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DEPTO R蛋白的表达纯化条件及与mTOR-TRD2亚结构域的相互作用被引量：1: 2016年; 测试并优化了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的FAT结构域及其亚结构域TRD2和DEPTOR蛋白在大肠杆菌中的表达条件,获得了TRD2和DEPTOR蛋白成功表达并大量纯化的条件.结果表明,麦芽糖结合蛋白(MBP)融合m TOR的TRD2亚结构域可以在菌株BL21(DE3)中大量表达.DEPTOR-G270P突变比野生型DEPTOR在BL21(DE3)中的表达量提高约5倍,且该突变并不影响DEPTOR自身的二级结构.通过凝胶过滤实验发现,m TOR的TRD2亚结构域和DEPTOR之间可能存在相互作用.; 王男程小桁郑积敏陈光巨贾宗超; 关键词：大肠杆菌表达

大肠杆菌MinC/FtsZ蛋白复合物的纯化和结晶被引量：3: 2017年; 大肠杆菌在细胞分裂时,FtsZ(Filamentous temperature-sensitive protein Z)蛋白会在细胞中部潜在位点聚合形成Z环,而MinC蛋白会抑制Z环形成,从而控制细胞分裂。本研究将min C与fts Z目的基因克隆到合适的载体中,并导入到大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析和分子筛纯化的方法得到MinC/FtsZ复合物蛋白进行晶体筛选。通过FtsZ、MinC分别单独转化、表达纯化后混合和FtsZ、MinC共转化法两种方法得到FtsZ/MinC蛋白复合物,并分别对其进行晶体筛选。实验结果表明,在适宜的表达条件下,利用分别转化、纯化再混合的方法得到的FtsZ和MinC蛋白复合比例约为1∶1;混合时加入GTP和Mg Cl2可以促进复合物聚集态更单一,通过晶体筛选初步得到形状为针状的FtsZ/MinC复合蛋白晶体,为MinC/FtsZ复合物的结构解析提供实验基础。; 杨少媛朱嘉吴彦王晓锐吴海静贾宗超郑积敏; 关键词：细胞分裂复合物

AceK作为高效的ATP水解酶其机理及功能转换的理论研究: 异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶(AceK)是大肠杆菌在低营养环境下代谢调控的关键酶,通过对底物异柠檬酸(ICDH)进行磷酸化或去磷酸化从而调节和控制大肠杆菌的代谢旁路.AceK作为多功能蛋白酶,在同一活性中心既具有激酶、磷酸...; 秦佳佳谭宏伟陈光巨郑积敏贾宗超; 关键词：密度泛函理论

革兰氏阴性菌WaaP蛋白的表达与纯化: 2014年; 采用基因重组方法构建来源于大肠杆菌和铜绿假单胞菌的waa P基因的克隆,利用多种感受态细胞表达出带有不同纯化标签的可溶性Waa P蛋白,并利用亲合层析和凝胶过滤层析对可溶性Waa P蛋白进行纯化,用SDS-PAGE进行检测。对比大肠杆菌和铜绿假单胞菌中Waa P的表达和纯化结果,为蛋白结晶选取能够得到大量稳定和高纯度Waa P蛋白的表达纯化方法,并用该方法,使用硒代甲硫氨酸培养基表达出硒代甲硫氨酸标记的Waa P,为蛋白结构解析时相位的确定提供依据。; 金瑾朱嘉杨少媛雷振郑积敏贾宗超; 关键词：抗生素革兰氏阴性菌脂多糖外膜

贻贝珍珠质蛋白C1Q结构域的异源表达: 2015年; 通过对贻贝珍珠质蛋白EFP分析,发现该蛋白的重要保守域C1Q值得进一步研究.在不以贻贝为材料的前提下,设计引物以基因扩增的方式合成了该基因.经过蛋白的表达纯化与复性,首次使用大肠杆菌制备了可溶的C1Q蛋白.该蛋白具有预期的二级结构与金属离子结合活性,为进一步研究打下了基础.; 蒋佳宏郑积敏贾宗超; 关键词：异源表达

AceK作为高效的ATP水解酶其机理及功能转换的理论研究: 异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶（AceK）是大肠杆菌在低营养环境下代谢调控的关键酶,通过对底物异柠檬酸（ICDH）进行磷酸化或去磷酸化从而调节和控制大肠杆菌的代谢旁路。AceK作为多功能蛋白酶,在同一活性中心既具有激酶、磷酸...; 秦佳佳谭宏伟陈光巨郑积敏贾宗超; 关键词：密度泛函理论; 文献传递

大肠杆菌MinCD蛋白复合物纯化方法和晶体筛选: 2015年; 大肠杆菌在细胞分裂时,细胞中部潜在分裂位点的选择受到Min系统(Min C、Min D和Min E蛋白)的精确调控,其中Min C与Min D可以形成复合物以抑制Z分裂环在错误的位置形成。本研究采用基因克隆方法获得min C、min D基因的克隆,并表达得到Min C和Min D的重组蛋白,用亲和层析与凝胶过滤层析对所得蛋白进行纯化,通过min C、min D分别单独转化、表达纯化后混合和min C、min D共转化法两种方法得到Min CD蛋白复合物,并分别对其进行晶体筛选。结果表明,共转化法得到的Min CD复合物纯度较好,且比例约为2∶1,通过晶体筛选初步获得针状蛋白晶体,为Min CD复合物的结构解析提供了实验基础。; 金瑾杨少媛朱嘉雷振郑积敏贾宗超; 关键词：细胞分裂复合物 MIND

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贾宗超