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鸭源新城疫病毒M蛋白核定位信号突变影响病毒的毒力和复制能力被引量：3: 2018年; 【目的】研究鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白核定位信号(nuclear localization signal,NLS)突变对其毒力和复制能力的影响。【方法】利用鸭源NDV SS1株P基因和F基因上的AgeⅠ和Bstz17Ⅰ酶切位点,将overlapPCR方法获得的M蛋白NLS突变的片段替换到p NDV/SS1GFP中获得全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。通过反向遗传学技术拯救M蛋白NLS突变体病毒,并对拯救的病毒进行血凝(hemagglutination,HA)试验、荧光试验和M基因测序鉴定。另外,对突变体病毒进行M蛋白的亚细胞定位观察,以及病毒的生物学特性、空斑形成能力和体外增殖能力测定。【结果】成功构建M蛋白NLS突变的全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。细胞转染物接种鸡胚后的第1代尿囊液无HA效价,盲传3代才能检测到拯救病毒的HA效价。进一步的荧光试验和M基因测序确定拯救的病毒是突变体病毒r SS1GFP-M/NLSm。与亲本病毒rSS1GFP相比,突变体病毒M蛋白由细胞核定位变为细胞质定位。此外,突变体病毒的毒力、在鸡胚上的复制能力以及在细胞中的空斑形成能力显著降低,并且感染细胞后产生的细胞病变轻微,M蛋白和绿色荧光蛋白的表达量均降低,说明M蛋白NLS突变使病毒的体外增殖能力受到抑制。【结论】NLS突变导致的M蛋白细胞核定位功能丧失可明显降低鸭源NDV的毒力和复制能力。; 段志强嵇辛勤邓珊珊胡焱赵佳福倪萌萌; 关键词：新城疫病毒 M蛋白核定位信号病毒复制

影响BLM基因表达的miRNAs筛选及抑制效率研究被引量：4: 2018年; [目的]筛选调控BLM基因表达的miRNAs并研究其抑制效率。[方法]利用Target Scan Human 6.2、microRNA.org、PicTar以及miRsystem在线软件预测调控BLM基因表达的miRNAs;miRNA通过脂质体转染和特异茎环引物反转录、荧光定量PCR及Pfaffl算法检测miRNA对BLM基因表达的影响。[结果]初步筛选出hsa-miR-338-3p为调控BLM基因表达的miRNA;hsa-miR-338-3p抑制效率试验结果表明:当前列腺癌细胞(PC3)转染20μmol/L的hsamiR-338-3p minic时,实验组BLM表达量为对照组的0.44倍,抑制了BLM的表达(P<0.01);转染40μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时,实验组BLM的表达量为对照组的2.55倍,促进了BLM的表达(P<0.01);转染60μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时,实验组BLM的表达量为对照组的1.14倍,实验组与对照组差异不显著(P>0.05)。[结论]转染20μmol/L、40μmol/L和60μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时BLM基因的表达量分别是对照组的0.44倍、2.55倍和1.44倍,转染不同剂量的miRNA对BLM基因的表达情况具有不同的影响。; 谌颖莲许厚强赵佳福王赛楠; 关键词：MIRNAS

敌百虫急性染毒对贵州白香猪的影响被引量：1: 2009年; 用10头贵州白香猪分为空白对照组(3头)和试验组(7头),试验组分别按5 000 mg/kg体重(1头)、3 000 mg/kg体重(1头)2、000 mg/kg体重(2头)、1 000 mg/kg体重(3头)经口灌胃一次染毒,从急性毒性效应、临床中毒症状、血液生理生化指标变化3个方面探讨敌百虫对贵州白香猪的急性毒性作用。结果表明:敌百虫对贵州白香猪的最小致死量(Dn)为1 000 mg/kg体重,全致死量(Dm)为2 000 mg/kg体重。同时探讨了大剂量、长期接触敌百虫可能引起动物免疫功能下降及血循状况改变,进而严重危害机体健康。; 李金杰许厚强徐彩龙张勇陈祥余定标赵佳福华在东; 关键词：贵州白香猪敌百虫急性染毒血液生理生化指标

香×苏F2代杂交猪屠宰性状、肉质性状及脏器系数的测定被引量：3: 2019年; 为了研究香×苏F2代杂交猪的杂交性能,试验随机选取6月龄的香×苏F2代杂交猪15头,以纯种苏太猪和纯种从江香猪为对照,进行屠宰性状、肉质性能及脏器系数的测定。结果表明:香×苏F2代杂交猪屠宰性状与从江香猪差异极显著(P<0. 01),优于从江香猪而劣于苏太猪;香×苏F2代杂交猪肌肉失水率、肌内脂肪含量与从江香猪、苏太猪差异极显著(P<0. 01);香×苏F2代杂交猪肝脏、脾脏和肾脏系数与从江香猪和苏太猪均差异显著(P<0. 05)。说明香×苏F2代杂交猪既发挥了苏太猪生长速度快、瘦肉率高的特性,又基本上保持了从江香猪的优良肉质特性。; 阮涌廖政倪萌萌赵佳福赵佳福段志强; 关键词：从江香猪苏太猪杂交猪屠宰性状肉质性状脏器系数

NGF基因在黔北麻羊卵巢颗粒细胞及组织的表达分析: 2023年; 旨在验证NGF基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究NGF基因对黔北麻羊产羔性状的影响。选取健康、体质量45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qPCR法检测NGF基因在单、多羔组黔北麻羊母羊不同组织的表达水平,构建pEGFP-N3-NGF重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-NGF重组质粒进入卵巢颗粒细胞,分为超表达NGF试验组和pEGFP-N3空载体对照组,通过检测培养基中雌二醇、孕酮的浓度,及对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、NGF、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响,来探究NGF基因对卵巢颗粒细胞的影响。结果表明,NGF基因在黔北麻羊各组织中均有表达,组间比较可知,卵巢和输卵管在多羔组表达极显著高于单羔组(P<0.01)。成功将pEGFP-N3-NGF重组质粒转染进入卵巢颗粒细胞,在12 h对E2的分泌具有显著促进作用(P<0.05),而对P4的分泌在12,24 h具有显著抑制作用(P<0.05),对卵巢颗粒细胞增殖在24,48 h具有极显著抑制作用(P<0.01),对卵巢颗粒细胞的凋亡具有促进作用。而对繁殖相关基因GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3 mRNA的表达有极显著促进作用(P<0.01)。综上表明,NGF基因可提高E2的分泌,抑制P4的分泌,有助于黔北麻羊发情及妊娠的维持,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,也极显著促进繁殖相关基因mRNA的表达,而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵,因此,NGF基因能够促进这些基因表达,进而促进卵泡的发育、形成及排卵,提高山羊的产羔力,这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础,初步认为NGF基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因。; 陈祥敖叶李诚兰赵佳福周志楠韦仕南; 关键词：黔北麻羊 NGF 卵巢颗粒细胞

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用被引量：5: 2016年; 目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用。方法使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(P<0.05),Transwell细胞侵袭和迁移实验中穿过室膜的细胞数与对照组比均减少(侵袭:119±24、118±30vs 227±38;迁移:122±13、121±47vs 277±32,P<0.05),划痕愈合率与划痕迁移距离均降低,48h时差异有统计学意义(P<0.05),而且细胞凋亡明显增加。结论以RNAi载体干扰Bloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据。; 罗霂榃许厚强刘忠伟段志强赵佳福吴萍陈福; 关键词：RNA干扰前列腺肿瘤细胞侵袭

敲减BLM解旋酶表达增强前列腺癌PC3细胞对丝裂霉素C的敏感性被引量：11: 2017年; 丝裂霉素C是一种广谱抗肿瘤抗生素,对多种癌症有抗癌作用,其作用原理可使细胞的DNA发生链间交联,引起DNA双链断裂,阻碍DNA的复制,从而抑制肿瘤细胞分裂。临床上主要用于胃癌、肠癌、肝癌及胰腺癌等消化道癌方面的治疗。本文研究丝裂霉素C对转染人BLM解旋酶基因(shRNA载体)前后前列腺癌PC3细胞活性的影响。使用前期成功构建的干扰载体转染PC3细胞,在转染48 h后加药,通过荧光定量PCR、MTT法、Transwell小室实验、细胞划痕实验、流式细胞术,分别检测加药12、24、36 h BLM基因的表达量、PC3细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力及凋亡情况的变化。结果显示,敲减BLM基因表达后的PC3细胞相对于正常PC3细胞其增殖能力、侵袭能力和迁移能力能显著被丝裂霉素C抑制,且丝裂霉素C能显著促进其细胞的凋亡,说明BLM基因低表达的前列腺癌细胞对丝裂霉素C更敏感。研究结果为丝裂霉素C在前列腺癌的临床治疗上奠定了理论基础。; 吴萍许厚强赵佳福刘忠伟段志强陈福谌颖莲; 关键词：丝裂霉素C 前列腺癌细胞细胞活性

利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛<I>MyoDⅠ</I><i/>基因核心启动子的方法，包括以下步骤：构建含关岭牛MyoDⅠ基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体；对骨骼肌生长相关的细胞进行培...; 许厚强李飞陈伟陈祥赵佳福; 文献传递

鸡importin β1基因的克隆及生物信息学分析被引量：4: 2016年; [目的]对鸡importin β1基因进行克隆和生物信息学分析。[方法]根据Gen Bank公布的鸡importin β1基因序列(XM_015299473)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从DF-1细胞中扩增importin β1基因CDS区并进行克隆和测序,利用生物信息学工具对其理化性质、二级结构和系统进化树进行分析。[结果]鸡importin β1基因CDS全长2 268bp,共编码755个氨基酸,该蛋白等电点为4.61,相对分子质量84.15 k Da,分子式为C3712H5901N979O1152S46。蛋白质二级结构预测显示,鸡importin β1蛋白含有丰富的二级结构,以α-螺旋为主(占64.90%)。importin β1基因同源性及系统进化树分析结果表明鸡与鹌鹑的亲缘关系最近。[结论]鸡importin β1基因的克隆和生物信息学分析为进一步研究其功能奠定了基础。; 胡焱段志强嵇辛勤阮涌赵佳福雷云万彪; 关键词：克隆生物信息学

白洗猪PID1基因克隆及序列分析被引量：2: 2016年; 本研究旨在对白洗猪磷酸酪氨酸互作结构域1(phosphotyrosine interaction domain containing 1,PID1)基因进行克隆和生物信息学分析。采用Nest PCR及T克隆技术对白洗猪PID1基因进行克隆测序,运用生物学分析软件分析其结构功能及其在种内及种间的遗传进化关系。结果表明,白洗猪PID1基因CDS区全长654bp,编码217个氨基酸,白洗猪与山东莱芜猪、广西陆川猪PID1蛋白氨基酸同源性为98.2%与97.7%;进化树分析结果表明白洗猪与两个猪种间遗传关系相对较远,种间比对黄牛、牦牛、猕猴、小鼠、眼镜王蛇、人、原鸡、非洲爪蟾、大鼠和斑马鱼PID1蛋白氨基酸同源性依次为96.6%、96.6%、96.3%、95.0%、93.9%、91.7%、90.8%、88.2%、69.7%和67.3%;系统进化树分析表明PID1基因在多物种之间的进化高度保守,结构功能分析表明白洗猪PID1基因功能区主要是编码链氨基酸C端的PTB结构域。本研究成功克隆了白洗猪PID1基因,为探究其对白洗猪肌内脂肪沉积方面的影响及为白洗猪种资源开发利用奠定理论基础。; 冯文武孙振梅李鹏程丁玫许厚强赵佳福陈祥; 关键词：肉质肌内脂肪克隆 PTB

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