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傅欣: 作品数：44 被引量：279H指数：8; 供职机构：北京大学第三医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家科技攻关计划更多>>; 相关领域：医药卫生文化科学更多>>

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IL-1和TNF-α拮抗剂治疗骨关节炎实验研究被引量：28: 2006年; 目的:观察腺病毒载体介导的白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)和可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体(sTNF-RI)基因转移对兔骨关节炎的治疗作用,并探讨IL-1和TNF-α在骨关节炎发生中的作用。方法:构建Ad-IL-1Ra和Ad-sTNF-RI腺病毒载体,注射到兔骨性关节炎膝关节腔内。关节内注射腺病毒后第3天和第7天,分别用1ml生理盐水灌洗膝关节,抽取关节腔灌注液采用ELISA分析外源基因的表达。第7天处死动物,取膝关节股骨内侧髁软骨和滑膜常规石蜡切片,软骨HE染色、甲苯胺蓝染色和滑膜组织HE染色检查病理改变,并进行软骨组织学评分。结果:膝关节内注射IL-1Ra能明显抑制关节软骨的破坏,但对滑膜炎无明显治疗作用;单独sTNF-RI基因治疗对关节软骨的破坏和滑膜炎均无明显的作用。结论:IL-1Ra对骨关节炎关节软骨有明显的保护作用,而sTNF-RI对骨关节炎无明显的治疗作用,这提示在骨关节炎的发生中IL-1可能起主要的作用,因而抑制IL-1的作用对骨关节炎的治疗更为有效。; 王海军于长隆岸裕幸村口笃毛泽斌傅欣张继英张智清; 关键词：骨性关节炎 IL-1RA 腺病毒载体

基因治疗和软骨组织工程治疗关节软骨损伤实验研究: 于长隆敖英芳陈连旭林霖王海军闫辉傅欣余家阔王健全张继英; 关节软骨损伤被认为是运动医学和骨科领域的难治性损伤，目前尚无理想的治疗方法，找到一种针对软骨疾患的根本性治疗措施极其重要，可以挽救众多患者的关节。近年来基因治疗和组织工程受到越来越多的重视，本课题主要采用基因治疗和组织工...; 关键词：; 关键词：基因治疗软骨组织工程关节软骨损伤

骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Runx2的表观遗传学修饰被引量：20: 2014年; 利用骨髓来源的干细胞(bone marrow derived stem cells,BMSCs)作为骨组织工程种子细胞来修复骨缺损已成为研究热点.转录因子是影响骨生长的重要因素,其中Runx2(Runt-related transcription factor 2)是参与成骨细胞分化与骨形成的重要转录因子之一.近年来,表观遗传学在发育生物学及干细胞分化过程中的调控机制倍受重视.而Runx2是否受到表观遗传学调控尚未见报道.本研究采用real-time RT-PCR检测Runx2的mRNA表达,ChIP(chromatin immunoprecipitation)结合real-time RT-PCR检测Runx2基因启动子区甲基化水平及组蛋白修饰水平的变化.结果显示,BMSCs在成骨诱导分化中Runx2的mRNA表达在3 d达到高峰,之后下降;同时在BMSCs成骨分化第3 d,与转录激活相关的组蛋白修饰乙酰化H3K9和三甲基化H3K4均升高;而与转录抑制相关的组蛋白修饰三甲基化H3K9降低.另外检测还显示,Runx2启动子区域乙酰化H3K9和三甲基化H3K4募集增加,而三甲基化H3K9募集降低.Runx2启动子区域DNA甲基化修饰程度降低.上述结果表明,BMSCs在成骨分化过程中Runx2的表达上调,其基因启动子区域呈现促进基因表达的表观遗传修饰变化.由此推断,表观遗传调控在BMSCs成骨分化过程中具有一定作用,它将为提高BMSCs的成骨分化效率提供线索.; 胡晓青张辛代岭辉朱敬先陈文庆傅欣敖英芳; 关键词：骨髓间充质干细胞组蛋白修饰 DNA甲基化 RUNX2

逆转录病毒载体PLXRN介导的人IL-1Ra在关节滑膜细胞中的表达被引量：5: 2005年; 目的:建立逆转录病毒介导的人IL-1Ra体外表达体系。方法:应用DNA重组技术,将人IL-1RacDNA片段重组到逆转录病毒质粒pLXRN中,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染原代关节滑膜细胞,用ELISA检测IL-1Ra表达。结果:重组pLXRN-IL-1Ra质粒,经酶切鉴定正确。重组逆转录病毒pLXRN-IL-1Ra滴度可达5.5×104CFU/ml,感染原代关节滑膜细胞后能稳定表达。结论:逆转录病毒能介导人IL-1Ra在关节滑膜细胞中的稳定表达,为下一步开展基因治疗运动创伤性骨关节炎奠定了基础。; 张晓玲于长隆毛泽斌傅欣张继英; 关键词：IL-1RA 逆转录病毒载体基因转移创伤性骨关节炎

骨形态发生蛋白4、脱钙骨基质和切断跟腱诱导的异位骨化动物模型的研究被引量：6: 2008年; 目的:建立骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)、脱钙骨基质和切断跟腱诱导的异位骨化动物模型,并初步探讨其形成机制,为异位骨化的研究奠定实验基础。方法:制备动物模型:(1)构建BMP4重组腺病毒,实验组裸鼠的一侧腓肠肌内注入50μl1×107pfu BMP4重组腺病毒液,对照组腓肠肌内注入50μl1×107pfu空病毒液。4周后行X线和组织学检查。(2)无菌条件下,股后外侧入路,将50mg脱钙骨基质植入裸鼠股后肌群内,4周后行X线和组织学检查。(3)20只小鼠于跟腱中点行跟腱切断术,10周后行X线和组织学检查。结果:X线和组织学检查显示4周后,注射BMP4重组腺病毒的动物均出现异位骨,注射空病毒组未见异位骨形成。4周后,植入脱钙骨基质的动物均出现异位骨。10周后,行跟腱切断术的动物均在跟腱部位出现异位骨。结论:BMP4、脱钙骨基质和切断跟腱可有效诱导异位骨化,结果稳定可靠。; 林霖陈连旭张辛王海军魏学磊侯宇傅欣张继英于长隆; 关键词：异位骨化动物模型骨形态发生蛋白4 脱钙骨基质

氨基葡萄糖和硫酸软骨素联合用药对兔骨关节炎治疗作用实验研究被引量：18: 2008年; 目的:观察氨基葡萄糖(GS)和硫酸软骨素(CS)对兔骨关节炎不同时期关节软骨退变和关节液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,初步探讨GS和CS对兔骨关节炎治疗作用的机制。方法:45只成年新西兰大白兔,随机分为5组,分别为低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组、阴性对照组,每组9只(18个膝关节)。采用内侧副韧带切断术和内侧半月板切除术建立骨性关节炎模型,术后次日即进行动物的药物灌胃,每日1次,每组各取3只动物分别于灌胃1周、2周、3周后取材。阳性对照组灌胃用等剂量的蒸馏水。采用墨汁染色的方法大体观察软骨损伤情况,使用光镜观察关节软骨组织学的变化;采用酶联免疫吸附法测定关节液中IL-1β和TNF-α含量。结果:墨汁染色法和软骨组织学检查结果显示1周和2周后,低、中、高剂量组与阳性对照组之间均有显著性差异(P<0.05),低、中、高剂量组之间无显著性差异(P>0.05);3周后,低、中、高剂量组与阳性对照组之间均有显著性差异(P<0.05),中、高剂量组之间无显著性差异(P>0.05),低、高剂量组之间有显著性差异(P<0.05)。术后1、2、3周,各治疗组关节液中炎性因子IL-1β和TNF-α含量均显著低于阳性对照组,但显著高于阴性对照组。结论:不同剂量的GS和CS对兔骨关节炎不同时期软骨损伤均有一定的保护和治疗作用,减少关节液中炎性因子IL-1β和TNF-α的表达,可以较好地延缓OA的进展。; 傅欣林霖魏学磊侯宇张继英王锦程于长隆; 关键词：氨基葡萄糖硫酸软骨素骨关节炎白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子Α

Runx2特异性siRNA筛选和功能鉴定被引量：2: 2009年; 目的:筛选Runx2特异性siRNA,优化反应条件,抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化,探讨异位骨化基因治疗的新思路。方法:使用Ambion公司提供的网上工具,设计5条针对小鼠Runx2的mRNA的模板,用体外转录合成法合成5条siRNA;采用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质两个水平,在培养的MC3T3-E1成骨前体细胞中筛选有明显抑制作用的siRNA,并优化反应条件。将筛选出的siRNA转染成骨细胞,在不同时间点检测成骨细胞相关基因I型胶原、骨桥蛋白、骨钙蛋白、骨涎蛋白mRNA的表达,采用碱性磷酸酶活性分析检测碱性磷酸酶活性的变化。结果:在合成的5条siRNA中,siRNA1657-1677对Runx2的抑制效果最明显,最佳反应条件是:浓度80nM、脂质体/siRNA为1∶1、转染时间为72小时。采用RNAi技术抑制Runx2的表达可以抑制成骨相关基因如I型胶原、碱性磷酸酶、骨桥蛋白和骨钙蛋白等的表达,阻止成骨细胞分化。结论:Runx2特异性siRNA可以抑制成骨细胞分化,可用于异位骨化基因治疗的实验研究。; 林霖陈连旭王海军侯宇薛涛傅欣于长隆; 关键词：RUNX2 SIRNA 成骨细胞异位骨化

应用植入转染血小板源性生长因子基因的骨髓间充质干细胞的灭活同种异体跟腱重建兔前交叉韧带效果的实验研究被引量：1: 2007年; 目的:探讨应用植入转染血小板源性生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)基因的骨髓间充质干细胞的灭活同种异体跟腱重建兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)的效果。方法:取新西兰白兔自体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),培养后感染稳定表达PDGF-BB逆转录病毒,种植于经γ射线照射灭活的同种异体跟腱上,进行前交叉韧带重建。实验分对照组(移植物为单纯灭活跟腱)、细胞组(移植物为种植MSCs的灭活的跟腱)和基因组(移植物为转染基因的MSCs种植于灭活的跟腱)三组。术后3周、6周、12周,分别进行组织学及免疫组织化学染色,观察关节腔内移植物的变化过程及力学拉伸试验观察韧带的生物力学改变。结果:术后3周移植物表面已经覆盖大量从受体来的炎性细胞,对照组细胞量明显少于细胞组和基因组。细胞由移植物表面逐渐进入深部,基因组中随大量细胞进入的同时还伴有血管的增生,形成典型的肉芽组织。而对照组和细胞组血管增生不明显。手术后6周,对照组、细胞组和基因组都显现细胞到达移植物深部,甲苯胺蓝染色显示细胞组和基因组移植物的异染阳性,但对照组为阴性。手术后12周,对照组显现移植物内有大量的成纤维细胞,甲苯胺蓝染色轻度异染;而细胞组和基因组细胞量减少,显现类软骨性状,细胞排列与正常前交叉韧带接近。胶原分型的免疫组化染色三组均显示Ⅰ型胶原为主的移植物在植入后经过Ⅲ型胶原替代,后由Ⅲ型胶原为主逐步过渡到重新以Ⅰ型胶原为主。这个转换过程基因组最快,对照组最慢。手术后3、6和12周移植物的刚度和最大载荷与移植前相比均有明显下降,以3周下降最明显。术后6周,移植物刚度和最大载荷开始上升,细胞组和基因组上升明显,与对照组有显著性差异。结论:转染PDGF-BB基因的自体骨髓间充质干细胞有促�; 李峰陈连旭张继英傅欣贾弘褆于长隆; 关键词：骨髓间充质干细胞同种异体跟腱前交叉韧带

核因子-κBp65蛋白在大鼠创伤性骨关节炎中的表达被引量：4: 2007年; 目的:观察实验性创伤性骨关节炎大鼠软骨和滑膜组织中NF-κBp65的表达。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为对照组(n=12)和造模组(n=12),造模组采用切断膝关节内侧副韧带和部分切除内侧半月板建立大鼠创伤性骨关节炎模型。两周后处死大鼠,采用蛋白质免疫印迹法(WesternBlot)和免疫组织化学染色法检测大鼠关节软骨和滑膜内的NF-κBp65表达。结果:与对照组相比,造模组关节软骨和滑膜中的NF-κBp65表达显著增高。结论:NF-κBp65可能在创伤性关节炎的发生过程中发挥作用。; 陈连旭于长隆王海军林霖魏学磊傅欣张继英; 关键词：创伤性骨关节炎 NF-ΚBP65 免疫组织化学染色

异种异体半月板移植延缓关节软骨退行性变的研究被引量：3: 2006年; 目的:探讨异种异体半月板移植对延缓关节软骨退变的作用。方法:对15只成年新西兰兔的后肢左、右膝均进行内侧半月板全切。在15只兔的左膝进行猪半月板组织成型后所得的异种异体内侧半月板移植,以其已切除内侧半月板的右膝作为对照。分别于术后6周、12周、24周择期处死动物,观察各组兔膝关节软骨的大体病理表现、组织病理Mankin评分改变,并用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原单克隆抗体免疫组织化学染色法观察关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的表达情况。结果:兔内侧半月板全切组膝内侧胫骨平台和内侧股骨髁软骨破坏严重,有大量骨赘形成,呈骨性关节炎表现。异种异体半月板移植在短期内对关节软骨具有明显保护作用,但随着术后24周移植半月板被破坏,关节软骨出现退变,但与同期的半月板切除膝相比,关节软骨退变较轻。结论:异种异体半月板移植短期内对关节软骨有保护作用;异种异体半月板移植可延缓关节软骨退行性变。; 谢兴张继英傅欣余家阔敖英芳于长隆; 关键词：半月板移植半月板切除关节软骨骨性关节炎

傅欣

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