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恶性转化人支气管上皮细胞基因组甲基化观察被引量：2: 2006年; 目的对反式二氢二醇环氧苯并芘(anti-BPDE)和结晶型硫化镍(NiS)恶性转化人支气管上皮细胞(Hu-man bronchial epithelia,16HBE)基因组DNA甲基化状况进行研究,寻找DNA甲基化异常的基因片段,探讨反式-BPDE和NiS的表遗传致癌机制。方法采用限制性指纹识别技术(MSRF),对反式-BPDE和NiS分别诱导转化及裸鼠成瘤的4种人支气管上皮细胞株基因组进行分析;对异常甲基化基因阳性片断采用TA克隆技术构建测序载体,对测序结果进行同源性分析比较。结果发现结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞基因组存在高甲基化的DNA片段,其中一基因片段与编码鼻咽癌易感性蛋白ANKRD11基因序列99%同源。另一基因片段与HOXA3基因序列99%同源;未发现反式BPDE恶性转化人支气管上皮细胞基因组DNA异常甲基化基因片段。结论结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞DNA的高度甲基化可能导致基因表达抑制。可能是结晶型NiS致癌的一种表遗传机制;反式BPDE致癌过程可能与基因组磷酸胞苷酰(CpG)岛甲基化异常关系不明确。; 赵艳丰陈家堃吴中亮雷毅雄蒋义国纪卫东王敏安社娟; 关键词：DNA甲基化基因组

反式二羟环氧苯并芘诱导人支气管上皮细胞翻译延长因子1α1基因的表达被引量：1: 2005年; 目的探讨反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱导转化(16HBE-T)与成瘤(16HBE-C)人支气管上皮细胞(16HBE)翻译延长因子1α1基因的表达变化。方法联合应用抑制性消减杂交、生物信息学分析以及半定量RT-PCR等方法,分别以16HBE-T和16HBE-C细胞cDNA为检测子,以正常16HBE细胞(16HBE-N)cDNA为驱动子,构建消减杂交文库,经2次杂交和2次PCR后,插入TA克隆载体克隆,经筛选、测序、序列分析后,设计特异引物,以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,进行半定量PCR。结果有9条差异表达片段与Genbank的翻译延长因子1α1的不同片段相同,半定量PCR表明,翻译延长因子1α1在16HBE-T和16HBE-C细胞中的表达水平分别为16HBE-N细胞的1.148倍和1.253倍,表明表达水平上调。结论翻译延长因子1α1可能与反式-BPDE的转化及成瘤有部分关系。; 安社娟陈家堃陈学敏赵艳丰刘莉莉; 关键词：苯并(A)芘抑制性消减杂交生物信息学

硫化镍诱导转化人支气管上皮细胞基因组DNA甲基化的研究被引量：8: 2004年; 目的　对结晶型硫化镍诱导转化及成瘤的人支气管上皮细胞 ( 16HBE)基因组DNA甲基化状况进行研究 ,以寻找DNA甲基化异常的基因片段 ,并探讨镍的外遗传致癌机制。方法　抽提基因组DNA后 ,采用限制性内切酶MseI单独酶切或限制性内切酶MseI与BstuI双重酶切后 ,其酶切产物采用甲基化敏感的限制性指纹识别技术 (MSRF)进行分析 ,显示的异常甲基化基因片断 ,采用TA克隆技术构建测序载体 ,对测序结果进行同源性分析比较。结果　发现结晶型NiS诱导转化及成瘤的 16HBE细胞基因组DNA存在高甲基化的DNA片段。其中一基因片段与位于 16q2 4.3编码鼻咽癌易感性蛋白基因ANKRD11同源 ( 99% ) ,另一基因片段与HOXA3基因序列同源 ( 99% )。HOXA3在脊椎动物中编码转录因子 ,编码调控基因表达 ,形态发生和变异的DNA结合转录因子。结论　结晶型NiS诱导转化及成瘤的 16HBE细胞基因组DNA的高度甲基化可能导致基因表达抑制 ,这可能是结晶型NiS诱导 16HBE细胞转化和成瘤的一种外遗传机制。; 赵艳丰陈家堃吴中亮雷毅雄安社娟吴根容; 关键词：DNA甲基化基因组

抑制性消减杂交技术检测反式二羟环氧苯并芘转化细胞与正常细胞基因表达差异被引量：3: 2004年; 目的　筛选 7,8 二羟 9,10 环氧苯并芘 (BPDE)转化细胞与正常细胞的基因表达差异。方法　以BPDE转化支气管上皮细胞 (16HBE)细胞为检测子 (tester) ,正常 16HBE细胞为驱动子 (driver) ,应用抑制性消减杂交方法构建cDNA消减文库 ,经 2次消减杂交和 2次PCR后 ,将巢式PCR产物插入TA载体克隆 ,随机挑选克隆进行鉴定和测序 ,并用斑点杂交法验证其同源性 ,将所得序列进行GenBank的BLAST分析。结果　发现了 7个在BPDE转化细胞中高表达的基因 ,为翻译延长因子 1α1、线粒体基因、溶解物载体家族 2 5、EphA2、酪氨酸 3 加单氧酶色氨酸 - 5 -加单氧酶活化蛋白、乳酸脱氢酶A、TRIM2 8等 ,尚有一条在GenBank的已知基因中找不到对应序列 ,在EST序列中找到全长对应序列。结论　发现的高表达基因可能在BPDE的致癌机制中起作用 ,另外 ,可能有未知基因与BPDE的恶性转化作用有关。; 安社娟陈家堃陈学敏赵艳丰刘莉莉; 关键词：基因抑制性消减杂交

反式二羟环氧苯并(a)芘相关新基因brg的全长克隆: 2006年; 背景与目的:在前期研究中发现,16HBE-C细胞表达变化的基因中有未知基因参与,因其与BPDE有关,所以命名为brg(anti-BPDErelatedgene)基因。本研究应用cDNA末端快速扩增法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增此未知基因的全长,以进行下一步的基因功能研究。材料与方法:应用cDNA末端快速扩增法(RACE技术),对3'和5'端分别设计了梯度PCR,巢式PCR等优化程序,以获得特异的产物,然后对特异产物直接测序,将测序结果进行生物信息学分析,基因拼接等获得新基因brg全长。结果:3'和5'端均成功获得特异性产物,3'RACE测序为394bp,有明显的PolyA加尾信号,有编码区的终止密码子;5'RACE测序为1017bp,有起始密码子ATG,其中197bp为3'和5'全长共有序列。将3'和5'序列拼接,结果全长1214bp,生物信息学分析brg基因阅读框1032bp,编码344个氨基酸。结论:所得结果与设计一致,说明所采用的技术路线是简便可行的,brg基因可能在反式二羟环氧苯并(a)芘的致癌机制中起重要作用。; 安社娟陈家陈华洁常薇刘莉莉赵艳丰陈学敏; 关键词：CDNA末端快速扩增基因

二羟环氧苯并芘诱导转化与翻译延长因子的关系被引量：3: 2006年; 目的探讨真核翻译延长因子1α1(eTEF1α1)基因在反式二羟环氧苯并芘致癌机制中所起的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增真核翻译延长因子1α1基因全长,插入pcDNATM3.1 D irectional TOPO表达载体,以脂质体转染介导的技术和G418细胞筛选法转染人支气管上皮细胞,构建转基因稳定表达的细胞株。用半定量RT-PCR方法分析转基因表达产物,对转基因细胞株,进行双层软琼脂试验以确定基因的恶性特性。结果成功扩增出eTEF1α1基因全长,构建出稳定表达真核翻译延长因子1α1基因的细胞株。稳定转染eTEF1α1基因的细胞株,能在双层软琼脂中形成克隆。结论真核翻译延长因子1α1基因与反式二羟环氧苯并芘的恶性转化有关。; 安社娟陈家堃常薇陈华洁刘莉莉赵艳丰陈学敏

硫化镍诱导转化人支气管上皮细胞基因组DNA甲基化的研究: 目的对结晶型硫化镍诱导转化及成瘤的人支气管上皮细胞(16HBE)基因组DNA甲基化状况进行研究,以寻找DNA甲基化异常的基因片段,并探讨镍的外遗传致癌机制。方法抽提基因组DNA后,采用限制性内切酶MseⅠ单独酶切或限制性...; 赵艳丰刘莉莉陈家堃吴中亮王敏; 文献传递

层粘连蛋白受体基因表达谱分析被引量：3: 2006年; 目的探讨层粘连蛋白受体(67LR1)基因相关的一组基因表达变化,为反式二羟环氧苯并芘致癌机制的研究提供依据。方法构建67LR1转基因表达载体,转染人支气管上皮细胞(16HBE),获得转基因67LR1的瞬时表达的细胞株。用半定量RT-PCR方法分析转基因表达产物,应用含8 064个基因点的微芯公司基因表达谱芯片CSC-GE-80与双荧光标记样品与芯片杂交和扫描、图像数据分析等一系列处理进行表达谱分析。结果成功构建出瞬时表达67LR1的细胞株。基因表达谱分析,2组相比发生了显著性表达变化的基因有295个,其中表现为上调的基因有145个,下调表达的基因有150个。在发生了显著性表达改变的基因中,比较有明显功能分类特征的包括与信号转导相关的基因,与肿瘤相关的基因,与免疫反应相关的基因以及与蛋白质合成系统相关的基因等。结论67LR1基因功能涉及到信号转导、肿瘤相关基因等方面,相关基因的表达变化具有复杂性。; 安社娟陈家堃常薇陈华洁刘莉莉赵艳丰陈学敏; 关键词：基因芯片层粘连蛋白受体

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赵艳丰

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