周辰
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：南方医科大学中医药学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 哺乳动物细胞表面展示人源HIV特异性全长抗体库的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建人源的HIV特异性全长抗体基因库并获得可稳定展示全长抗体的哺乳动物细胞库。方法提取HIV患者外周血淋巴细胞的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体重链可变区(VH)基因,插入哺乳动物细胞表达载体pDGB4,转化感受态大肠杆菌TOPO-10,构建抗体基因库,随后将抗体库的质粒DNA稳定转染FCHO细胞,获得可稳定展示全长抗体的细胞库,用流式细胞仪分析全长抗体在FCHO细胞表面的表达。结果本研究以少量外周血淋巴细胞RNA为来源,构建了库容量为7.77×104的全长抗体基因库;将基因库的质粒DNA稳定转染FCHO细胞后,获得了可稳定展示全长抗体的细胞库;经流式细胞仪分析,有67%的细胞表面可表达可被检测到的全长抗体。结论本研究构建了人源的HIV特异性全长抗体基因库并获得可稳定展示全长抗体的哺乳动物细胞库,为治疗HIV感染的特异性抗体的筛选打下了基础。
- 周烨李长征陈振瑞贺微杨于军刘叔文吴曙光马丽英姜世勃周辰
- 关键词：人源抗体
- 快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库
- 目的:快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法:分离外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用Dgen生物技术公司抗体基因库构建试剂盒,用RT-PCR的方法扩增抗体重链可变区(VH)和全长Kap...
- 贺微周辰刘叔文
- 文献传递
- 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库被引量：2
- 2013年
- 目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库)。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达。结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×10^(11)[(1.7×10~6×70%)×(3.1×10~5×90%)]。成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×10~5。结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32×10^(11),二级抗体库库容量达到9×10~5,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础。
- 蓝开健张哲欢梁中锟王俊洁娄海波周元平刘叔文李长征谭万龙周辰
- 关键词：膀胱癌流式细胞仪检测
- 系统性红斑狼疮儿童特异性全长抗体基因库的构建与分析被引量：3
- 2012年
- 目的构建系统性红斑狼疮(SLE)儿童个体特异性哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库。方法采集SLE确诊患儿外周血,分离外周血淋巴细胞,提取外周血淋巴细胞总RNA,用RT-PCR扩增全长Kappa轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因、构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,将抗体基因库转染293T细胞,流式细胞仪分析抗体在293T细胞表面的表达。结果以0.8μg总RNA为模板,用6套引物成功扩增全长Kappa轻链和重链可变区基因,插入表达载体,构建获得的重链基因库容量为9.4×104,轻链基因库容量为8.4×104。随机挑选的10个重链克隆有8个含有正确的阅读框架,编码8个不同的氨基酸序列,10个轻链克隆7个含有正确的阅读框架,编码7个不同的氨基酸序列。流式细胞仪分析挑选的单克隆和抗体基因库,均检测到全长抗体在293T细胞表面的表达,理论上抗体库中可表达的抗体多样性可以达到109。结论以0.8μg总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,成功构建SLE儿童特异性全长人抗体基因库,并在293T细胞表面成功展示SLE儿童个体抗体库中的全长抗体,为进一步研究SLE儿童自身抗体的特点及自身抗体在SLE发病机制中的作用及临床应用打下良好基础。
- 周志刚朱美华梁中锟陈振瑞贺微李长征谭万龙姜世勃刘叔文周烨周辰
- 关键词：系统性红斑狼疮儿童
- 哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库
- 目的：构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法：分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型...
- 谭万龙蓝开健周辰
- 关键词：膀胱癌流式细胞仪检测
