吕明芳
- 作品数：12 被引量：21H指数：3
- 供职机构：浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生电气工程更多>>
- 一种同步检测三种水稻病毒的方法
- 本发明涉及一种简单快速同步检测三种水稻病毒的方法，应用一套病毒特异性引物以待测样品总RNA为模板进行一步RT-PCR扩增，该引物共有6条，分别为DRS-1、DRS-2、DRB-1、DRB-2、DSR-1以及DSR-2，它...
- 张恒木吴为奇郭西贵羊健吕明芳陈剑平
- 文献传递
- 中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用
- 2023年
- 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。
- 戴远兴郭留明何婧沈峥嵘耿艳飞吕明芳袁正杰李静张恒木
- 关键词：原核表达蛋白质纯化多克隆抗体
- 外源水杨酸对水稻苗期生长与防卫相关基因表达的影响被引量：1
- 2021年
- 为探究外源水杨酸(SA)对水稻苗期生长与SA相关防卫反应的影响,用不同浓度外源SA喷施苗期日本晴水稻,利用分光光度计测定水稻苗期生长关键指标叶绿素含量,采用qRT-PCR定量分析外源SA对水稻苗期SA合成基因PAL1、SA受体基因NPR1、SA信号途径下游的转录因子WRKY45/WRKY76和防卫基因PR1a/PR1b的表达水平。结果表明,外源SA对上述水稻基因的影响不同,即低浓度SA在一定程度上促进水稻苗期叶绿素积累,并显著影响水稻苗期防卫相关基因的表达水平;高浓度SA抑制叶绿素的积累,影响水稻的正常生长。综合比较结果显示,喷施2.0 mmol·L-1外源SA对水稻苗期防卫相关基因表达的影响最为有效,该结果为进一步探索外源SA促进水稻苗期生长并提高水稻苗期防卫能力的作用研究奠定基础。
- 刘寒戴远兴吕明芳袁正杰李静严成其张恒木
- 关键词：水稻水杨酸
- 甘薯羽状斑驳病毒和甘薯褪绿矮化病毒复合侵染甘薯引起的细胞病理学研究被引量：9
- 2013年
- 2011～2012年在浙江杭州连续发现感病甘薯植株具有甘薯病毒病SPVD的典型症状,透射电镜观察发现其叶片包含有长度为600～900 nm,直径为12 nm的线状病毒粒子。使用特异性引物进行RT-PCR扩增及测序,其病原为甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)复合侵染。运用透射电镜研究SPVD引起的细胞病理学变化,观察到叶肉细胞的细胞质中含有马铃薯Y病毒属特征性柱状内含体,其结构分类为Ⅳ型;线状病毒样粒子以束状平行排列成聚集体的方式存在于细胞质中;叶绿体伸出伪足状结构包裹线粒体。在维管束细胞的筛管和伴胞中观察到弯曲线状病毒样粒子形成的聚集体,其粒子排列交错,与叶肉细胞中平行排列的病毒样粒子聚集体不同,符合毛形病毒属特征。另外还在维管束和叶肉细胞结合的部位发现复合侵染的细胞病理学特征。本研究表明危害甘薯生产的SPVD已扩散蔓延到浙江省。
- 谢礼吕明芳王芳季志仙吴列洪严成其陈剑平
- 关键词：甘薯羽状斑驳病毒复合侵染
- 调控植物果实和种子大小的新基因及其应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种调控植物果实和种子大小的新基因及其应用。本发明公开了一种与植物果实/种子大小相关的TAF12b基因，为以下任一：来源于水稻的OsTAF12b基因、来源于番茄的同源基因SlTAF12b或...
- 李静郭留明齐盼盼袁正杰吕明芳张恒木
- 一种简单快速同步检测三种水稻病毒的方法
- 本发明涉及一种简单快速同步检测三种水稻病毒的方法，应用一套病毒特异性引物以待测样品总RNA为模板进行一步RT-PCR扩增，该引物共有6条，分别为DRS-1、DRS-2、DRB-1、DRB-2、DSR-1以及DSR-2，它...
- 张恒木吴为奇郭西贵羊健吕明芳陈剑平
- 人工定点接种南方水稻黑条矮缩病毒的方法
- 本发明属于生物领域，具体公开了一种南方水稻黑条矮缩病毒SRBSDV的定点接毒方法，包括以下步骤：1)、设置定点接毒装置；2)、先将接毒管套装在待接毒的植物部位的外表，再将接毒管内腔的一端与待接毒的植物部位进行封闭；接着将...
- 吕明芳戴远兴谢礼袁正杰李静张恒木
- 水稻TAF12b基因cDNA克隆及其分子特性鉴定
- 2023年
- 【目的】明确水稻通用转录因子TFⅡD复合物组分中的OsTAF12b的选择性剪接形式并鉴定其亚细胞定位及其表达模式,为深入研究OsTAF12b功能提供基础性信息。【方法】利用5'-/3'-RACE技术扩增并克隆了OsTAF12b基因的全长cDNA;通过生物信息学进行了多重序列比对和进化树构建;利用激光共聚焦显微镜观察OsTAF12b的亚细胞定位;通过qRT-PCR技术分析了该基因在非生物逆境下的表达模式。【结果】发现OsTAF12b基因有4个选择性剪接转录本,其在编码区内仅存在一个赖氨酸的差异。OsTAF12b与其他禾本科植物成员高度同源且在进化树中聚在一个分支上。在本氏烟叶片细胞和水稻原生质体中融合GFP标签的OsTAF12b蛋白均与细胞核标记蛋白H2B共定位。OsTAF12b转录本在水稻叶片中的积累水平较高,而且在多种非生物逆境胁迫下显著上调表达。【结论】水稻OsTAF12b基因存在4种选择性剪接产物,可编码2个仅相差1个赖氨酸残基的细胞核蛋白。表达模式分析表明OsTAF12b可能参与水稻多种非生物逆境胁迫响应过程。
- 齐盼盼郭留明李静吕明芳袁正杰张恒木
- 关键词：RACE亚细胞定位非生物胁迫
- 植物富含半胱氨酸类受体激酶家族研究进展被引量：3
- 2020年
- 在植物生长发育过程中,富含半胱氨酸类受体激酶(cysteine-rich receptor-like kinases,CRKs)作为上游信号分子,在感知胁迫信号和诱发免疫应答中起着重要作用。CRK主要由信号肽、DUF26(PF01657)、跨膜结构域和胞内激酶结构域组成,其中DUF26和激酶结构域在不同植物中高度保守。生物信息学分析发现,在单子叶和双子叶植物中含有37~170个CRK成员,它们在植物生长发育和胁迫应答中发挥不同的功能。文章综述了近年来国内外植物CRK基因结构及其在生长发育、胁迫应答中的功能研究进展,对于提高农作物抗逆境能力具有重要意义。
- 耿艳飞吕明芳
- 关键词：植物逆境生长发育
- 水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测被引量：8
- 2012年
- 水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。
- 吕明芳羊健张恒木陈剑平
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白原核表达
