吴少庭
- 作品数：217 被引量：360H指数：10
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- 重组弓形虫GRA8的表达及其诱导的免疫应答
- 目的:表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法:从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化...
- 袁仕善吴少庭张仁利高世同黄达娜余新炳
- SARS冠状病毒S蛋白部分序列1的克隆与表达被引量：8
- 2003年
- 目的 构建SARS冠状病毒S蛋白部分序列 1(S1)的原核重组表达质粒 ,并分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋白的基因片段 ,并克隆至pMD18-T载体上 ;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序列分析 ;将阳性克隆的插入片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析截短型S蛋白的表达。结果 RTPCR扩增出S1蛋白的特异片段 ,其阳性克隆的序列存在 2处碱基突变第 36位G变为A ;第 333位由C变为T) ,其中第 36位为有义突变 ,第 333位为同义突变 ;阳性克隆中截短型S1蛋白的基因片段被亚克隆到表达载体pGEX - 4T - 2而构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S1蛋白的融合蛋白 ,表达的蛋白能与GST免疫血清和SARS病人血清反应。结论 成功构建了SARS冠状病毒S1蛋白的重组表达质粒 ,该质粒在大肠杆菌中表达了截短型S蛋白的融合蛋白。
- 袁仕善吴少庭秦莉黄达娜高世同张仁利余新炳
- 关键词：SARS冠状病毒基因序列严重急性呼吸综合征S1蛋白
- 弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察被引量：15
- 2001年
- 目的 观察弓形虫表面抗原 P30 DNA疫苗免疫 BAL B/ c小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用。 方法 重组质粒 p BK- P30用生理盐水稀释后 ,肌注免疫 BAL B/ c小鼠。分别于免疫后 5周和 10周 ,EL ISA测定 Ig G抗体滴度 ;取免疫鼠的血液、肺、心脏、肝脏、脾、肾脏及肌肉 PCR扩增 P30基因 ;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染。 结果 两次检测 ,均可测到特异性 Ig G抗体 ,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高 ;免疫后 5周 ,免疫鼠的上述组织均可扩增出 P30基因条带 ,但免疫后 10周仅血液扩增出特异 P30基因条带 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染 ,免疫组鼠的平均存活时间较对照组鼠延长 ,但统计学差异不显著 (P>0 .0 5 )。 结论 弓形虫表面抗原 P30DNA疫苗能诱导 BAL B/ c小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏郑春福
- 关键词：弓形虫体液免疫
- SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达被引量：4
- 2003年
- 目的 构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列 2 (S2 )的原核表达质粒 ,分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第 2 170到 2 814位碱基的基因片段 ,克隆至 pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序。用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达。结果 RT -PCR扩增出S2特异片段 ,经测序与GenBank比对存在 1处碱基突变。S2基因片段亚克隆至表达载体 pGEX - 4T - 2构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S2融合蛋白。结论 成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白。
- 秦莉吴少庭王西明袁仕善雷明军潘辉榕黄达娜高世同张仁利屈伸
- 关键词：SARS严重急性呼吸综合征冠状病毒S2蛋白基因克隆
- 弓形虫DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究被引量：9
- 2006年
- 研究弓形虫表面抗原P30和P22 DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。48只BALB/c小鼠随机分成4组:A组(NS对照组),肌注生理盐水100μl/鼠;B组(空质粒对照组),肌注pBK-CMV 100μl/鼠(1mg/ml);C组(pBK-P30免疫组)肌注pBK-P30 100μl/鼠(1mg/ml);D组(pBK-P30&pBK-P22联合免疫组)分别肌注pBK-P30和pBK-P22各100μl/鼠(1mg/ml),免疫后5周,通过ConA刺激,MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率,使用间接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CD8+T细胞群进行测定。免疫后10周,免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染。结果表明,ConA刺激小鼠脾T淋巴细胞均发生增殖反应,疫苗免疫组略高于两对照组,但4组之间的差异均无显著性(P>0.05)。T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+T细胞在各组的增殖均不明显(P>0.05),但两免疫组CD8+T细胞数量升高,CD4+/CD8+比值降低,与空质粒pBK-CMV对照组和NS对照组之间差异均有显著性(P<0.05,P<0.01),pBK-CMV对照组与NS对照组之间差异也有显著性(P<0.01),两免疫组之间差异无显著性(P>0.05)。弓形虫速殖子攻击感染,联合免疫组平均存活时间较两对照组均延长(P<0.05)。但两免疫组间、pBK-P30免疫组与两对照组之间差异无显著性(P>0.05)。弓形虫DNA疫苗能诱导BALB/c鼠产生特异性细胞免疫应答及部分抗虫免疫保护作用,此两种DNA疫苗联合免疫有一定的免疫保护效果。
- 占国清吴少庭高世同李国光
- 关键词：弓形虫免疫
- 间日疟原虫海南株SSUrRNA编码基因的克隆及其序列分析
- 2011年
- 目的克隆间日疟原虫海南株红内期小亚基核糖体核糖核酸(SSUrRNA)编码基因片段,并进行序列特征分析。方法采用聚合酶链反应技术从海南间日疟患者血样DNA中扩增出间日疟原虫SSUrRNA基因片段,纯化后与pGEM-Teasy质粒连接构建重组子并转化大肠杆菌JM109;阳性克隆以双酶切和PCR鉴定后,进行序列测定,采用BLAST软件分析其特征。结果 PCR扩增出间日疟原虫红内期SSUrRNA基因特异性片段大小约为998 bp;阳性克隆重组质粒经双酶切及PCR鉴定与预期结果一致;核酸序列测定显示插入的SSUrRNA基因扩增片段,含有998个核苷酸,与GenBank中的间日疟原虫Sal 1株、Pv2008/TR/DEL株及El Salvador株相同序列进行比对,其同源性均大于99%。结论成功克隆间日疟原虫海南株红内期SSUrRNA编码基因序列,该序列在不同地理株间相对稳定保守。
- 黄达娜高世同张仁利张荣锦耿艺介李晓恒吴少庭
- 关键词：间日疟原虫
- 结核分枝杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中的构建及其表达被引量：3
- 2011年
- 目的在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6基因。方法以重组质粒pET23a-ESAT-6为模板,亚克隆目的片段ESAT-6至酵母菌分泌表达载体pPICZaA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法分析。结果成功构建了pPICZaA-ESAT-6毕赤酵母表达重组质粒。经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为18kDa的蛋白。蛋白质印迹(Western blot)显示,18kDa蛋白被活动性肺结核病人血清抗体识别。结论在毕赤酵母菌中成功表达了带有信号肽ESAT-6基因,为进一步研究新型单位疫苗打下坚实的基础。
- 付小强刘洪波吴少庭
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6毕赤酵母菌基因表达
- 弓形虫主要表面抗原P30基因在耻垢分枝杆菌中的表达
- 目的克隆弓形虫RH株主要表面抗原P30的编码基因,构建重组分泌型分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒pBCG3000-p30,并在耻垢分枝杆菌中进行表达。方法 PCR方法从重组质粒PET23a-P30(本室保存)扩增P30基因...
- 雷蕾吴少庭蔡昌学
- 关键词：弓形虫P30耻垢分枝杆菌
- 文献传递
- 金葡菌野生株SEB基因的亚克隆及其原核表达
- 2007年
- 目的亚克隆金葡菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中表达,以获得重组SEB(rSEB)蛋白。方法将含有SEB基因的质粒pMD-18T/SEB双酶切获得目的片段,插入表达载体pGEX-4T-2中构建重组子pGEX-4T-2/SEB,并转化E.coliJM109感受态菌,阳性克隆以双酶切和PCR法鉴定;含重组质粒的工程菌以IPTG诱导表达rSEB蛋白;表达产物进行SDS-PAGE分析,并采用B-PER GST融合蛋白试剂盒纯化重组rSEB,West-ern blot鉴定其免疫反应性。结果重组质粒经双酶切和PCR扩增鉴定均获得约705 bp的基因片段,与预期结果相一致;诱导表达的含GST的融合重组rSEB蛋白分子质量单位约为53 ku,纯化后作SDS-PAGE电泳显示一条蛋白带,Western blot显示rSEB能够被兔抗SEB抗体识别。结论金葡菌野生株SEB在大肠埃希氏菌中得到有效表达,并获得电泳级纯度的重组rSEB,重组蛋白具有一定的免疫活性,为进一步研究其生物毒性与开发诊断试剂提供了生物材料。
- 高世同张仁利刘会娟秦莉耿艺介黄达娜吴少庭
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B
- 严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白部分序列1的纯化及免疫活性分析
- 2006年
- 目的表达和纯化严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒S蛋白部分序列1(S1),分析其诱导的免疫应答。方法大量诱导表达SARS冠状病毒S1蛋白,经超声裂解细菌后,取上清液进行亲和层析以纯化S1蛋白,并冻干浓缩;用纯化的S1蛋白免疫小鼠3次,间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测产生的抗体IgG及其亚类的滴度,分析S1蛋白诱导的免疫应答。结果表达的S1蛋白主要存在于包涵体中,裂解上清液中存在少量S1蛋白;亲和层析纯化获得了能被SARS患者混合血清识别的S1蛋白,融合蛋白免疫小鼠3次后诱导产生了高滴度的IgG抗体和Th1/Th2型的免疫应答。结论纯化的S1蛋白具有良好的免疫学活性。
- 袁仕善吴少庭秦莉黄达娜张仁利高世同余新炳
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒属蛋白质S纯化
