仇旭升
- 作品数：162 被引量：260H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 鸡CMPK2的原核表达及其抗H9N2禽流感病毒的初步研究
- 2022年
- 为研究鸡CMPK2基因的遗传进化特点和生物学功能,本研究以鸡成纤维细胞系(DF-1)为模板,通过RT-PCR扩增鸡CMPK2基因完整阅读框(ORF)(762 bp),利用MEGA7软件对CMPK2氨基酸序列进行同源性和遗传进化分析。并构建了重组质粒p3xFLAG-CMV-14-CMPK2和重组原核表达载体pET-28a-CMPK2,利用原核载体表达CMPK2目的蛋白后制备小鼠抗鸡CMPK2的多克隆抗体,并采用western blot检测其反应性。构建的CMPK2氨基酸序列进化树结果显示,鸡CMPK2与爬行类动物CMPK2遗传关系较近,而与哺乳动物CMPK2氨基酸序列的遗传距离相对较远。为研究鸡CMPK2是否具有抗病毒功能,利用H9N2禽流感病毒(AIV)感染DF-1细胞,感染后6 h、12 h时分别采用荧光定量PCR及western blot方法检测鸡CMPK2基因转录水平和蛋白表达情况,结果显示H9N2 AIV感染能够引起鸡CMPK2 mRNA转录水平和蛋白表达水平的明显上调。进一步利用DF-1细胞过表达CMPK2及利用特异性siRNA干扰CMPK2的表达后,分别采用荧光定量PCR及western blot检测鸡CMPK2蛋白对H9N2 AIV复制的影响。荧光定量PCR以及western blot结果显示,过表达鸡CMPK2蛋白可以抑制H9N2 AIV的增殖。而下调鸡CMPK2蛋白的表达后H9N2 AIV增殖水平显著上升(P<0.01)。上述结果首次证实,鸡CMPK2是H9N2 AIV复制的负调控因子,能够抑制AIV的复制。本研究丰富了AIV与抗病毒宿主因子的研究内容,也可为抗禽类病毒感染药物靶点的研究提供重要参考。
- 李鑫刘炜玮谭磊谭磊孙英杰宋翠萍廖瑛丁铲仇旭升
- 关键词：遗传进化病毒复制
- 新城疫病毒调控宿主YB-1蛋白的初步研究
- 张世伟仇旭升丁铲周昌娈孙英杰谭磊宋翠萍孟春春廖瑛茅翔王桂军
- 鸡淋巴信号活化分子CD150基因的扩增、表达和氨基酸序列分析
- 2021年
- CD150蛋白是副黏病毒的重要受体,能够促进病毒与宿主细胞结合并感染。本研究旨在克隆鸡CD150基因后进行原核表达,并对获得的氨基酸序列进行详细分析,为后续基因功能研究奠定基础。从原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中扩增得到CD150 CDS序列,将其克隆入pMD19-T载体中进行测序鉴定,将其在pET-28b原核表达载体中表达,并制备多克隆抗体,最后,通过生物信息学软件对CD150进行氨基酸序列分析。结果显示:成功克隆大小为999 bp的鸡CD150基因;鸡CD150蛋白以包涵体形式表达;所制备的多克隆抗体能够特异性结合鸡淋巴细胞表面的CD150蛋白;二级结构中α-螺旋占25.83%,β-折叠占23.42%,无规则卷曲占50.75%;跨膜区分析可知,CD150蛋白包括胞外区、胞内区和跨膜区;三级结构以β-折叠为主,包括V和C2两个结构域,不同物种V结构域中存在7个完全保守的氨基酸位点。本研究成功克隆、表达了鸡CD150蛋白,并制备多克隆抗体,为鸡CD150蛋白生物学功能研究检测及其在鸡组织中的表达和分布提供数据支持。
- 方文秀谭磊孙英杰宋翠萍刘炜玮廖瑛丁铲仇旭升吴艳涛
- 关键词：基因克隆原核表达多克隆抗体氨基酸序列分析
- 3株表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒的免疫效力比较
- 本文旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后，在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A...
- 王彦红陈素娟刘武杰仇旭升董丽彭大新刘秀梵
- 关键词：重组鸡痘病毒H5亚型AIV免疫效力
- 文献传递
- 一种1型鸭病毒性肝炎RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法
- 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种1型鸭病毒性肝炎RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法。本发明公开了1型鸭病毒性肝炎RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于其包含2对引物，它们的核酸序列如SEQIDNO.1-4所示。本...
- 丁铲宋翠萍于圣青韩先干胡青海仇旭升谭磊
- 文献传递
- ClassⅠ新城疫病毒强毒株融合蛋白的表达时相分析被引量：1
- 2010年
- 根据ClassⅠ新城疫病毒分离株9a5b编码序列,设计特异性引物扩增融合蛋白(F)基因截短片段(199～1 500 nt),利用原核表达获得重组蛋白,切胶免疫Balb/c小鼠,制备特异性多抗血清,利用制得的血清进行F蛋白表达时相分析。结果表明:NDV 9a5b病毒按5M.O.I(multiplicity of infection,多重感染复数)感染量接种DF1单层细胞,经IFA检测,在感染6 h时,F蛋白开始出现,主要分布于细胞浆内;12～16 h胞浆中的F蛋白含量逐渐增多,形成包涵体,开始在细胞膜上分布;当病毒感染24h后,F蛋白在细胞膜上形成明显的膜周染色;至感染36h后,出现多个细胞融合的包涵体,细胞已基本崩解。此时,F蛋白也散在分布于包涵体中。这为深入开展F蛋白与该病毒的毒力演化机制研究工作奠定了基础。
- 孙英杰陈鸿军仇旭升詹媛于洋宋翠萍于圣青丁铲
- 关键词：CLASSI融合蛋白
- 鸡TIGAR基因真核表达质粒的构建及其抗凋亡功能评价被引量：1
- 2019年
- 【背景】TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子(TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR)是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和去除活性氧(Reactive oxygen species,ROS)并降低由活性氧诱发的细胞凋亡水平。【目的】构建鸡源TIGAR基因的真核表达质粒,并检测TIGAR基因在DF1细胞中的抗凋亡作用,为建立稳定表达鸡TIGAR基因的细胞系做准备。【方法】根据GenBank(登录号:XM_417232.6)中预测基因设计引物,利用RT-PCR的方法从SPF鸡脾脏中扩增鸡TIGAR基因,将扩增产物克隆至载体(Flag-CMV14)后送公司测序验证;随后构建进化树对鸡TIGAR基因与其他哺乳动物及水生动物的TIGAR基因进行同源性分析。将重组质粒(Flag-TIGAR)转染入DF1细胞24 h后,使用新城疫病毒诱导细胞凋亡,利用Western Blot检测重组质粒表达情况以及Poly ADP-Ribose Polymerase(PARP)裂解情况。此外还将重组质粒(Flag-TIGAR)转染入DF1细胞,并于收样前2 h使用Staurosporine刺激细胞发生凋亡,分别在转染后24、48 h收集样品,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】RT-PCR扩增TIGAR基因,在843 bp处出现目的条带与预测相符,构建的TIGAR真核表达质粒(Flag-TIGAR)经测序,结果显示其序列与GenBank上预测的基本一致。Western Blot结果显示在30 h、36 h收集的样品中PARP均被裂解且转染重组质粒(Flag-TIGAR)的实验组与未转染质粒(MOCK)组或转染空载体(Flag-CMV14)组的样品相比,裂解的PARP表达量明显降低,且差异极显著(P<0.01)。流式结果显示:24 h检测转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为11%(早期凋亡7.8%,晚期凋亡3.2%),而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率仅为4%(早期凋亡3.7%,晚期凋亡0.3%),转染Flag-CMV14的早期凋亡率和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR组,且差异显著(P<0.05)。48 h转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为20.3%(早期凋亡14.3%,晚期凋亡6.0%),而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率为6.4%(早期凋亡4.8%,晚
- 栗永华车路平仇旭升谭磊孙英杰刘炜炜宋翠萍廖瑛丁铲王金泉孟春春
- 关键词：真核表达质粒新城疫病毒抗凋亡
- 检测犬猫钩端螺旋体的荧光定量PCR方法及其引物和检测试剂盒
- 本发明提供检测犬猫钩端螺旋体的荧光定量PCR方法及其引物和检测试剂盒，其采用16s rRNA基因序列为设计引物，上游引物：5’-ACGAAAGCGTGGGTAGTG-3’；下游引物：5’-GCGGTCTACTTAATCC...
- 丁铲陈鸿军于圣青宋翠萍仇旭升胡青海韩先干
- 新城疫病毒利用网格蛋白和小窝蛋白受体途径感染鸡骨髓来源树突状细胞
- 2023年
- 新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径感染细胞,且其入胞途径可能具有细胞类型特异性。本研究以鸡骨髓源树突状细胞(chBM-DCs)为模型,探究NDV入侵该细胞的内吞途径。首先利用CPZ(CME抑制剂)和Dynasore(dynamin1/2抑制剂)预处理DCs,然后感染NDV强毒株Herts/33,通过Western blot和IFA检测NDV NP的胞内表达水平变化。药物预处理组NP的表达水平均显著降低,表明NDV能够通过网格蛋白介导的内吞途径进入DCs。进一步利用甲基-β-环糊精(MβCD)预处理DCs,然后感染Herts/33,通过Western blot和IFA检测NDV NP的胞内表达水平变化。结果显示药物预处理组NP的表达水平显著降低,表明NDV能够通过小窝蛋白介导的内吞途径进入DCs。本研究为全面阐明NDV感染宿主细胞的途径提供了理论基础。
- 杨晓凤仇旭升孙英杰宋翠萍孟春春刘炜玮廖瑛丁铲谭磊
- 关键词：新城疫病毒
- 一种鸭疫里默氏杆菌LAMP检测试剂盒及其检测方法
- 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种鸭疫里默氏杆菌LAMP检测试剂盒及其检测方法。本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌LAMP检测试剂盒，其特征在于其包含3对引物，它们的核酸序列如SEQ ID NO.1-6所示。本发明所述...
- 于圣青韩先干丁铲胡青海陈鸿军仇旭升宋翠萍
- 文献传递
