马敏
- 作品数：16 被引量：27H指数：4
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- 应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品细菌污染被引量：7
- 2007年
- 目的应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品中细菌的探讨。方法选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏杆菌,用改良的Chelex-100法抽提细菌基因组DNA,进行荧光定量PCR检测。并应用过滤法去除反应体系中潜在的细菌及其基因组DNA污染。结果针对16srRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的特异性和灵敏度,与人类淋巴细胞及病毒等的基因组无交叉反应。在金黄色葡萄球菌检测中,应用过滤法后最低含菌量组与阴性对照组Ct值有极显著差异(P<0.001)。该方法对金黄色葡萄球菌的最低检出量为0.3CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著差异(P<0.01),在大肠埃希氏杆菌中该法可检测出0.1CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著性差异(P<0.01)。结论改良Chelex-100法抽提细菌基因组及后续的荧光定量PCR分析用于检测血小板制品中的细菌污染,检测实验缩短到3-4h,操作简单,灵敏性高,特异性好,为在临床标本大规模检测中的应用提供理论基础和实验数据。
- 马敏刘晓颖徐忠王迅黄宇闻莫琴林俊杰邱颖捷钱开诚
- 关键词：血小板制品实时荧光定量PCR细菌污染
- 细菌基因组DNA抽提液及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种血液和血小板制品中细菌基因组DNA的提取液和制备方法及使用方法。本发明所述的细菌基因组DNA抽提液由chelex-100，吐温，NP-40，SDS，溶葡萄球菌素，破壁酶，蛋白酶K和水组成。本发明可有效用于...
- 刘晓颖马敏王迅郑岚钱开诚
- 文献传递
- 优化血小板制品中细菌基因组抽提方法被引量：6
- 2007年
- 目的:建立裂解液加热煮沸法抽提细菌基因组DNA。方法:选取大肠埃希菌、金葡菌分别应用五种不同方法抽提细菌基因组,Tagman荧光定量PCR检测抽提产物。并在两种细菌中验证chelex-100抽提方法的灵敏度。结果:对相同浓度的大肠埃希菌、金葡菌样品进行抽提时,chelex-100加热煮沸法抽提所得样品在后续荧光定量PCR检测中CT值均为最小。应用该方法对两种细菌进行抽提鉴定时,灵敏度可达到每毫升个位菌数。结论:chelex-100裂解液加热煮沸法抽提细菌基因组DNA操作简便、省时、经济,为血液标本细菌基因检测在临床上的大规模应用奠定基础。
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- 关键词：细菌基因组血小板
- 16S rDNA实时荧光定量PCR法与全自动培养法在血小板细菌污染检测中的应用比较被引量：1
- 2008年
- 目的比较16S rDNA实时荧光定量PCR法与全自动培养法在血小板制品细菌污染检测中的灵敏度和特异性,评价2种方法的应用前景。方法将血小板制品污染中常见的6种细菌用浓缩血小板悬液进行稀释,并选取浓度为102、101、100的菌悬液,分别用实时荧光定量PCR法和全自动培养法进行检测。结果用16S rDNA实时荧光定量PCR法对6株细菌检测,其灵敏度和特异性均为100%,Κ=1.000。用全自动培养仪对6株细菌检测,其特异性均为100%;灵敏度分别为:金黄色葡萄球菌需氧瓶95.5%,Κ=0.886,厌氧瓶90.9%,Κ=0.787;表皮葡萄球菌及大肠杆菌2种培养瓶均为83.3%,Κ=0.667;蜡样芽孢杆菌2种培养瓶均为86.7%,Κ=0.684;铜绿假单胞杆菌需氧瓶度为100%,Κ=1.000,厌氧瓶为44.4%,Κ=0.286;痤疮丙酸杆菌需氧瓶为16.7%,Κ=0.105,厌氧瓶为91.7%,Κ=0.886。结论实时荧光定量PCR法检测血小板制品中的细菌污染,灵敏度高,特异性好,且省时、经济,能应用于临床上血液样本的大规模筛查。
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- 关键词：血小板实时荧光定量PCRRDNA
- 定量PCR检测体系及其制备方法
- 本发明涉及血液制品中细菌保守区域检测体系。公开了一种针对细菌保守区域的定量PCR检测体系，由引物、探针、dNTP、Mg<Sup>2+</Sup>、PCR反应液、DNA聚合酶和水组成。本发明还进一步公开了上述检测体系的制备...
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- 文献传递
- 裂解液加热煮沸法在血清HBV DNA抽提中的应用
- 2007年
- 目的建立裂解液加热煮沸法抽提血液HBV DNA的方法。方法选取浓度分别为106、105、104、103copies/ml的HBV DNA阳性血清,采用5种方法抽提HBV DNA,并用SYBR GreenI荧光定量PCR检测抽提产物。结果在HBV DNA浓度为106、105、104copies/ml时5种抽提法(异硫氰酸胍加热煮沸/盐酸胍加热煮沸/kit/SDS加热煮沸/chelex-100加热煮沸)均能得到阳性结果,而在HBV DNA为低浓度103copies/ml时,只有异硫氰酸胍加热煮沸/盐酸胍加热煮沸/chelex-100加热煮沸能得到阳性结果。结论chelex-100裂解液加热煮沸抽提HBV DNA操作简便、省时、经济,为血液标本HBV基因检测在临床上的大规模应用奠定基础。
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- 关键词：血清乙型肝炎病毒
- 细菌基因组DNA抽提液及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种血液和血小板制品中细菌基因组DNA的提取液和制备方法及使用方法。本发明所述的细菌基因组DNA抽提液由chelex－100，吐温，NP－40，SDS，溶葡萄球菌素，破壁酶，蛋白酶K和水组成。本发明可有效用于...
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- 文献传递
- PCK论——中美科学教师学科教学知识比较研究
- 在全球教师专业化背景下,学科教学知识(Pedagogical Content Knowledge简称PCK)是一个最能体现教师专业性的学术建构,但是目前有关PCK的系统性研究并不多,特别是在跨文化比较领域。本研究是一项以...
- 马敏
- 关键词：教师知识学科教学知识科学教育
- 血小板制品细菌污染检测方法的研究进展被引量：6
- 2007年
- 马敏王迅
- 关键词：血液制品血小板细菌检测
- 荧光定量PCR技术在细菌L型检测中的应用
- 2007年
- 目的建立检测细菌L型的荧光定量PCR方法。方法应用药敏纸片法诱导金黄色葡萄球菌为L型,并用T ag-m an荧光定量PCR方法检测L型菌的存在。结果应用该方法可以检测到L型菌的存在,琼脂糖凝胶电泳分析也观察到阳性扩增条带。结论应用荧光定量PCR分析检测L型菌的存在操作简便、省时,为提高血液制品的安全性提供保证。
- 刘晓颖马敏王迅
- 关键词：荧光定量PCRL型菌
