刘逸尘
- 作品数：27 被引量：63H指数：5
- 供职机构：天津师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal)的重组表达及活性分析
- 2011年
- Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂可以通过精确调控丝氨酸蛋白酶的活力,在生物体的防御应答等众多生物过程中发挥重要作用。以前期克隆的中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal,GenBank注册号为DQ318856)为基础,对其功能结构域进行序列比对和进化分析;组织表达分析结果表明,该基因在血细胞、鳃和淋巴器官等组织中高水平表达,而在眼柄、神经和肌肉中无表达;利用原核表达系统对该基因成熟肽区域成功进行了重组表达,纯化后的目的蛋白最终得率为0.4 g/L培养液;活性分析结果显示,复性后的rFc-Kazal对鳗弧菌、金黄色葡萄球菌、杀鲑气单胞菌、苏云金芽孢杆菌有明显的抑菌作用。
- 黄明刘逸尘张亦陈孙妍孙金生
- 关键词：中国明对虾先天免疫抑菌活性
- 凡纳滨对虾泛素交联酶E2基因的克隆及表达分析被引量：2
- 2014年
- 首先在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)转录组测序的基础上,应用RT-PCR方法获得了凡纳滨对虾泛素交联酶E2(UE2)基因的开放阅读框序列。该序列长为447 bp,编码148个氨基酸,理论相对分子量为16.84 kD,等电点为4.90。同源性比对和系统进化分析显示,不同物种的UE2基因具有较高的同源性,其中凡纳滨对虾与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的同源性最高并聚为一支。半定量RT-PCR分析表明,UE2基因在所检测的组织中均有表达;实时定量PCR分析表明,UE2基因在肝胰腺和肠中的表达量最高,在心脏、鳃、胃和肌肉组织中的表达量略低,在血淋巴中的表达量最低。原核表达分析结果显示,PCR?T7/NT-Topo TA-UE2表达载体在1.0 mmol/L IPTG、37℃诱导3 h条件下可获得纯度较高的分子量约17 kD的蛋白。利用亲和层析的方法将蛋白进行纯化用以制备抗体。研究结果将为深入研究UE2基因在对虾白斑综合症病毒侵染过程中的作用机制奠定基础。
- 李传香薛淑霞刘逸尘耿绪云孙金生
- 关键词：凡纳滨对虾原核表达
- 凡纳滨对虾信号转导及转录激活因子(Lv-STAT)基因的克隆及表达特征分析被引量：2
- 2013年
- 信号传导及转录激活因子(STAT)是生物体内重要信号通路JAK/STAT的关键组分,在机体免疫、生长、发育等方面起到重要作用。实验从凡纳滨对虾血细胞中克隆获得了STAT基因的全长cDNA序列(Lv-STAT,GenBank accession number:KC779541),其ORF区全长2 373 bp,编码790个氨基酸,预测的分子量为90.68 ku,等电点为5.91。利用SMART在线软件分析表明,该基因编码的蛋白主要结构域由STAT_int、STAT-α、STAT-β和SH2 domain 4部分组成,但不具有信号肽结构。将Lv-STAT与来源于其它物种的STAT进行氨基酸多序列比对后发现,该基因家族中的关键位点在Lv-STAT中同样保守。系统发生分析结果显示,Lv-STAT与斑节对虾、中国明对虾的STAT亲缘关系最近。在组织表达模式分析基础上进一步研究了该基因应答WSSV感染的表达变化特征,发现在感染后早期(0.5、1和3 h),该基因在血细胞中均呈显著上调表达趋势,上述研究表明该基因在一定程度上参与了凡纳滨对虾体内由WSSV引发的先天免疫应答过程。
- 张铃刘逸尘张亦陈孙妍耿绪云孙金生
- 关键词：凡纳滨对虾STAT先天免疫
- 钙激活钾通道在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血淋巴细胞免疫中的作用研究被引量：1
- 2013年
- 采用膜片钳技术解析了中华绒螯蟹血淋巴细胞表达的大电导钙激活钾通道(BKCa),研究了中华绒螯蟹BKCa对血淋巴细胞吞噬和杀菌作用的影响,并探讨了其机制。结果表明,当Ca2+浓度在0.3—3.0μmol/L范围时,中华绒螯蟹血淋巴细胞表达的钙激活钾通道的开放表现出明显的钙依赖活性;培养液中游离Ca2+的添加显著增强了血淋巴细胞的杀菌能力和呼吸爆发活性,但对其吞噬率和吞噬指数的影响不显著;在6mmol/L[Ca2+]浓度条件下,加入不同浓度的KCa阻断剂四乙胺(Tetraethylammonium,TEA)后,血淋巴细胞的杀菌能力和呼吸爆发活性均显著降低,但其吞噬率和吞噬指数并未受到影响。这提示钙激活钾通道可能通过间接调节细胞内的钙离子浓度而在血淋巴细胞杀菌过程中发挥重要作用。
- 张亦陈高雪微孙妍耿绪云刘逸尘孙金生
- 关键词：中华绒螯蟹血淋巴细胞钙激活钾通道杀菌
- 中华绒螯蟹蜕皮激素受体基因(Ers-EcR)的克隆和组织表达分析被引量：5
- 2014年
- 蜕皮激素受体(ecdysteroid receptor,EcR)介导调控甲壳动物蜕皮生长、附肢再生等重要生命活动。为了解EcR在人工控制甲壳动物的繁殖和生长中的作用,采用RACE方法结合同源克隆技术,首次从中华绒螯蟹Y-器官中克隆得到蜕皮激素受体基因全长cDNA序列(Ers-EcR,登录号:KF736985),并进行了结构解析和组织表达分析。结果发现,Ers-EcR编码基因全长2 176 bp,开放阅读框为1 638 bp,编码545个氨基酸,具有DNA结合域(DBD)和配体结合域(LBD)等典型的核受体超家族结构域,但不具有信号肽结构。其中,DBD含有8个保守的Cys残基,可以形成2个锌指结构(C156-C159-C173-C176、C192-C198-C208-C211),是典型的DBD特征。多重序列比对分析表明,Ers-EcR氨基酸序列与拳手招潮蟹同源性最高,达到91%。荧光定量PCR结果显示成体中华绒螯蟹ErsEcR基因在Y-器官和肌肉组织中表达量最高,在血液、肠道、卵巢、眼柄、心脏和肝胰腺中有一定表达,在鳃、胸神经节和精巢表达量较低。这表明Ers-EcR基因在中华绒螯蟹各组织器官中的表达不具有典型的特异性,提示Ers-EcR基因可能参与体内多种生命活动的调控。
- 宫磊张亦陈孙妍刘逸尘耿绪云孙金生
- 关键词：中华绒螯蟹克隆
- 中国明对虾和中华绒螯蟹EST的Blast2GO注释及其在免疫基因分布研究中的应用被引量：1
- 2014年
- 以dbEST数据库中公布的中国明对虾和中华绒螯蟹的EST序列作为数据源,利用CAP3对其进行聚类拼接,采用Blast2GO软件进行功能注释,并通过查找免疫相关的GO注释和检索免疫关键词的方法寻找免疫相关基因,经与不同物种免疫基因的比较,推测可能的免疫基因序列,并进一步分析免疫基因在不同组织和细胞中的分布.结果表明,通过注释和关键词进行筛选这2种方法具有较好的互补性;预测了位于中国明对虾头胸部的60个可能的免疫基因以及位于中华绒螯蟹血细胞hemocyte、haemocyte、肝胰腺、性腺和精巢中的250个免疫基因,这些基因包括模式识别受体、抗氧化蛋白、抗菌肽、凝集素等,其中部分参与酚氧化酶原激活系统、Toll信号通路等重要免疫过程.中华绒螯蟹血细胞中具有种类丰富的免疫基因,与已有的甲壳动物免疫系统相符合.肝胰腺中发现了模式识别蛋白、蛋白酶以及数量众多的凝集素种类,提示肝胰腺在免疫过程中也发挥了一定作用.
- 曾铮张亦陈刘逸尘郝彤孙金生
- 关键词：中国明对虾中华绒螯蟹免疫基因EST
- 中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因全长cDNA克隆和重组表达被引量：8
- 2011年
- 根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ341280),该基因全长为1457 bp,开放阅读框为330 bp,编码110个氨基酸(含有35个氨基酸的信号肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三个二硫键,有典型的CHH家族结构域。该cDNA编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,达到了85%。Northern杂交和半定量RT-PCR显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH基因表达,提示该基因的表达具有一定组织特异性。利用pCR T7/NT TOPO TA系统重组表达MIH成熟肽,纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L,纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH。研究解决了CHH家族神经肽在机体中的表达量少,直接纯化较难的问题,为深入研究MIH的作用机制和在生产上控制中华绒螯蟹蜕皮和生长奠定了基础。
- 孙妍张亦陈刘逸尘王雪惠王宇凡耿绪云孙金生杨卫军
- 关键词：中华绒螯蟹纯化
- 利用反向遗传操作系统研究诺达病毒的宿主侵染机制
- 张亦陈孙金生刘逸尘薛淑霞毛海涛刘爽
- β诺达病毒(Betanodavirus)属于分节段正链RNA病毒,基因组由两条正义RNA组成.该病毒能感染5个目17科的40多种经济鱼类,引发病毒性神经坏死症,仔鱼和稚鱼死亡率接近100%,国际兽疫组织认定其为严重疫病....
- 关键词：
- 关键词：诺达病毒水产养殖病害防治
- Kazal型抑制因子在对虾免疫应答过程中的作用研究
- 刘逸尘孙金生高虹王雪惠孙妍段虎杜宏薇
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)是重要的非特异性免疫因子,在生物体免疫应答过程(如:凝结作用、酚氧化酶原级联反应、细胞因子活化等)中发挥着重要作用,对它的研究已成为先天免疫学的研究热点.对虾是中国的主要经济甲壳动物,对其SP...
- 关键词：
- 关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂对虾病害防治
- 基于转录组学分析对中华绒螯蟹和凡纳滨对虾生长代谢与免疫调控的研究
- 甲壳动物眼柄CHH家族神经多肽激素包括高血糖激素(CHH)、蜕皮抑制激素(MIH)、性腺发育抑制激素(GIH)等,它们调控着血糖代谢、蜕皮生长和性腺发育等重要的生理功能.CHH家族神经多肽激素迄今仅在甲壳动物中被发现,且...
- 刘逸尘薛淑霞张亦陈孙妍李冉李硕郝彤孙金生
