姜曼
- 作品数：80 被引量：206H指数：7
- 供职机构：第三军医大学基础部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 嵌合跨膜型人CD55基因的重组逆病毒表达质粒的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法 采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5’末端自身的StuI位点连接 ,构建嵌合跨膜型CD5 5DNA片段 ,序列测定后将此嵌合CD5 5片段与pLXSN逆病毒载体连接构建重组表达质粒 ,酶切鉴定插入片段的方向。结果 DNA序列测定证实所构建的嵌合跨膜型CD5DNA阅读框完整、连接部位序列正确 ;HindⅢ酶切鉴定得到了正向插入的CD5 5TM pLXSN重组表达质粒。结论 我们成功构建了嵌合跨膜型CD5 5DNA片段及含此片段的重组逆病毒表达载体CD5 5TM pLXSN ,为进一步在真核细胞中表达嵌合分子 ,比较研究GPI锚固型CD5 5分子与细胞活化信号转导的关系建立良好对照并为应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了分子生物学基础。
- 杜瑞琴白云黎万玲姜曼
- 关键词：质粒
- 免疫磁珠法分离人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞被引量：13
- 2007年
- 目的建立人外周血单个核细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离方法(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率。方法采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人外周血单个核细胞中的CD4+CD25+调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CD4+T细胞,再用抗CD25+的磁珠阳性分选CD4+CD25+T细胞。分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;胞内因子染色检测其转录因子FOXP3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞增殖抑制效应。结果阴性分选CD4+T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4+CD25+Treg细胞的纯度为(95.1±1.2)%。胞内因子染色FOXP3在CD4+CD25+Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%3。H-TdR掺入法检测其对CD4+CD25-T细胞具有明显的抑制作用。结论采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快速地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4+CD25+Treg,为进一步研究其功能提供了方便。
- 牛微杨曌尚小云傅晓岚唐艳黎万玲姜曼王莉吴玉章
- 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞
- 重组跨膜型人CD55分子在小鼠NIH3 T3细胞上的表达及其补体溶破保护功能的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 :在小鼠NIH3T3细胞转染表达人天然GPI锚固型CD5 5和重组跨膜型CD5 5 TM分子 ,观察比较它们对人补体溶破异源细胞的抑制功能。方法 :将带有CD5 5cDNA、CD5 5 TMcDNA的重组逆病毒表达质粒CD5 5 pLXSN、CD5 5TM pLXSN经脂质体法转染PA317细胞 ,用病毒上清感染小鼠成纤维母细胞NIH3T3。经G418加压筛选 ,利用FACS检测获得表达CD5 5和CD5 5 TM分子的阳性细胞克隆 ,通过MTT比色法比较两种分子对人血清补体溶破细胞的抑制功能有无差别。结果 :细胞转染筛选获得多个表达跨膜型人CD5 5分子的NIH3T3细胞克隆 ,补体杀伤试验证实其具有抑制人补体溶破的功能 ,且两种分子的补体抑制功能无明显差异。结论 :成功地建立了稳定表达天然CD5 5、跨膜型CD5 5分子的小鼠NIH3T3细胞 ,证实其表达的GPI型CD5 5分子和CD5 5TM分子均具有抑制人补体溶破细胞的功能 ,为进一步探讨应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了基础。
- 姜曼杜瑞琴黎万玲白云
- 关键词：基因转染NIH3T3细胞
- 质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究被引量：5
- 2005年
- 目的 构建针对SARS CoV的特异性siRNA质粒 ,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染。方法 根据SARS CoV的全长基因序列 ,以 4个不同的部位为靶点 ,分别设计、合成含有 19nt干扰序列的一段寡核苷酸 ,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3 .1 H1载体中 ,构建表达siRNA的质粒。采用脂质体法将质粒转染VeroE6细胞 ,经潮霉素抗性筛选后 ,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验 ,以观察干扰效应。结果 对所构建的质粒分别测序 ,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致。用不同浓度的SARS CoV感染转染质粒后的细胞 ,与阴性对照相比 ,其细胞病变减轻、活细胞显著增加 ,病毒空斑明显减少。结论 利用RNA干扰能有效的抑制SARS CoV在细胞中的复制 ,并对细胞有保护作用 ,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法。
- 李阳倪兵石辛甫王希良何仰东肖宇姜曼黎万玲吴玉章
- 关键词：SARS病毒RNA干扰小干扰RNA基因治疗
- 人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达
- 2003年
- 目的 构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法 从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,转染 2 93T细胞瞬时表达 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果 测序证实构建的CD13 7与CD13 7 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实CD13 7 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与免疫印迹证实其为人CD13 7 Fc蛋白。结论 获得了纯化的hCD13 7 Fc融合蛋白 ,为探讨CD13 7在免疫自稳调节中的地位 ,以及探索CD13 7的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础。
- 黄钢黎万玲姜曼白云
- 关键词：CD137真核表达
- 医学免疫学实验技术课程MCAI模式探讨被引量：2
- 2004年
- 从实验技术课程教学设计和计算机软件工程学的设计理念出发,对医学免疫学实验技术课程的教学设计与多媒体学习平台的结构进行探讨,并在此基础上提出以培养学生三维知识建构能力为目的,运用网络结构进行MCAI软件平台开发为手段,从而对实验技术课程进行优化教学的MCAI模式.
- 姜曼周镜然倪兵
- 关键词：优化教学教学设计软件工程
- 抗人补体膜攻击复合物新抗原单克隆抗体的制备及鉴定
- 2002年
- 目的 研制针对人补体膜攻击复合物 (MAC)新抗原的特异性单克隆抗体。方法 在兔红细胞表面组装人MAC ,分离纯化RBC膜蛋白。以初步纯化的MAC免疫Balb c小鼠 ,取免疫小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,采用免疫斑点杂交的方法分别以纯化的单一补体成分C5、C6、C7、C8、C9和MAC同时进行阴性和阳性筛选。结果 获得了 2株仅与MAC反应而不与各单体成分反应的单克隆抗体。进一步以体外组装的补体终末复合物进行鉴定 ,证实所获单克隆抗体可特异性识别MAC复合物中C9分子暴露出的新抗原。经ELISA法测定 ,2株杂交瘤细胞的培养上清液和腹水效价分别为 1× 1 0 -3 ,1× 1 0 -3和 1× 1 0 -6,1× 1 0 -7;单克隆抗体的重链均属小鼠IgG1亚类 ,轻链均为κ型。结论 获得了 2株特异性识别MAC新抗原的单克隆抗体。
- 王更银陈兴白云周镜然李烛姜曼
- 关键词：补体膜攻击复合物新抗原单克隆抗体
- 人CT抑制物的分离及其抗血清的制备被引量：1
- 1990年
- 本文采用PEG沉淀及抗人C_1^--INH Sepharose 4B、抗人IgG Sepharose 4B及抗人白蛋白Sepharose 4B柱层析等步骤,自人血清分离补体调节蛋白C_1^--INH,该制剂经免疫电泳试验,位于α_3,SDS-PAGE分析呈现分子呈为105KD的主带和90KD的次带,免疫家兔获抗C_1^--INH单价抗血清,以上结果表明,分离的C1-INH具有高纯度及免疫学活性。
- 谢佩蓉姜曼郑萍朱锡华
- 关键词：抗血清
- 学习任务驱动的医学实验课程教学设计被引量：3
- 2005年
- 在医学生的实验课程教学中,教学设计多是以教师为主导的单一实验主题的模拟实验技术操作学习,这种被动技能性学习设计方式,影响了学生在实践性教学中的知识抽象化和学习迁移.本文从提高知识认知程度的角度出发,以学习任务驱动学习动机,构建以目标的行动计划模式和以概念图实现理论与实验知识结构化的实验课程教学设计.
- 姜曼倪兵
- 关键词：实验课程教学设计概念图
- Alzheimer病Aβ_(1-42)肽和IL-4双基因表达质粒的构建和表达鉴定
- 2004年
- 目的 构建Alzheimer病Aβ1 - 42 基因和小鼠IL 4共表达质粒 ,探讨其作为Alzheimer病特异疫苗的可能性。方法 全基因合成Aβ1 - 42 基因片段并克隆入pMD18 T载体中 ,再从Aβ1 - 42 pMD18 T重组质粒中切下Aβ1 - 42 基因并克隆入TA CE5真核双表达载体中 ,构建重组质粒Aβ1 - 42 TACE5。从pUMMV mIL4质粒中切下mIL 4并克隆到重组质粒Aβ1 - 42 TACE5中 ,构建双表达重组质粒Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5测序鉴定克隆基因的正确性。脂质体试剂Lipofectamine 2 0 0 0体外转染Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5重组质粒于BHK 2 1细胞中 ,用ECL Western blot方法鉴定mIL 4和Aβ1 - 42 能在该细胞中共表达。结果 正确构建了Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5双表达重组质粒 ,并且在转化此质粒的BHK 2 1细胞中检测出了Aβ1 - 42 和mIL 4的表达。结论 双表达重组质粒Aβ1 - 42 mIL 4 TACE5基本可以满足其作为Alzheimer病特异的候选DNA疫苗的要求 。
- 倪兵杨日高黎万玲姜曼李艳秋范文辉吴玉章
- 关键词：ALZHEIMER病AΒ1-42基因疫苗
