何芳萍
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- HIV包膜蛋白在酵母系统中的表达、纯化及其应用研究
- 获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所引起的一种严重的传染性疾病。由于HIV的高度变异，尚缺乏有效的预防性疫苗，目前血清学诊断和社...
- 何芳萍
- 关键词：人免疫缺陷病毒包膜蛋白酿酒酵母毕赤酵母
- 文献传递
- HIV-1 gp160截短蛋白在酿酒酵母中的表达被引量：1
- 2011年
- 利用PCR技术从pNL-43上扩增出截短的编码gp160蛋白的基因片断,克隆到酿酒酵母表达载体YEpFLAG-1上构建表达质粒YEp-gp160Δ12,电转化到酿酒酵母中,用缺色氨酸的SC培养基筛选出阳性克隆,重组子经YP培养基诱导后进行全菌蛋白的SDS-PAGE和Western Blotting分析,筛选出高表达菌株.纯化后的重组gp160Δ12(rgp160Δ12)蛋白经ELISA鉴定显示具有良好的生物活性.
- 杨坤宇李少伟张毅李庶甘何芳萍林庆山周正张军夏宁邵
- 关键词：酿酒酵母
- 抗H5亚型禽流感病毒单链抗体在毕赤酵母中的分泌型表达和生物活性分析
- 2011年
- 在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研究基础上,本实验通过基因工程构建含有13D4单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达和纯化。经过竞争法和血凝抑制检测其活性,表明获得的单链抗体具有与原始鼠源抗体相近的反应活性和相同的识别表位。H5N1广谱中和单抗13D4的单链抗体的成功构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。
- 何芳萍林庆山李少伟魏旻希陈振钦罗文新陈毅歆张军夏宁邵
- 关键词：高致病性禽流感病毒血凝抑制毕赤酵母
- 重组毕赤酵母高密度发酵表达H5N1禽流感病毒糖蛋白被引量：4
- 2009年
- 在10L发酵罐中,对高致病性禽流感病毒H5N1糖蛋白HA1在重组毕赤酵母中的表达发酵工艺进行了研究。通过分批补料培养方法探讨不同培养温度、诱导温度、补料方式、微量元素等因素对菌体的生长以及重组蛋白表达和活性的影响。结果表明,菌种培养和诱导温度均为25oC时,菌体的生长、分泌表达量和与广谱中和抗体的反应活性较好;微量元素是影响重组HA1蛋白生物活性的重要因素;通过优化高密度发酵工艺,H5N1病毒糖蛋白HA1在发酵罐中的表达量比摇瓶培养提高10.5倍,达到约120mg/L,为大规模制备高致病性禽流感病毒的HA1蛋白奠定了基础。
- 杨坤宇何芳萍李少伟张佳鸿林庆山陈振钦李仲艺张军夏宁邵
- 关键词：毕赤酵母高致病性禽流感病毒H5N1HA1
- 毕赤酵母分泌表达嵌合HEV表位的HBcAg颗粒
- 2009年
- 在毕赤酵母分泌表达嵌合有HEV受体相关表位12A10的HBcAg蛋白,经甲醇诱导后的培养液上清通过切向流浓缩、更换缓冲液后,进行疏水层析纯化.CsCl等密度梯度离心测得分泌的重组颗粒的密度为1.32 g/mL.透射电镜观察显示,纯化的重组颗粒为均一的直径30 nm左右的空心颗粒.小鼠免疫实验表明,纯化颗粒免疫8周后鼠血清中的特异性12A10抗体滴度可达到1.6×105,并且重组颗粒较好地呈递了HEV受体相关的非免疫优势表位.本文的结果为毕赤酵母胞外分泌表达其它大尺度的重组蛋白颗粒提供了参考,为研究携带表位多肽的疫苗载体提供了范例.
- 章建楠李少伟杨坤宇何芳萍唐明顾颖王颖彬杜海莲张军夏宁邵
- 关键词：乙肝病毒核心抗原毕赤酵母分泌表达
