顾一心
- 作品数：59 被引量：162H指数：8
- 供职机构：中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 蛋白电泳凝胶放置时间对蛋白丰度的影响分析被引量：1
- 2014年
- 目的利用高分辨力的双向电泳技术检测蛋白电泳后凝胶中的蛋白含量随时间推移的损失情况。方法用双向电泳蛋白裂解液提取鼠疫EV菌株（无毒疫苗株）全菌蛋白并定量。取800肚gEV蛋白，平行进行两块双向电泳凝胶电泳，电泳结束后一块凝胶立刻固定并染色，另一块凝胶4℃放置8h后固定并染色，使用ImageMaster 2D Elite软件比较分析两块凝胶蛋白点数量及蛋白丰度。结果相比直接固定染色的凝胶，8h后固定染色的凝胶中蛋白点扩散丢失严重，比电泳后直接固定凝胶少346个蛋白点，且部分相邻蛋白点发生融合，含量在20～350ng的低丰度蛋白65．9％因蛋白扩散丢失。结论蛋白凝胶放置8h后大量低丰度蛋白由于扩散会丢失，并直接影响后续免疫印迹、质谱鉴定等实验结果的可靠性。
- 顾一心何利华孟凡亮张建中赵飞
- 关键词：蛋白电泳
- 不同品系养殖鸡弯曲菌感染调查被引量：2
- 2014年
- 目的了解规模化养殖鸡弯曲菌感染现状。方法随机采集北京市某规模化养殖场蛋鸡(养殖时间大于120d)和肉鸡(养殖时间小于42d)肛拭子标本,采用两种分离培养方案(80份蛋鸡和200份肉鸡标本直接经选择性培养基划线培养,150份肉鸡标本经24h增菌后采用选择性培养基划线培养)进行弯曲菌的微需氧(5%O2、10%CO2和85%N2)培养。从肉鸡标本中随机选取50份,提取病原菌DNA,进行弯曲菌荧光定量PCR检测,并对相同培养条件下生长菌落进行质谱鉴定。结果 80份蛋鸡标本中分离到24株空肠弯曲菌,阳性率为30%;350份肉鸡标本未检测到弯曲菌。通过质谱菌落鉴定,205份标本检测到奇异变形杆菌,检出率为58.6%;145份标本检测到大肠埃希菌,检出率为41.4%。50份肉鸡粪便标本弯曲菌荧光定量PCR检测结果均为阴性,与分离培养结果一致。结论北京市规模化养殖蛋鸡弯曲菌感染率较高,饲养时间较短的肉鸡未发现弯曲菌感染。
- 刘夏阳闫革彬顾一心张慧芳何利华肖迪刘红莹张建中张茂俊
- 关键词：肉鸡弯曲菌荧光定量PCR
- 斯氏弓形杆菌基于基因组序列遗传特征分析被引量：2
- 2021年
- 目的获得斯氏弓形杆菌的遗传特征,并对其耐药基因及毒力相关基因进行预测分析。方法对本实验室分离培养的8株斯氏弓形杆菌进行基因组测序并从NCBI和PATRIC数据库中下载全部已完成基因组测序的15株斯氏弓形杆菌的全基因组序列,应用生物信息学软件对23株不同地域、不同宿主来源的斯氏弓形杆菌进行遗传特征分析。结果23株斯氏弓形杆菌中仅3株菌携带耐药基因,且均为β-内酰胺类抗生素耐药基因。所有菌株均含有与免疫逃避、侵袭及运动等相关的毒力基因。与其他菌种弓形杆菌常见的10种毒力基因比对分析发现,本研究中所有斯氏弓形杆菌菌株均含有ciaB、tlyA、cj1349、pldA和mviN基因,2株菌(CNAS12-1和F28)含有iroE基因,均不携带另外4种毒力基因。21.7%(5/23)的菌株包含Ⅵ型分泌系统(T6SS)基因簇,且其与弯曲菌属内的T6SS存在基因组成及排列的差异。结论斯氏弓形杆菌有较高的遗传多样性,部分菌株可能有潜在的耐药和致病特征。
- 周贵兰王园园顾一心李颖鞠长燕王佳奇王海瑞陈晓丽段永翔张茂俊
- 关键词：耐药基因毒力基因
- 细菌核酸提取方法对荧光定量PCR检测差异分析被引量：11
- 2019年
- 目的观察和分析常见食源性病原菌及粪便中病原菌DNA提取方法对荧光定量PCR检测结果的影响。方法以弯曲菌、副溶血弧菌和沙门菌为模型菌株,分别采用水煮法、细胞裂解法、试剂盒法(过滤法和磁珠法)提取病原菌DNA并进行荧光定量PCR检测并对试验结果作差异比较分析;应用细胞裂解法和过滤法分别提取24份随机抽样的粪便标本DNA,针对细菌16SrDNA特异序列进行荧光定量PCR检测,比较2种DNA提取方法对于病原菌检测结果的差异性。结果在不同菌种、不同浓度的条件下,细胞裂解法提取细菌纯培养物DNA的Ct值均低于其他三种方法(P<0.05),水煮法、过滤法、磁珠法的Ct值之间的比较结果呈现多样性。细胞裂解法提取粪便标本的病原DNA为模板进行细菌16S rDNA特异序列的荧光定量PCR检测结果阳性18份,阴性6份,试剂盒过滤法提取24份粪便标本检测结果皆为阳性。结论在对纯培养的3种食源性病原菌进行荧光定量PCR鉴定时,为节省时间和成本可应用细胞裂解法或水煮法提取模板DNA,与2种商业试剂盒(过滤法和磁珠法)相比效果较好;对粪便标本病原菌进行荧光定量PCR检测时,试剂盒提取粪便标本病原DNA的扩增效果优于细胞裂解法。
- 闻子钰梁昊顾一心鞠长燕马艳萍段永翔张茂俊
- 关键词：荧光定量PCR
- 用于检测肺炎支原体的靶序列及检测试剂盒
- 本发明提供了用于检测肺炎支原体的靶序列及检测试剂盒。本发明首先通过对肺炎支原体基因测序和比对，筛选得到用于检测肺炎支原体的多拷贝重复序列基因，其序列如SEQ？ID？NO.1所示，并设计了检测其的实时荧光定量PCR引物和探...
- 赵飞张建中何利华孟凡亮顾一心陶晓霞肖迪张慧芳胡源刘立雍
- 检测耐红霉素弯曲菌的试剂盒
- 本发明提供了检测耐红霉素弯曲菌的试剂盒。通过对分离的弯曲菌进行红霉素耐药分析，对MIC≥16μg/ml的菌株进行23SrDNA测序，获得红霉素耐药菌株23SrDNA基因的突变位点和红霉素耐药相关核糖体RNA甲基化酶基因e...
- 张茂俊梁昊张艾煜顾一心张建中
- 文献传递
- 346份临床呼吸道标本中肺炎支原体感染情况研究被引量：7
- 2014年
- 目的了解肺炎支原体菌株培养特点及其引起疾病的临床特点,提高对肺炎支原体感染疾病的认识,为国内临床肺炎支原体的诊治提供数据支持。方法对346份临床咽拭子标本进行肺炎支原体分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测,了解临床标本中肺炎支原体分离培养特点,对不同年龄段和不同类型临床标本中肺炎支原体感染率比对分析。结果 346份标本肺炎支原体的分离培养和real-time PCR检测阳性率分别为28.6%和32.1%;其中205例社区获得性肺炎病例中肺炎支原体感染率为52.2%,141例上呼吸道感染病例标本中肺炎支原体检测阳性率仅为4.2%,两组感染率差异存在统计学意义。肺炎支原体人群感染率有随年龄段增加而降低的趋势,但感染率在<14岁的儿童组中与40岁以下的成年人组中差异无统计学意义。结论本研究表明肺炎支原体是引起社区获得性肺炎的重要病原,但在上呼吸道感染病例中少见;相比儿童病例而言,成人病例中肺炎支原体感染率也非常高,需引起临床更多关注。
- 何利华顾一心孟凡亮张建中赵飞
- 关键词：肺炎支原体社区获得性肺炎上呼吸道感染年龄组
- 利用基因芯片技术分析空肠弯曲菌的遗传特征被引量：1
- 2016年
- 目的为分析我国弯曲菌遗传特征,本研究根据已发表多株弯曲菌的全基因组测序特征及比对结果自行设计基因芯片,利用芯片对我国不同宿主来源菌株进行遗传特异性分析。方法根据前期基因组水平比对分析的结果,利用Combimatrix tiling Custom ArrayTM90K芯片,设计DNA芯片。芯片包含已测序菌株ICDCCJ07001、269.97、NCTC11168、81-176、81-116和RM1221共3384个CDS的探针序列,以及空肠弯曲菌耐药及致病性相关2个质粒共80个CDS的探针序列,与脂寡糖的合成相关基因簇16种共219个CDS的探针序列、荚膜多糖合成相关基因簇7种共160个CDS的所有序列。对我国不同宿主来源27株分离菌株提取DNA,利用芯片进行杂交,获得杂交信息并分析不同菌株CDS分布特征分析及聚类特点。结果中国菌株的主要变异区域主要存在于与脂寡糖、荚膜多糖合成相关的基因簇、鞭毛修饰相关的基因簇、DNA限制/修饰相关的基因簇以及空肠弯曲菌Mu样噬菌体基因簇。基因组水平不同来源菌株CDS分布的聚类结果没有发现显著的宿主归因特点,但GBS相关菌株脂寡糖合成相关基因组成具有共性特征。结论通过验证以及与过去研究的比较,本次研究中的基因芯片技术结果准确可信,本研究所用基因芯片在分析空肠弯曲菌基因多态性方面具有很好的优势,可用于弯曲菌遗传特征和重要毒力因子的分析和检测。
- 梁昊刘红莹尤元海顾一心张艾煜王敏何利华孟凡亮张建中张茂俊
- 关键词：空肠弯曲菌基因芯片
- 空肠弯曲菌多重聚合酶链反应基因鉴定及其毒力相关基因分析被引量：24
- 2007年
- 目的建立空肠弯曲菌、结肠弯曲菌多重聚合酶链反应（m-PCR）鉴定方法,并对菌株毒力相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB、cdtC的分布进行初步分析。方法利用m-PCR的方法对经过传统生物化学方法鉴定的65株弯曲菌进行鉴定,并通过空肠弯曲菌特异基因hipO、结肠弯曲菌glyA基因特异片段的PCR扩增对鉴定的结果进一步验证;利用特异引物PCR方法初步分析其毒力、毒素相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB和cdtC的分布。结果m-PCR扩增结果发现65株不同来源的弯曲菌,42株为空肠弯曲菌,23株为结肠弯曲菌。hipO、glyA基因PCR扩增结果与m-PCR扩增结果一致。16．9%菌株PCR鉴定结果与传统的生物化学鉴定结果不一致。100%（65/ 65）菌株cadF、flaA基因阳性,并且PCR扩增片段大小一致。virB的阳性率为10．8%（7/65）,其中空肠弯曲菌阳性率11．9%（5/42）,结肠弯曲菌阳性率为8．7%（2/23）。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌cdtA的阳性率分别为100%（42/42）和78%（18/23）;空肠弯曲菌cdtB扩增的的阳性率为97．6%（41/42）。而23株结肠弯曲菌扩增结果均为阴性;空肠弯曲菌、结肠弯曲菌cdtC的阳性率皆为100%,但PCR扩增产物大小不一致,空肠弯曲菌为555 bp,结肠弯曲菌约为465 bp。结论m-PCR的方法可以有效的对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌进行属内分型。中国菌株细胞溶涨毒素基因簇cdt基因的特征与文献报道国外菌株存在差异。
- 张茂俊顾一心冉陆张建中
- 关键词：空肠弯曲菌多重聚合酶链反应毒力
- TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立敏感、特异的TaqMan-MGB探针实时荧光定量一聚合酶链反应（real-timePCR）快速检测方法，为临床标本中肺炎支原体快速检测提供技术支持。方法选取肺炎支原体重复序列RepMP23中保守区域设计、合成特异性扩增引物和TaqMan—MGB探针，建立并优化real—timePCtt检测方法。对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价，并与已报道的肺炎支原体荧光PCR方法进行比较。结果本研究建立的TaqMan—MGB探针荧光PCR方法对肺炎支原体的检测限为0．2cfu，比普通TaqManreal—timePCR检测限（3—5cfu）提高了一个数量级。其检测标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（R^2=0．999）。用该方法扩增23种呼吸道常见病原菌染色体及人类染色体，结果均为阴性，特异度为100％。结论TaqMan—MGB探针real—timePCR方法可快速、灵敏、特异地检测肺炎支原体，有很好的应用前景与价值。
- 顾一心陶晓霞刘立雍张建中赵飞
- 关键词：肺炎支原体TAQMAN-MGB探针
