神经元素3在不同纯度供体胰岛细胞中的表达
- 2007年
- 目的:研究神经元素3(Ngn3)在不同纯度胰岛细胞中的表达情况,探讨不同纯度胰岛细胞中所携带的干细胞。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为3组,采用胰管内注入胶原酶消化法分离成年大鼠胰腺,Ⅰ组(n=10):采用2次消化、不纯化的方法获得胰岛;Ⅱ组(n=10):胰岛沉淀物加入25%Ficoll-400纯化,Ⅲ组(n=10):胰岛沉淀物依次加入25%、11%的Ficoll-400纯化。应用免疫组化、逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法进行定位、半定量分析,检测Ngn3在不同纯度胰岛细胞中的表达。结果:Ⅰ组获得胰岛纯度约为43.6%±6.29%,Ⅱ组获得胰岛纯度约为65.3%±4.40%,Ⅲ组获得胰岛纯度约为77.6%±6.36%,各组比较均具有显著性差异(P<0.05)。Ngn3在不同纯度胰岛细胞中均有表达,Ⅰ组中Ngn3的蛋白和和核酸水平表达明显高于Ⅱ组、Ⅲ组,Ⅲ组中表达最弱,各组比较均具有显著性差异(P<0.05)。结论:Ngn3在不同纯度胰岛细胞中均有表达,在低纯度胰岛细胞中表达最明显,提示低纯度胰岛细胞中可能携带较多的干细胞。
- 薛栋杜成友杨闯尹昌生
- 关键词：逆转录-多聚酶链反应免疫组化
- 大鼠不同纯度胰岛样本中干细胞标记物CK-19的表达
- 2008年
- 我们通过实验观察不同纯度大鼠胰岛样本中干细胞标志物细胞角质蛋白（CK）-19的表达，探讨不同纯度胰岛样本中所携带的干细胞。
- 杨闯王济明杜成友黄艳君薛栋
- 关键词：干细胞标记物CK-19胰岛纯度细胞角质蛋白干细胞标志物
