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重组人酸性成纤维细胞生长因子滴眼液的制备及其稳定性被引量：1: 2008年; 目的制备重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)滴眼液,并进行稳定性检测。方法在rhaFGF中添加复方保护剂,并以透明质酸钠作为保湿剂,制备rhaFGF滴眼液,对其进行鉴定和体外药效学检测,并进行稳定性试验。结果制备的3批滴眼液各项质量指标均合格,可促进碱烧伤家兔角膜细胞和鸡胚绒毛膜血管增殖。在4℃保存12个月,-20℃保存18个月,(25±2)℃保存6个月,滴眼液各项质量指标与0月基本一致。结论制备的rhaFGF滴眼液稳定性良好,可促进损伤角膜细胞修复。; 冯秀萍曲红艳田海山张弛李校堃; 关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子滴眼液角膜修复稳定性

重组人胸腺素β16的表达、纯化及其生物学活性研究: 2009年; 目的:人工合成人胸腺素β16(Thymosin β16,Tβ16)的DNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pET3c中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、层析纯化、酶切后获得了Tβ16表达产物,并研究其体内外生物学活性。方法:将构建的重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白的表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。表达的融合蛋白经超声破碎、离子交换和金属亲和层析进行纯化后,用His-SUMO蛋白酶酶切,再经金属亲和层析和Superdex30凝胶层析,获得胸腺素β16。对胸腺素β16进行体内外生物学活性研究。结果:重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白为可溶性表达,Tβ16比活性为5.3×105U/mg,在体外可促进BALB/c3T3细胞增殖,促进兔角膜细胞的增殖,促进血管内皮细胞的增殖和迁移以及促进鸡胚绒毛膜血管的增殖;在体内可促进家兔碱烧伤皮肤愈合。结论:成功构建了重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白的大肠杆菌表达载体,获得了重组Tβ16蛋白,其具有很好的修复作用,为进一步Tβ16产业化开发奠定了基础。; 冯秀萍马威杜柏榕闫东梅朱迅; 关键词：纯化创伤修复

SUMO蛋白酶的发酵和纯化工艺的研究被引量：4: 2009年; 目前,小分子肽多需要进行融合表达,虽然有GST标签等表达体系,但是表达产物切割时仍留有多余氨基酸,影响小分子肽的功能;SUMO蛋白酶对SUMO融合表达系统表达的重组蛋白进行切割时没有多余氨基酸残留,因此成为蛋白切割工具的热点。利用基因工程技术构建重组His-Ulp1/pET3c/BL21(DE3)工程菌株,用摇瓶优化表达条件,摸索高密度发酵工艺和不同层析纯化工艺条件。结果表明,经1.0mmol/L的IPTG30℃诱导表达6h,表达效果最好。罐发酵后菌体SDS-PAGE分析表达量可达24.39%,通过CMSepharose Fast Flow阳离子交换一步层析可获得纯度大于98%的SUMO蛋白酶,每升发酵液可获得355mg的SUMO蛋白酶纯品。Western blot分析表明,UlP1能与6×His抗体产生免疫反应。为日后大规模产业化生产奠定了基础。; 冯秀萍杜柏榕闫东梅赵向峰朱迅; 关键词：发酵优化离子交换层析

重组碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的研究: 碱性成纤维细胞生长因子[basic Fibroblast Growth Factor,bFGF]是一种促进细胞生长的多肽因子,具有广泛的生物学作用,可应用于烧伤创面的治疗。目前,国内上市的bFGF 产品,都是水溶液剂（喷...; 冯秀萍; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂发酵保护剂纯化; 文献传递

一种具有促创伤修复作用的新药——重组人胸腺素β16: 研究背景:胸腺素是一类广泛存在于人体及动物体内的小分子多肽。由40-45个氨基酸组成,家族成员间的序列高度保守,分子量大多在5kDa左右。根据其等电点差异,胸腺素可被分为α型、β型和γ型。其中,β型家族成员的作用及作用机...; 冯秀萍马威杜柏榕朱迅; 文献传递

重组人胸腺素β16的表达、纯化和胸腺素β16的应用研究: Tβ16作为胸腺素β家族成员之一,可通过抗感染和免疫调节作用、刺激成纤维细胞的增殖、促进上皮细胞角化、刺激内皮细胞移动以及促进血管形成等作用来促进创伤修复。本课题应用基因工程重组技术,设计构建含SUMO-Tβ16融合基...; 冯秀萍; 关键词：创伤修复 SUMO

重组人胸腺素β16工程菌株的遗传稳定性研究被引量：2: 2009年; 目的研究重组人胸腺素β16(Tβ16)工程菌株的遗传稳定性,为重组人Tβ16产业化提供依据。方法利用在有选择压力(AMP+)的条件下,对含有Tβ16-pET表达质粒的工程菌在LB固体斜面上连续传代100代,每隔20代取样进行菌体形态、革兰染色、提取质粒、酶切和进行表达量检测。结果第100代菌株与原始菌株在各项检测指标上一致,无显著差别。结论Tβ16-pET质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中有很好的遗传稳定性,为重组人Tβ16的应用奠定了基础。; 冯秀萍于乐洋闫东梅杜柏榕朱迅

重组碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的制备被引量：3: 2009年; 目的制备重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)凝胶剂。方法以卡波姆940、甘油、1,2丙二醇为基质,加入复方保护剂(肝素钠、人血白蛋白、甘露醇和HP-β-CD),制成bFGF凝胶剂,观察25和4℃保存的稳定性,并进行家兔局部刺激试验、急性毒性试验、促烧伤创面愈合试验。结果bFGF凝胶剂在25℃保存18个月、4℃保存24个月,效价维持在原效价的80%以上;局部用药未见皮肤刺激反应和急性毒性反应;促家兔烧伤创面愈合的效果明显优于水溶液剂。结论制备的bFGF凝胶剂安全有效,具有缓释作用,稳定性良好,具有广阔的临床应用前景。; 杨洪存曲悦冯秀萍; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂创伤

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冯秀萍