刘滨磊
- 作品数：24 被引量：36H指数：4
- 供职机构：湖北工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学自动化与计算机技术石油与天然气工程更多>>
- 表达单纯疱疹病毒受体HVEM的黑色素瘤B16-ova-HVEM细胞系的构建及成瘤后oHSV2治疗效果初探被引量：1
- 2016年
- 目的构建可被单纯疱疹病毒感染的新型细胞系B16-ova-HVEM,体外验证目的基因的表达并初步探究其成瘤后,应用Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV2)的治疗效果。方法构建表达单纯疱疹病毒受体(HVEM)的质粒载体,脂质体转染B16-ova细胞,嘌呤霉素筛选表达HVEM的阳性克隆。体外验证后进行体内检测,B16-ova-HVEM荷瘤C57BL/6小鼠,成瘤后分为两组,每组5只小鼠,给予oHSV2治疗为oHSV2治疗组,荷瘤未治疗的小鼠为对照组。治疗后测量肿瘤大小,观察小鼠生存期;流式细胞术检测两组小鼠外周血中CD4^+、CD8^+T细胞和髓系来源的抑制性细胞(MDSC)比例变化。结果质粒DNA测序和酶切鉴定结果均显示成功构建含HVEM的质粒;荧光显微镜下可观察到筛选后细胞发绿色荧光;流式细胞术检测筛选后细胞GFP阳性率为98.3%;RT-PCR验证结果显示筛选后细胞含有目的基因HVEM;oHSV2在感染复数(MOI)为0.1、0.5和1的情况下均能明显感染筛选出的细胞;动物实验显示,oHSV2体内治疗后抑瘤效果显著(P﹤0.001);流式检测结果显示oHSV2治疗后小鼠外周血中CD4^+、CD8^+T细胞比例明显高于对照组(P﹤0.01),而MDSC比例明显低于对照组(P﹤0.01)。结论成功构建B16-ova-HVEM细胞系,其既可被OT-1小鼠T细胞特异性识别又可被单纯疱疹病毒感染,为肿瘤特异性免疫治疗和溶瘤病毒联合治疗的研究奠定基础。
- 刘玲玲张文刘滨磊肖汀
- 关键词：HVEM
- 构建单纯疱疹病毒易感的鼠黑色素瘤细胞系B16R^HSV
- 2012年
- 目的构建溶瘤性单纯疱疹病毒（oHSV）易感的C57／BL小鼠黑色素瘤细胞系B16R^HSV，同时仍保留其在小鼠体内诱导肿瘤生长的能力。方法以人黑色素瘤细胞系A375的基因组DNA为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增出疱疹病毒侵入介体（HVEM），将扩增产物克隆到pGEM—TEasy载体中并测序。将测序正确的HVEM基因克隆入pcDNA3质粒载体，产生pcDNA3-HVEM。以pcDNA3-HVEM质粒载体转染C57／BL小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10，使用含有G418的完全培养基筛选可能的阳性克隆，并通过免疫磁珠筛选出表达HVEM的细胞，命名为B16R^HSV。用表达绿色荧光蛋白（GFP）的oHSV（oHSV^GFP）与B16R^HSV细胞体外共培养，观察细胞病变效应和GFP的表达情况。分别以相同剂量的B16-F10和B16R^HSV细胞接种于C57／BL小鼠右侧背部皮下，观察这两种细胞诱导小鼠体内形成肿瘤的能力。结果在荧光显微镜下可观察到B16R^HSV细胞表达绿色荧光并出现细胞病变效应，证明B16R””细胞能够被oHSV感染并在细胞内繁殖，而其亲代细胞B16-F10则不能。B16R^HSV和B16-FI0细胞接种于小鼠5d后，两组小鼠均可观察到肿瘤生长，且肿瘤生长情况基本一致。用oHSV^GFP治疗两种细胞的荷瘤鼠，仅在B16R^HSV细胞荷瘤的小鼠体内显示出明显的溶瘤效应。结论构建的B16R^HSV是对oHSV易感、保持体内成瘤性的小鼠黑色素瘤细胞系。
- 庄秀芬周爱萍施桂兰韩香萍李洁张郁张友会张叔人刘滨磊
- 关键词：单纯疱疹病毒属黑色素瘤小鼠
- 阳离子聚合物PBAE 447的合成与靶向转染肿瘤细胞系的初步研究
- 目的 聚(β-氨基酯)(PBAEs)是一类线性的阳离子聚合物,其能与带负电DNA 结合,形成颗粒状复合物.在细胞中可以被水解,且具有合成条件简单,无需溶剂,催化剂,无副产物等优点.本研究拟通过4-氨基-1-丁醇和1,4-...
- 胡翰王润杨汪洋刘滨磊
- 关键词：阳离子聚合物报告基因细胞毒性
- 溶瘤病毒抗肿瘤的研究进展被引量：3
- 2019年
- 溶瘤病毒是天然的或经人工改造的能选择性在肿瘤组织中复制,从而杀伤肿瘤细胞,但对正常组织无杀伤作用的一类病毒。除直接杀伤肿瘤细胞外,溶瘤病毒可参与到抗肿瘤免疫的多个阶段,发挥其抗肿瘤活性。2015年,T-Vec(talimogene laherparepvec)成功在美国和欧洲获批标志着溶瘤病毒药物的研发走向成熟。T-Vec上市后,国内外大量的临床试验集中展开,带动了整个溶瘤病毒药物产业的发展,溶瘤病毒药物将成为未来最具有潜力和应用前景的治疗手段之一。本文主要关注目前溶瘤病毒在国内外临床试验的现状及对未来前景的展望。
- 陈莹刘滨磊
- 关键词：溶瘤病毒抗肿瘤免疫
- 溶瘤病毒治疗与肿瘤微环境及机体免疫的关系被引量：1
- 2018年
- 溶瘤病毒（OV）与肿瘤微环境及机体免疫系统间的关系对于抗肿瘤治疗效果至关重要。OV的抗瘤机制比较复杂，涉及了直接的细胞毒作用、肿瘤微环境免疫原性的改变、肿瘤血管的影响及诱导体内系统性的抗肿瘤免疫反应，继而杀伤已感染及未感染的肿瘤细胞，达到持续全身性的治疗效果。
- 曾贝贝张文刘滨磊刘尚梅
- 关键词：溶瘤病毒肿瘤微环境免疫疗法
- The antitumor effects of a novel oncolytic HSV2
- <正>Oncolytic viruses are promising treatments for many kinds of solid tumors.In this study,we constructed a no...
- 张文赵倩张友会李洁张郁董英刘尚梅刘滨磊
- 文献传递
- 重组Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒纯化工艺的建立被引量：1
- 2018年
- 目的建立重组Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simple virus typeⅡ,o HSV2)OH2纯化工艺,制备高纯度的病毒。方法采用不同粗滤材质[PDH4囊式过滤器、Bio20囊式过滤器、Ultipor GF U6-40、PP材质滤膜(聚丙烯膜)和CA材质滤膜(醋酸纤维膜)]澄清过滤后,使用不同的层析柱(Mustang Q、Sartobind Q囊式离子交换柱和Capto^(TM) Core 700)进行纯化,并根据确定的纯化工艺,进一步放大层析柱体积。依据病毒滴度的变化,选择合适的纯化工艺条件。结果 PP及CA材质滤膜过滤病毒液后滴度变化较小,二者对病毒吸附较低;Mustang Q、Sartobind Q囊式离子交换柱纯化OH2病毒时收率最高为13%,而Capto^(TM) Core 700在AKTA仪上纯化高滴度的病毒液时几乎不损失病毒;使用Capto^(TM) Core 700进行柱体积放大后,柱床直径为26 mm时,纯化后病毒的滴度及收率较理想。结论使用CA膜过滤细胞裂解液后,采用Capto^(TM) Core 700进行柱层析,可制备高纯度的OH2。
- 吴振张紫怡汪洋胡翰石晓太毛泽勇方志正刘滨磊
- 关键词：纯化CORE
- 新Ⅱ型单纯疱疹溶瘤病毒的构建以及其功能研究
- <正>近年来,关于溶瘤病毒治疗肿瘤的研究已经有了突飞猛进的发展。在美国已经有多项研究进入了2期或3期临床试验。溶瘤病毒(oncolytic virus)是一类可以选择性在肿瘤细胞中复制繁殖,并最终造成肿瘤细胞的破坏死亡,...
- 赵倩张文刘尚梅刘滨磊
- 文献传递
- 新型溶瘤病毒oHSV2^hGM-CSF的构建及其抗肿瘤作用被引量：11
- 2012年
- 目的构建表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（hGM-CSF）的2型溶瘤单纯疱疹病毒（oHSV2^hGM-CSF），初步验证其体外溶瘤效果及其对小鼠B16R黑色素瘤模型的体内疗效。方法采用PCR、分子克隆及同源重组技术，从HG52野生病毒株的基因组中剔除ICP34．5和ICP47基因，并插入hGM．CSF表达序列，构建oHSV2^hGM-CSF。将HeLa、Eca．109和PG等16种肿瘤细胞分别接种到24孔板，用1型溶瘤单纯疱疹病毒（oHSV2^hGM-CSF）或oHSV2^hGM-CSF”（感染复数=1）感染24、48h后，显微镜下观察细胞病变。以表达HSV感染受体的C57BL／6小鼠黑色素瘤细胞B16R为动物模型，当肿瘤生长至7-8mm’时，瘤内分别注射2．3×10^6PFU的oHSV2^hGM-CSF和oHSV2^hGM-CSF，共3次，每次间隔3d，同时测量肿瘤大小，并观察生存期。结果PCR检测和DNA序列分析结果证实，各目的基因已被剔除，hGM-CSF表达盒插入到ICP34．5的基因位点。oHSV2^hGM-CSF和oHSV2^hGM-CSF感染肿瘤细胞24h后，即能观察到细胞病变，且溶瘤谱较广，oHSV2^hGM-CSF感染的肿瘤细胞合胞体现象多于oHSV2^hGM-CSF感染者；感染48h后，oHSV2^hGM-CSF对HeLa、HepG2、SK-Mel-28、B16R、U87-MG细胞的溶瘤效果优于oHSV2^hGM-CSF。动物实验显示，肿瘤接种后第15天，PBS组、oHSV2^hGM-CSF’治疗组和oHSV2^hGM-CSF。”治疗组小鼠的肿瘤体积分别为（374．74-128．24）mm’、（128．23±45．32）mm。和（10．06±5．10）mm3，oHSV2^hGM-CSF明显延缓了荷瘤小鼠肿瘤的生长。PBS组小鼠在接种B16R细胞22d后全部死亡；oHSV2^hGM-CSF治疗组和oHSV2^hGM-CSF治疗组小鼠在接种B16R细胞110d时，存活率分别为60％和80％（P〉0．05）。与PBS组相比，oHSV2^hGM-CSF治疗组和oHSV2^hGM-CSF治疗组小鼠的生存期明显延长（P〈0．01）。结论oHSV2^hGM-CSF对人肿瘤细胞溶瘤谱较广，对荷B16R黑色素瘤瘤内注射有较好的抗肿瘤神府目．右掂砰的开学前景．
- 施桂兰庄秀芬韩香萍李洁张郁张叔人刘滨磊
- 关键词：溶瘤病毒疱疹病毒2型
- The antitumor effects of a novel oncolytic HSV2
- Oncolytic viruses are promising treatments for many kinds of solid tumors.In this study, we constructed a nove...
- 张文赵倩张友会李洁张郁董英刘尚梅刘滨磊
