刘明杰
- 作品数：20 被引量：44H指数：4
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省学术和技术带头人培养资金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嗜肺军团菌热休克蛋白60基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2005年
- 目的构建嗜肺军团菌热休克蛋白60(HSP60)基因的真核表达载体pcDNA3.1/HSP60,并对其进行鉴定。方法应用聚合酶链式反应(PCR)技术从嗜肺军团菌扩增得到HSP60基因,并将其克隆至载体pUC18进行序列测定。将重组质粒pUC18/LpHSP60中的目的基因亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组子pcDNA3.1/HSP60,通过限制性内切酶酶切及PCR进行鉴定。结果克隆的LpHSP60基因序列与GenBank公布的一致性为98%,限制性内切酶酶切及PCR分析表明HSP60基因已成功插入pcDNA3.1中。结论成功构建了LpHSP60基因的真核表达载体,为进一步研究军团菌病HSP60基因DNA疫苗奠定了基础。
- 廖涛陈建平刘明杰
- 关键词：嗜肺军团菌热休克蛋白60真核表达载体
- 嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达被引量：2
- 2006年
- 目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGhtpA,重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后,转化宿主菌大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了291bp完整的htpA基因,构建了原核表达重组质粒pGhtpA,并检测到约36kDa的GST-htpA融合蛋白质表达条带。结论成功克隆了嗜肺军团菌htpA基因并使HtpA蛋白在原核表达系统中得到了有效的表达,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。
- 刘明杰陈建平廖涛王涛陈宪田玉张雷张莉
- 关键词：嗜肺军团菌基因克隆基因表达
- 嗜肺军团菌双价亚单位DNA疫苗的初步研究
- 本文以军团菌双价DNA疫苗为研究方向，以军团菌mompS基因和flaA基因为研究对象，首次成功构建了军团菌的2种双价DNA疫苗：完全融合的mompS/flaA基因双价DNA疫苗和通过1段柔性链连接的mompS/linke...
- 陈建平张雷刘明杰张莉
- 关键词：嗜肺军团菌DNA疫苗免疫原性免疫保护性
- 文献传递
- 霍乱弧菌ctxB基因真核重组质粒的构建及表达
- 2006年
- 目的构建霍乱孤菌ctxB基因真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中进行表达。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-ctxB上切下ctxB基因,导入真核表达载体pcDNA3·1(+),重组子经限制性酶切分析、PCR鉴定正确后,命名为pcDNA3·1-ctxB。用脂质体法将重组质粒pcDNA3·1-ctxB转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法对pcDNA3·1-ctxB的瞬时表达产物进行鉴定。结果约380bp的ctxB被克隆到pcDNA3·1(+)真核表达载体中,经测序无误后,用阳离子脂质体转染的方法,检测到重组质粒pcDNA3·1-ctxB在NIH3T3细胞的胞浆和胞膜上得到了表达。结论ctxB真核表达的成功构建及表达为进一步从分子水平研究霍乱肠毒素B亚单位的免疫原性及其作为佐剂的应用价值提供研究基础。
- 张莉陈建平张雷刘明杰王涛
- 关键词：霍乱孤菌真核表达
- 军团菌外膜蛋白抗原基因的克隆并在原核系统中表达被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆军团菌外膜蛋白抗原基因 omp M,构建重组质粒 p LPM,并在原核系统中表达。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从军团菌基因组 DNA中扩增得到 omp M基因 ,导入载体 p UC1 8,在 JM1 0 9中表达 ,并用SDS-PAGE进行鉴定。结果 扩增出 773 bp的 omp M基因 ;构建重组质粒 p LPM;表达出 2 5 k Da的蛋白质。结论 成功扩增军团菌 omp M基因 ,构建重组质粒 p LPM,并在原核系统中得到了表达。
- 芦殿香陈建平张雷王涛刘明杰田玉陈宪
- 关键词：军团菌PCR基因表达
- 引入CpG基序的嗜肺军团菌lvgA基因真核表达质粒的构建及其在NIH3T3细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建了引入CpG基序的lvgA基因的真核表达质粒pclvgA/CpG,并在NIH3T3细胞中表达。方法采用PCR方法将特定CpG基序作为核酸佐剂构建于嗜肺军团菌lvgA基因侧翼,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his(+),构建重组质粒pclvgA/CpG,体外阳离子脂质体转染法转染NIH3T3细胞。结果通过测序证实真核表达质粒pclvgA/CpG中lvgA/CpG克隆片段长为657bp,推测lvgA基因编码蛋白大小约为27.7Ku,lvgA基因及两侧翼原设计CpG基序完整扩出,测序序列与设计序列完全符合。用免疫荧光检测重组质粒在NIH3T3细胞中瞬时表达。结论本实验成功构建了嗜肺军团菌pclvgA/CpG真核表达质粒,并在NIH3T3细胞检测到其瞬时表达信号。
- 景彩霞杨加周刘明杰徐佳楠关望许颖陈建平
- 关键词：嗜肺军团菌CPG基序NIH3T3细胞
- 成都及周边地区5种动物隐孢子虫感染的调查被引量：16
- 2002年
- 目的调查成都及周边地区的猪、羊、鸡、兔等畜禽及猕猴隐孢子虫感染情况。方法用改良抗酸染色法检查。结果共采集 2 49份新鲜粪便标本 ,检查的每种动物中均发现有隐孢子虫感染 ,而且感染率较高 ,分别为89.7%、65 .3 %、41 .2 %、88.2 %及 5 5 .0 %。通过显微镜下观察初步发现不同粪源的隐孢子虫在形态学上的差异 ,可为进一步研究不同种株的差异 ,以及其系统发育关系打下基础。结论成都及周边地区
- 廖宛军陈建平陈盛文张雷刘明杰
- 关键词：动物隐孢子虫感染
- 嗜肺军团菌热休克蛋白60基因在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的探讨大肠杆菌中表达嗜肺军团菌的热休克蛋白60(HSP60)的表达。方法利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增嗜肺军团菌HSP60基因,将其定向插入载体pUC18构建重组原核表达质粒,重组质粒转化到大肠杆菌JM109后IPTG诱导表达,并对其表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果重组质粒在大肠杆菌中成功表达,可被抗军团菌抗血清识别。结论HSP60基因可在大肠杆菌中表达,并有免疫原性。
- 廖涛陈建平王涛刘明杰张建国
- 关键词：嗜肺军团菌热休克蛋白60
- mompS-linker-flaA融合基因原核表达载体的构建及诱导表达被引量：4
- 2006年
- 目的在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-FlaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Westernblotting进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达。结论嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础。
- 张雷陈建平张莉王涛刘明杰田玉
- 嗜肺军团菌热休克蛋白60基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2005年
- 目的获取嗜肺军团菌热休克蛋白60(HSP60)基因,并将它克隆到质粒pUC18中进行核苷酸序列分析。方法应用聚合酶链式反应(PCR)技术从嗜肺军团菌扩增得到HSP60基因,将其定向插入载体pUC18并转化大肠杆菌JM109,用限制性酶切及PCR对重组质粒进行鉴定。用双脱氧链末端终止法进行DNA序列测定,并与GenBank中报道的HSP60基因进行比较。结果成功克隆了约1647bp的HSP60基因片段,测序结果表明,所克隆的HSP60基因序列与GenBank公布的一致性为98%。结论获得了序列正确的HSP60基因,为其重组表达及相关研究奠定了基础。
- 廖涛陈建平刘明杰
- 关键词：嗜肺军团菌热休克蛋白克隆
