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高山红景天同源四倍体诱导与鉴定研究被引量：2: 2011年; 目的获得高山红景天同源四倍体无性体系。方法秋水仙素诱导种子加倍,通过多次组培再生进行嵌合体分离,采用气孔大小与密度测量、染色体计数和流式细胞学分析进行倍性鉴定。结果秋水仙素质量分数与处理时间对种子萌发率、幼苗死亡率及诱变率均有十分明显的影响,0.2%秋水仙素处理露白种子72 h的萌发率、幼苗死亡率及诱变率分别为18.2%、73.6%、68.7%;倍性变异植株气孔明显增大,气孔密度变小;正常二倍体染色体数目为2n=2x=26,四倍体染色体数为2n=4x=52,发现非整倍体的存在;倍性变异植株经3次再生纯化后获得纯合四倍体无性系,流式细胞学检测无嵌合体存在。结论秋水仙素处理高山红景天种子获得同源四倍体具有可行性。; 刘剑锋程云清刘建华钟雪陈智文; 关键词：高山红景天秋水仙素二倍体四倍体染色体

非洲紫罗兰叶片外植体再生技术体系的建立被引量：8: 2010年; 研究3种叶型的非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)组培快繁的最佳激素配比、炼苗移栽技术,以满足规模化生产的要求。以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,比较不同浓度和不同种类的生长激素对愈伤诱导、不定芽的萌发、试管苗生芽生根的影响,并比较了不同移栽方式对存活率等指标的影响。结果表明:非洲紫罗兰叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,培养4周左右,诱导率达100%,绝大多数愈伤组织上都有芽的分化。采用培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L继代1次后,每个愈伤组织上分化产生的芽可达30余个,3个品种的愈伤组织诱导、成芽能力差异不大。非洲紫罗兰品种A和C适宜的生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA,品种B适宜的生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。生根苗转入纯蛭石栽培时,用1/4MS大量与微量元素进行叶片追肥,成活率90%以上。移栽至腐殖土栽培成活率95%以上,3个月栽培后栽培苗成花。成功建立了3种叶型非洲紫罗兰组织培养快繁技术体系。; 程云清刘剑锋钟雪陈智文; 关键词：非洲紫罗兰组培快繁叶片

SARS亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD在烟草叶绿体中的高效表达被引量：1: 2014年; 叶绿体表达系统为植物源重组药用蛋白和亚基疫苗的生产提供了一个有效的途径。为验证SARS亚基疫苗在叶绿体中表达的可行性,以及为植物源SARS亚基疫苗的生产提供一套高效、低成本的技术平台,本研究将人工优化合成的SARS-CoV突刺蛋白(S蛋白)受体结合区序列RBD与载体分子CTB融合基因导入烟草叶绿体基因组中。PCR和Southern杂交分析表明,外源融合基因已整合到烟草叶绿体基因组中,并获得同质化。Western杂交分析表明,重组融合蛋白CTB-RBD在叶绿体转基因烟草中获得表达,且主要以可溶性单体形式存在。ELISA分析表明,在不同生长阶段、不同生长部位和不同时间点烟草叶片中,重组融合蛋白CTB-RBD的表达水平呈现明显的变化。重组蛋白在成熟叶片中的表达水平最高可以达到10.2%TSP。本研究通过SARS亚基疫苗RBD在烟草叶绿体中的高效表达,有望为植物源SARS亚基疫苗的生产以及SARS血清抗体的检测提供一个有效的技术平台。; 钟雪齐广勋杨静邢国杰刘剑锋杨向东; 关键词：SARS

PEG介导高山红景天原生质体融合获同源四倍体研究被引量：4: 2010年; 目的:获得高山红景天同源四倍体新材料。方法:用高山红景天愈伤组织原生质体为材料,进行了40%PEG6000介导的原生质体融合,对融合后原生质体进行了低密度、低融点琼脂包埋培养。按原生质体大小对融合原生质体进行了活体标记,建立了起源于单个原生质体的单细胞姊妹系,获得同源四倍体材料。结果:新生子细胞、中期细胞及其原生质体的直径RD与RM均与公式RD=0.793 7RM大致相符。未融合的二倍体、两原生质体融合产物直径的变化范围分别为16.7μm≤R<21.3μm,21.0μm≤R′<26.8μm,两者直径范围存在部分重叠。融合原生质体培养时,接种密度以1×104个/mL为宜,在此密度条件下植板率为20.3%,单细胞起源的姊妹系微克隆生长迅速,易于进行标记、彼此分离并继续培养;染色体计数的结果表明,二倍体、四倍体单细胞姊妹系再生植株染色体数目分别为26,52,不同节位叶片经流式细胞仪检测了DNA含量,证实没有嵌合体的存在。结论:本研究为高山红景天多倍体育种提供了科学依据。; 刘剑锋刘建华程云清钟雪陈智文; 关键词：高山红景天原生质体聚乙二醇四倍体

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钟雪