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一株锦鲤疱疹病毒的分离与鉴定被引量：34: 2011年; 本实验对患病鲤鱼进行病毒分离及鉴定,将表现典型锦锂疱疹病毒(KHV)病症状的鲤鱼肾细胞与单层框镜鲤鱼鳍细胞(KFC)共培养,5d～6d后出现典型的KHV细胞病变,即细胞体积增大并出现空泡化;在电镜下观察到典型的KHV病毒粒子;并应用PCR方法扩增获得KHVORF25基因的849bp基因片段,连接至pMD18-T载体中,经酶切鉴定后序列分析表明,与GenBank登录的3株KHV同源性均为99.9%,命名为KHV-cj。基因进化比较显示,与KHV-J株关系较近。将病毒培养物(10-6.75TCID50)腹腔注射接种实验鱼可使其100%发病,并且症状和病理变化与自然感染KHV的鱼一致,死亡率为75%。表明本研究在国内首次分离到KHV。; 朱霞李新伟王好吕文亮周井祥; 关键词：锦鲤疱疹病毒

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF124基因的克隆及生物信息学分析被引量：3: 2013年; 为研究我国锦鲤疱疹病毒的基因背景信息,从锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ株)获得ORF124基因,应用生物信息学方法分析KHV-CJ株ORF124基因结构和功能,并与Genbank上已公布的三株KHV进行比较分析。结果显示,ORF124基因的理论分子质量为31221.96 Da,KHV-CJ株与其他三株KHV同源性均为99%;信号肽切割部位最可能位于24位的T(苏氨酸)和25位的V(缬氨酸)氨基酸之间;ORF124基因无跨膜区;氨基酸序列不存在潜在的N-糖基化位点、11个潜在的O-糖基化位点和7个磷酸化位点。该蛋白的表面抗原决定簇位点区域广泛、峰值高,预示该基因可作为基因工程疫苗的重要候选基因。; 周井祥王好吕文亮李新伟; 关键词：锦鲤疱疹病毒生物信息学分析

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF126基因的原核表达及免疫试验研究被引量：2: 2014年; 为了研究能有效预防锦鲤疱疹病毒的疫苗,选取了锦鲤疱疹病毒膜糖蛋白基因ORF126并构建重组质粒p ET32aORF126,SDS-PAGE检测获得含his标签大小为49.9 k Da的蛋白条带。蛋白纯化后免疫鲤鱼,采集不同天数血清,用间接ELISA检测抗体水平。结果显示,用10μg/尾、20μg/尾和40μg/尾的蛋白免疫后均可检测到KHV的抗体,3者之间的抗体水平差异不显著(P>0.05)。; 王好王秋举刘艳辉张雅斌吕文亮周井祥; 关键词：锦鲤疱疹病毒原核表达免疫原性

锦鲤疱疹病毒CJ株ORF25基因的克隆及生物信息学分析被引量：7: 2012年; 为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF25蛋白的结构特征和进化关系,采用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF25基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF25基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的三株KHV构建系统进化树。结果显示,获得了长1824 bp的ORF25基因,编码608个氨基酸;预测ORF25基因编码蛋白的理论分子质量为66825.44 Da,等电点为7.947;抗原表位预测显示抗原性良好;编码蛋白存在6个N-糖基化位点、25个O-糖基化位点和28个磷酸化位点;系统进化树分析显示,与锦鲤疱疹病毒美国株属同一分支。; 周井祥李新伟朱霞王好吕文亮; 关键词：锦鲤疱疹病毒生物信息学分析

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF81基因的克隆及生物信息学分析被引量：15: 2011年; 为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF81蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF81基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF81基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的3株KHV构建系统进化树。结果显示,获得了长771 bp的ORF81基因,编码256个氨基酸;预测ORF81基因的理论分子量为28 246.50 u,等电点为8.404;疏水性大于亲水性;信号肽切割部位最可能位于29位的S(丝氨酸);有4个跨膜区;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,不存在N-糖基化位点、存在6个O-糖基化位点和11个磷酸化位点;系统进化树分析显示,与锦鲤疱疹病毒以色列株属同一分支。; 周井祥李新伟王好吕文亮朱霞; 关键词：锦鲤疱疹病毒克隆测序生物信息学分析

锦鲤疱疹病毒ORF126、OFR136基因克隆、表达及免疫评价: 锦鲤疱疹病毒病(Koi Herpesvirus Diease,KHVD)是由锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus, KHV)引起的一种高传染性和高致死性的疾病,主要感染锦鲤、鲤鱼及其变种,导致鱼鳃和肾脏等器官的病...; 吕文亮; 关键词：锦鲤疱疹病毒原核表达免疫试验; 文献传递

锦鲤疱疹病毒CJ株ORF83基因的克隆及生物信息学分析被引量：2: 2011年; 为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF83蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF83基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF83基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的3株KHV构建系统进化树。结果显示,获得了长687 bp的ORF83基因,编码229个氨基酸;编码蛋白的理论分子质量为25 822.18 u,等电点为8.600;疏水性为-2.733～3.100;信号肽切割部位最可能位于第22位的G(甘氨酸)和第23位的V(缬氨酸)之间;跨膜结构分析表明,ORF83有4个跨膜区;抗原表位预测显示,编码蛋白的抗原性良好;结构预测显示,ORF83可能存在1个N-糖基化位点、11个O-糖基化位点和13个磷酸化位点;系统进化树分析显示,KHV-CJ株与锦鲤疱疹病毒美国株和以色列株属同一分支。结果表明,ORF83基因编码的蛋白可能具有较好的免疫原性,能够诱导产生中和抗体。; 李新伟周井祥朱霞王好吕文亮; 关键词：锦鲤疱疹病毒生物信息学分析

锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF136基因的原核表达及免疫原性研究被引量：3: 2013年; 为了研究能有效预防锦鲤疱疹病毒(KHV)的疫苗,以KHV-CJ株为模板克隆了锦鲤疱疹病毒ORF136基因,并构建重组质粒PET32a-ORF136,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测获得含his标签大小为36.4 kDa的蛋白条带。蛋白纯化后免疫鲤鱼,不同天数采血收集血清用间接ELISA检测抗体水平。结果显示:用10、20和40μg/尾的蛋白免疫后均可检测到KHV抗体,用PET32a-ORF136表达的蛋白20和40μg/尾的蛋白免疫后的抗体水平比10μg/尾剂量蛋白免疫后的抗体水平高但差异不显著(P>0.05)。; 王好周井祥王秋举吕文亮张亚斌郑伟; 关键词：锦鲤疱疹病毒原核表达免疫原性

锦鲤疱疹病毒病疫苗和免疫方法的研究进展: 2012年; 锦鲤疱疹病毒病（Kio herpesvirus diease，KH—VD）是由锦鲤疱疹病毒引起的一种导致锦鲤和普通鲤鱼高发病率和高死亡率的病毒病，死亡率可高达80％100％。该病主要发生在水温18～28℃的春秋两季，夏季和冬季很少或不发生，同时该病只感染鲤鱼以及其他鲤科鱼类，而不感染其他品种的鱼类，但可携带痫毒。经研究发现，该病毒为双股线性DNA病毒，其基因组大小为295kb，有156个开放阅读框（ORF），但只有少数确定了其功能。; 吕文亮周井祥; 关键词：疱疹病毒病锦鲤疫苗鲤科鱼类 DNA病毒基因组大小

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吕文亮